Методика проведения анализа крови на туберкулез пцр

Что такое анализ мочи методом ПЦР?

Полимеразная цепная реакция руководствуется принципом молекулярной биологии. Чтобы исследовать урину (или другой биоматериал) используют специальные ферменты. Они могут копировать ДНК микроорганизмов. Специалисты сравнивают материал с имеющейся базой и определяют, есть ли заражение. В случае положительного ответа выясняется степень инфицирования и тип возбудителя.

Тут важна точность, поэтому работники лаборатории должны иметь соответствующие знания и навыки.

Кроме туберкулеза с помощью ПЦР диагностируют и другие инфекционные болезни (гепатит, ИППП, ВИЧ, кандидоз, боррелиоз и др.).

Некоторые родители уверены, что такой метод можно использовать вместо Манту, но это не так. Даже его высокоэффективность не может заменить пробу, которая является утвержденной и обязательной во всех дошкольных и школьных учреждениях. Предоставления в детский сад или школу результата ПЦР может быть недостаточно для допуска ребенка в детский коллектив.

Что подразумевает ПЦР

. Исследование проводится с помощью специального фермента полимеразы.

Преимущества метода

ПЦР — это метод диагностики показал себя с наилучшей стороны, поэтому применяется он довольно часто, как в комплексе с другими способами, так и самостоятельно. Его преимущества:

• кратчайшие сроки изготовления. Исследование проводится быстро, примерно за 5 часов в помощью ПЦР можно обнаружить наличие бациллы туберкулёза в биологической жидкости пациента. Это особенно актуально, если нужно провести немедленное оперативное вмешательство, а перед этим получить точный диагноз;
• бывает, что другие методы диагностики противопоказаны пациенту. Например, рентгенографию можно делать далеко не всем. К тому же по снимку не всегда можно поставить диагноз, особенно если болезнь находится на ранней стадии. С помощь метода ПЦР возбудитель выявляется сразу же;
• для анализа подходит любая биологическая жидкость пациента. ПЦР мочи и слюны на туберкулёз проводится для выявления лёгочных и внелёгочных форм. Также исследование проводится и с использованием спинномозговой жидкости больного для выявления туберкулёзного менингита.
• метод абсолютно безопасен. Для его проведения достаточно получить биологическую жидкость из организма пациента. ПЦР диагностика туберкулёза у детей – это удобно и безвредно, так как флюорографическое обследование разрешено делать лишь с 18 лет, а проба Манту иногда вызывает побочные реакции;
• ПЦР – это высокочувствительный анализ. Он позволяет выявить палочку Коха при минимальной концентрации микобактерий;
• с помощью особого фермента полимеразы недуг диагностируется на любой стадии – от ранней до запущенной;
• данный метод эффективен при диагностике рецидива болезни;
• этот метод – прорыв в постановке точных диагнозов на ранних стадиях заболевания. Это позволяет начать лечение в кратчайшие сроки и уничтожить болезнетворные микроорганизмы, когда они ещё не успели оказать необратимое негативное влияние на органы и системы человеческого организма.

Где сделать анализ ПЦР на туберкулёз

Государственные клиники не имеют возможности приобрести специальное оборудование для проведения анализа ПЦР, а правительство не видит смысла в финансировании этой статьи, так как туберкулёз можно диагностировать и другими способами. Такое исследование чаще всего проводится именно в частных клиниках, которые могут себе позволить приобрести необходимую аппаратуру.

Недостатки метода

Высокая цена – это не единственный недостаток ПЦР. Кроме дороговизны, у метода есть другие минусы и недочёты, например:

• ПЦР на туберкулёз даёт положительный результат даже после лечения, так как принимает мёртвые клетки за живые бактерии, поэтому данный метод не подходит в качестве контрольного обследования пациента для подтверждения его выздоровления;
• бациллы туберкулёза мутируют, а их ДНК видоизменяется, что может повлиять на достоверность результата;
• анализ крови ПЦР на туберкулёз осуществляется редко, так как присутствие палочки Коха в этих биологических жидкостях обнаружить крайне сложно. Это возможно только на последних стадиях или при сепсисе. Обычно для диагностики берётся мокрота больного;

Особенности расшифровки результатов

Трактовка полученных данных проводится исключительно врачом во время консультации. Также особенности интерпретации результатов зависят от методики проведенного исследования и его вида.

Расшифровка ОАК

При интерпретации данных общеклинического анализа врачи обращают особое внимание на показатели скорости оседания эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов:

1. У здорового человека показатели скорости оседания эритроцитов колеблются в диапазоне от 10 до 15 единиц. При туберкулезе легких эти цифры резко возрастают, и могут достигать 50 ед./минуту. Если же они значительно выше, это является поводом для незамедлительной госпитализации пациента и начала интенсивного лечения.
2. Уровень лейкоцитов у пациентов с вялотекущим течением заболевания находится на уровне 6×109 на литр. Если же имеет место острая или тяжелая фаза заболевания, показатели могут возрастать до 12, или даже 15×109 на литр.

3. Несмотря на снижение гемоглобина, общий состав эритроцитов у пациентов с туберкулезом остается, как правило, в пределах нормы. Сильно пониженные показатели фиксируются при милиарной форме заболевания, а также при развитии казеозной пневмонии.

Примечание. Острая форма туберкулеза легких, его стремительное прогрессирование или развитие осложнений приводит к изменениям лейкограммы. Так, у большинства пациентов с подобными отклонениями фиксировались случаи умеренного лейкоцитоза. Показатели лейкоцитов при этом достигали отметок в 10-15×109/литр. Гораздо реже на фоне туберкулеза легких возникает лейкопения – снижение уровня лейкоцитов.

ПЦР и ИФА

Расшифровка показателей диагностики крови при туберкулезе одинакова для ПЦР и метода ИФА. Результаты на бланке могут указываться двумя способами:

1. С помощью «плюсов» и «минусов». Если в биоматериале пациента был выявлен возбудитель палочки Коха, напротив него будет поставлен «плюсик». В графах с другими видами инфекциями либо будет стоять прочерк, либо они просто останутся пустыми.

2. При помощи обозначений «положительный» или «отрицательный». Принцип выставления результатов полимеразной цепной реакции или иммуноферментного теста идентичен предыдущему.

Несмотря на высокую точность современных медицинских технологий, иногда тесты могут давать ложноположительные результаты даже при правильной подготовке к ним. Не стоит сразу паниковать, увидев тревожные данные на бланке. Лучше перепроверить все еще раз, повторно сдать кровь и подождать, пока будут готовы новые результаты.

Если же они идентичны предыдущим, необходимо обратиться к врачу, выдавшему направление на тест. Именно он принимает решение о необходимости назначения лечения, а также разрабатывает схему терапии для каждого больного отдельно.

Анализ на туберкулез у детей – Манту, ПЦР или ИФА?

Исследования по вышеописанным методикам далеко не всегда проводятся детям. Более распространенным способом выявления туберкулеза является проба Манту. Она основана на подкожном введении туберкулина и отслеживания за реакцией организма на него на протяжении нескольких дней.

При отрицательном результате кожа на руке будет просто немного выступать в месте инъекции. Если же проба положительная, в обработанной зоне появится заметная припухлость красного цвета. Помимо этого, отек будет постепенно увеличиваться. Именно при таких тревожных результатах Манту ребенку назначаются дополнительные исследования.

Проба Манту

Как правило, проводятся тесты ПЦР или ИФА, так как они считаются самыми информативными. Но при необходимости может быть выполнен целый комплекс лабораторных исследований.

Использование биохимической или другой методики выявления палочки Коха по крови имеет ряд преимуществ. Среди них следует отметить:

• быстроту проведения забора биоматериала;
• относительную кратковременность подготовки результатов (1-2 дня);
• низкую вероятность возникновения необходимости в повторном тесте;
• минимальный риск получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов исследования;
• высокую точность проводимых анализов.

Лабораторные тесты помогают обнаружить болезнь даже тогда, когда пациент сам не ощущает никаких изменений в своем самочувствии. Именно это является главным достоинством анализов крови при подозрении на развитие туберкулеза.

ПЦР диагностика

Сегодня во многих клиниках можно пройти анализ крови на туберкулез вместо манту. Что это такое? Исследование называется ПЦР – полимеразная цепная реакция, оно является высокочувствительным. Это обусловлено тем, что с его помощью можно выявить даже 1-2 микробактерии возбудителя. Достоверность ПЦР очень высокая– в 98% происходит выявление патологических клеток. Поэтому ученые считают полимеразную цепную реакцию важным открытием в микробиологической науке за последнее время. ПЦР диагностика — это метод выбора Всемирной организации здравоохранения при туберкулезе.

Диагностика ПЦР на туберкулез эффективна и при контроле качества лечения, так как с помощью исследования врач может определить устойчивость бактерий к лекарствам

Устойчивость к лекарственным препаратам при лечении является очень серьезной проблемой, она снижает эффективность лечения в разы, поэтому так важно для врача-фтизиатра знать о ней у конкретного пациента. Это помогает правильно определить тактику лечения

Также анализ крови на туберкулез просто необходим для людей, которые уже перенесли это заболевание, для выявления рецидивов. Исследование дает возможность диагностировать рецидив на раннем этапе, что позволяет вовремя начать лечение и предупредить развитие серьезных осложнений. Свою эффективность анализ на туберкулез доказал и в тех случаях, когда его локализация внелегочная.

К анализу крови ПЦР, так же как и к иммуноферментному исследованию не нужны особые подготовки. Иногда требуется перед исследованием отменить на некоторое время прием определенных лекарств. Об этом предупредит лечащий врач, который и направит на исследование.

Никаких возрастных ограничений для проведения исследования на микробактерии туберкулеза нет. Анализ крови ПЦР делают взрослым и детям. Так как он абсолютно безопасен. Но все же в школах и садиках чаще детям делают пробу Манту, а ПРЦ диагностику больше используют для взрослых людей. Особенно для тех, у кого ранее был туберкулез.

Проведение исследование ПЦР

Сдать свою кровь на туберкулез можно в специализированной лаборатории. Кровь при анализе на туберкулез собирается в пробирку с веществом, которое не дает ей сворачиваться

Важно соблюдать все условия стерильности, а также запрещено взбалтывать пробирки с кровью на туберкулез при анализе, так как будет затруднен процесс отделения ее клеток от плазмы

Далее происходит лабораторный процесс, при котором отделяется плазма от клеток, и лаборант через микроскоп определяет есть ли клетки возбудителя в биологическом материале. Заключительный этап исследования основывается на создании определенных условий для клеток. То есть в осадочный материал добавляются вещества, которые спровоцируют реакцию, также при этом должны быть определенные температурные показатели. Таким веществом является фермент транскриптаза. В результате этих действий получается обновленный материал ДНК, который должен расшифровываться специалистом. После этих действий лаборант может дать точное заключение о наличии или отсутствии туберкулеза у человека.

Биологическим материалом для приведения анализа ПЦР может быть, как кровь, так и моча. Для проведения анализа мочи на ПЦР необходима утренняя порция в количестве 20-30 мл. Для проведения исследования крови потребуется 1 мл венозной крови.

Расшифровка

Расшифровки анализов ПЦР можно получить в довольно короткий срок – 1-2 дня. А в некоторых случаях его проводят всего за 4-5 часов. Это уместно если результаты нужны срочно, перед экстренной операцией и т.д.

ПЦР расшифровка может быть простой и сложной. В первом случае результат будет отрицательным и никаких патологических клеток обнаружено не будет, или же их будет очень мало. Сложная ПЦР расшифровка нужна при высоком содержании клеток, так как при этом необходимы точные расчеты. Есть определенные нормы, по которым квалифицированный специалист расшифровывает анализ крови на туберкулез. При этом он может диагностировать стадию и причины заболевания.

Правила подготовки к анализу и проведение

Чтобы избежать искажения результатов, необходимо правильно подготовиться к процедуре диагностики. Во время подготовки необходимо исключить приём антибиотиков, алкогольных напитков. Нельзя нервничать, есть жирные блюда. Анализ проводится утром на голодный желудок.

Медработник берет кровь у пациента из вены. Все инструменты, задействованные при этой процедуре, должны быть стерильными. После забора крови она переносится в пробирку, проводятся её лабораторные исследования. Например, при проведении ПЦР биологическую жидкость делят при помощи центрифуги на компоненты и плазму. В пробирке есть вещество, которое вступает в реакцию с кровью. На основании проведённого анализа, удаётся выявить возбудителя и его концентрацию.

Расшифровка анализа, нормальные показатели, отклонения

При диагностировании с помощью ПЦР могут показать положительный или отрицательный результат.

• Если в ДНК нет патогенного Агента, то проба признается отрицательной;
• Если в крови обнаружены микроорганизмы, провоцирующие туберкулёз или их следы, то проба считается положительной. Это говорит об инфекции в организме.

Расшифровка иммуноферментного анализа основана на определении присутствия или отсутствия в биологической жидкости иммуноглобулина. Если он обнаружен, то врач говорит о возможности инфицирования, даже если у пациента нет симптомов.

Отрицательная проба свидетельствует о полном отсутствии в крови разновидности иммуноглобулина. При общем анализе крови вероятность заражения растёт при увеличении скорости оседания эритроцитов (СОЭ) более 60 единиц и росте концентрации эозинофилов.

Популярно Устраняем боль после травм и операций уколами Артрозилена

Что лучше делать манту или анализ крови?

Манту считается первичным способом диагностики, основанным на реакции иммунитета. Если у врача возникает подозрение на наличие патологии, то диагностирование дополняют анализом крови на туберкулёз.

Ннедостатками манту является ряд противопоказаний, при которых проведение пробы невозможно. В некоторых ситуациях манту обладает негативным действием.

Полная альтернатива манту — анализ крови. Он безопасен, но, когда пациент страдает гемофилией и другими патологиями, приводящими к плохой свёртываемости крови. На от пробы манту невозможно выявить форму заболевания, локализацию бактерий, назначить на основании такого исследования лечение туберкулёза.

Анализ крови на туберкулез вместо манту ребенку, в сравнении с пробой лучше. Его достоверность составляет 98%, если пациент правильно подготовился к исследованию. Результаты анализы на туберкулёз будут готовы за 4–5 часов. С помощью этих методов можно определить тип заболевания, его тяжесть, назначить комплексную терапию для лечения болезни.

Но при этом проба ПЦР является положительной даже, если патогенный агент в организме мёртв. Это происходит и если человек когда-то болел туберкулёзом, даже если он вылечился и никаких симптомов не выявляется.

Кому необходимо сдать кровь на инфекцию

В группу риска входят медицинские работники, люди, работающие в колониях и тюрьмах. Нужно периодически сдавать анализ на туберкулёз пациентам, страдающим алкогольной и наркотической зависимостью, работникам приютов

Важно проходить диагностику людей, которые страдают открытой формой инфекции, сниженным иммунитетом. Проводят анализ также после химиотерапии при онкологических заболеваниях

Высокая вероятность заражения отмечается у жителей Нигерии, Южной Африки, Китая, Индии. А также в группу риска входят люди с частыми бронхитами, пневмониями, диабетики, пациенты с хронической недостаточностью почек, язвенной болезнью.

Альтернативные методы исследования

Кроме сбора крови и манту, пациенту может быть предложен анализ мокроты, бронхоскопия, Диаскинтест. При аллергических реакциях детей на манту нередко проводят Диаскинтест. Но он не способен распознать этапы развития болезни, является ли он инкубационным или туберкулёз перешёл уже в активную фазу.

Нередко пациентам предлагают пройти анализ мочи, чтобы выявить изменения в мочевыводящей системе из-за туберкулёза. При подозрении на заболевание проводится рентген грудной клетки. Его используют даже вместо пробы манту у детей, но пациент получает лучевую нагрузку. Рентген нельзя использовать постоянно.

Анализ крови на туберкулез – что показывает

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

1. Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
2. Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%);
3. Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
4. Повышение базофилов.

Лабораторный анализ на туберкулез не является специфичным ни для детей, ни для взрослых. Подобные изменения характерны для многих бактериальных или вирусных инфекций.

Показатели гемограммы предоставляют интерес для фтизиатров для определения стадии туберкулезного инфицирования.

При активной инфильтрации прослеживается лейкоцитоз вследствие увеличения количества нейтрофилов. В клетках появляется патологическая зернистость, что свидетельствует об интоксикации крови.

Очаги распада приводят к уменьшению числа эозинофилов, нейтрофилов, молодых форм, лимфоцитов. При диссеминации возникает абсолютный моноцитоз. На фоне рассасывания увеличивается число лимфоцитов и эозинофилов.

При уплотнении очагов гемограмма не характеризуется изменениями.

Анализы у детей на туберкулез: туберкулинодиагностика

Длительное время фтизиатры ставили реакцию Манту. Такие анализы на туберкулез позволяли выявлять не только активную инфекцию, но и инфицирование. Суть пробы заключалась в подкожном введении туберкулина – вещества, которое обуславливало аллергизацию организма. Для теста применялся материал, получаемый из Micobacterium Bovis. После подкожной инъекции получается папула, которая отражает реакцию организма на проникновения микобактерии:

1. Нормальная папула – размер от 5 до 16 мм;
2. При отсутствии реакции – ослабление иммунитета, отсутствие микобактерии;
3. Большая папула – наличие антигенов бактерии, контактирование с носителем туберкулезной палочки.

Метод не считается надежным из-за большого количества ложноположительных реакций. При сомнительных результатах требовалось подтверждение пцр. С появлением диаскинтеста (дст) ситуация изменилась. Сочетанное использование способов позволяет получить более достоверные результаты.

Преимущества анализа

Анализ крови ПЦР на туберкулез имеет ряд преимуществ перед другими методами исследования, такими как реакция Манту или рентген. Среди них можно выделить следующие качества:

1. Быстрота выполнения. По сравнению с другими анализами ПЦР делается в течение нескольких часов.
2. Для проведения процедуры можно использовать не только кровь, но и другие биологические выделения организма.
3. Процедура не имеет противопоказаний, ее можно проводить не только взрослым, но и детям. Также подходит беременным женщинам без вреда для их здоровья.
4. Метод позволяет выявить заражение крови бактериями на самых первых стадиях, когда еще нет внешних признаков заболевания.
5. Методика позволяет выявить возбудителя при самых малых количествах бактерий в материале.
6. Дает хороший эффект при исследовании больного, заразившегося повторно.
7. Анализ можно брать независимо от того, как себя чувствует пациент. Например, реакция Манту делается, если у больного нет простудных заболеваний и повышения температуры. В данном случае таких ограничений нет.

Как видно из предоставленного списка, этот метод диагностики гораздо предпочтительнее, чем другие. Он абсолютно безвреден для пациентов, страдающих аллергическими реакциями. Его можно успешно использовать взрослым и детям. Методика позволяет сэкономить время на диагностику и быстрее начать лечение.

Метод также удобен для людей из провинции, где нет соответствующих лабораторий. Им не приходится приезжать несколько раз в клинику, достаточно одного дня, чтобы получить результат анализов и назначение лечения от врача.

Вывод

ПЦР-диагностика – это один из эффективных диагностических методов, активно используемых в современной медицине. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза может осуществляться как самостоятельно в домашних условиях, так и при помощи специалиста. Если мокрота не отходит, то делают бронхоскопию. Важна предварительная подготовка. Правильно сдать биоматериал – это уже полдела. Мокрота при туберкулезе будет иметь в себе микобактерии, обнаружить которые при ПЦР не составит труда, даже если их там небольшое количество. Огромный плюс данного способа – это выявление заболевания в первые часы после заражения. Использовать в диагностических целях можно как у взрослых, так и у детей.

Даже внушительная сумма не может остановить человека получить достоверную информацию касательно здоровья близкого человека или его собственного.