Количественный анализ на вирус гепатита с: расшифровка результатов

Виды анализов на вирус гепатита С

Для выявления маркеров на гепатит С проводят 2 основных типа исследования – молекулярный и серологический. Специфические иммуноглобулины в сыворотке крови сигнализируют о поражении печени инфекцией. Эти исследования выполняются для первичного выявления антигенов и антител к HCV.

Для дифференциальной диагностики проводятся дополнительные исследования, по результатам которых определяют стадию болезни, подходящую тактику лечения.

Серологические маркеры

Серологические показатели гепатита С (антитела) – белковые соединения в крови, которые синтезируются иммунной системой в ответ на проникновение в организм вируса Hepatitis C Virus (HCV). 

В ходе серологического исследования выявляют anti-HCV, то есть антитела к вирусным частицам. Положительные результаты указывают на перенесенную болезнь или активное воспаление печени.

В большинстве современных клиник маркеры вирусного гепатита С определяются в ходе иммуноферментного анализа (ИФА), суть которого заключается в следующем:

1. из сыворотки крови захватывают белковые комплексы;
2. их обрабатывают мечеными ферментами;
3. по наблюдаемой цветной реакции определяют тип антител.

Вне зависимости от генотипа ВГС в ходе ИФА удается определить количество IgG антител класса G и IgM класса M. Специфичность тестов II поколения составляет 95%. Срок обнаружения маркеров HVC core IgM не превышает 9-10 недель после инфицирования.

Иммуноферментный анализ III поколения разработан на базе антигена NS5. Преимущество техники заключается в существенном уменьшении серологического окна – подтвердить наличие маркеров ВГС в крови удается спустя 4-6 недель после заражения. Его чувствительность и специфичность составляет 99%. Если обнаруживаются маркеры HCV типа IgG, это указывает на перенесенную инфекцию или наличие хронического гепатита.

Серологический скрининг – обязательный тест при первичной диагностике вирусного заболевания. Но для подтверждения полученных данных прибегают к дополнительным исследованиям.

Молекулярные маркеры

Молекулярно-биологические методы нацелены на обнаружение частиц возбудителя инфекции. По результатам обследования подтверждают положительный серологический тест на маркеры типа anti-HCV и репликацию, то есть размножение, вируса.

В вирусологии применяют два типа исследований:

1. Качественный – выполняется для исследования крови донора или подтверждения гепатита у лиц с выявленными anti-HCV (результат положительный или отрицательный – вирус есть или вируса нет).
2. Количественный – играет роль маркера инфекционной нагрузки. По концентрации вирионов определяют носителя РНК патогена, активность воспаления печени.

Молекулярные тест-системы позволяют выполнить ПЦР (полимеразную цепную реакцию) в режиме реал-тайм. Степень вирусной нагрузки на организм зависит от стадии болезни и варьируется в диапазоне от 10 до 10 млн. международных единиц в 1 мл крови.

Количественная ПЦР-диагностика служит маркером репликации РНК-вируса при вялотекущем гепатите. Анализ выполняется на 4, 12 и 24 неделях терапии препаратами интерферона. Повторный молекулярный тест проводят спустя 24-48 недель после приема лекарств.

Дополнительные исследования

После подтверждения диагноза определяют генотип возбудителя. От полученных данных зависит методика дальнейшего лечения и прогноз осложнений. Для этого выполняют анализ NS5-участка белка ВГС.

Тест-системы несовершенны, что затрудняет диагностику гепатита с недавно выявленными новыми генотипами.

Дополнительно выполняется пункционная биопсия печени и гистологический анализ взятой ткани. По данным рассмотрения под микроскопом определяют тяжесть изменений в структуре органа, расположение очагов поражения. Структурно гистологические маркеры гепатита Б и С мало чем отличаются друг от друга. Точность предсказания вирусной инфекции по данным тканевого исследования превышает 76%.

Гепатологи выделяют несколько гистологических маркеров HVC-инфекции:

• жировое перерождение гепатоцитов (клеток печени);
• звездчатый фиброз паренхимы;
• ступенчатый некроз гепатоцитов;
• формирование соединительнотканного остова печени.

В случае обнаружения осложнений – гепатоза, гепатоцеллюлярной карциномы – тактику лечения корректируют.

Показатели биохимического анализа при гепатите С

Биохимический анализ крови при гепатите С является одним из самых достоверных способов диагностики заболевания, степени поражения тканей печени и общего состояния здоровья больного. Сдается он натощак с утра. Последний раз можно кушать как минимум за 10 часов до сдачи крови. 

Билирубин

Это желчный пигмент, результат распада эритроцитов. Бывает прямым, непрямым и общим.

В норме показатели общего билирубина у женщин составляют от 8,5 до 19,8 мкмоль/л максимум, у мужчин — от 3,3 до 19 мкмоль/л максимум. 

У человека с патологическими изменениями в печени количество общего пигмента не превышает 21,0 мкмоль/л. О том, что началась гипербилирубинемия, свидетельствует концентрация более 17,1 мкмоль/л. Если показатели повышены (от 30 мкмоль/л), наблюдается желтушный синдром. При этом выделяется три его формы: 

• тяжелая (более 160 мкмоль/л);
• средняя (в пределах 87-160 мкмоль/л);
• легкая (менее 86 мкмоль/л). 

При достижении уровня 300 мкмоль/л развивается печеночная кома. 

АЛТ, АСТ и коэффициент де Ритиса

АЛТ (аланинаминотрансфераза) и АСТ (аспартатаминотрансфераза) — это ферменты, которые вырабатываются печенью. АСТ и АЛТ при гепатите С начинают активно распространяться за пределы железы.

Нормальный уровень АСТ у мужчин — до 47 МЕ/л, у женщин — до 30 МЕ/л. При гепатите С, который развивается без цирроза, этот показатель превышен в 4-6 раз, а с циррозом — в 6-10 раз. 

Норма АЛТ у мужчин — до 45 МЕ/л, у женщин — до 35 МЕ/л. В случае гепатита С без цирроза количество фермента возрастает в 6-10 раз, с циррозом — более, чем в 10 раз. 

Коэффициент де Ритиса — это соотношение АЛТ и АСТ. Вычисляется из полученных результатов исследования. Необходим для выявления проблем в работе печени и сердца. Самостоятельного значения он не имеет, рассчитывают только при отклонениях в показателях АЛТ и АСТ. У здорового человека коэффициент колеблется от 0,91 до 1,75. При снижении индекса менее 0,91 имеются проблемы с печенью. Если показатели варьируются от 0,55 до 0,83, это говорит о гепатите В и А, причем данные биохимические показатели видны за 2 недели до проявления первичных признаков. 

Белок

Концентрация общего белка в сыворотке крови зависит от синтеза и распада глобулинов и альбумина — двух главных белковых фракций. У взрослых показатели 66-83 г/л — в пределах нормы. Снижение показателей до 60-63 г/л может говорить о развитии хронических заболеваний печени, воспалительных процессов, злокачественных новообразований.

Расшифровка низких результатов показывает недостаточность функции печени (гепатиты, цирроз печени). Сокращение количества общего белка до 50 г/л часто сопровождается гипопротеинемическими отеками тканей. 

Щелочная фосфатаза

Это наиболее информативный фермент в анализе на печеночные пробы

При исследовании показателей при гепатите С внимание обращается на активность печеночного подвида. У взрослого здорового человека она лежит в пределах 30-90 Ед/л, у подростков — до 400 Ед/л, беременных женщин — до 250 Ед/л. 

Повышенный уровень щелочной фосфатазы (в 10 и более раз) свидетельствует о механической желтухе, связанной с затруднением секреции прямого билирубина в желчный пузырь и поступлением желчи в кишечник. Это часто происходит при хроническом гепатите С. 

Другие данные биохимии

При биохимическом исследовании крови выявляются также уровень креатинина. Это результат обмена белков в печени. Выводится вещество с мочой почками. Нормальные показатели у взрослых — 39,9-72 мкмоль/л. Когда уровень завышен, врачи подозревают нарушения в работе почек. Данный показатель необходимо проверять перед проведением противовирусной терапии для оценки ее безопасности.

Триглицериды — это жиры, которые содержатся в жировой ткани. Норма — 0,45-2,16 мкмоль/л для женщин, у мужчин — 0,61-3,62. Повышение этих показателей врач может расценивать как ожирение, сахарный диабет, заболевания печени (цирроз, гепатит, жировая дистрофия). Их уровень повышается также во время приема интерферонов. 

Интерфероновая терапия

Интерфероны (ИФН) – это специфические белки, синтезируемые клетками иммунной системы человека в ответ на внедрение того или иного патогенного вируса. Впервые в медицинской практике интерфероны α (альфа), β (бета) и γ (гамма) для лечения гепатита С начали применять с 1992 г. На сегодняшний день интерфероны не рассматривают в качестве эффективного лекарственного средства для борьбы с вирусом гепатита С, хотя и продолжают применять для лечения пациентов.

Простые интерфероны короткого действия и пегилИрованные интерфероны продленного действия выпускают в виде порошков для приготовления растворов или в виде растворов для инъекций, а также в виде ректальных суппозиториев (свечей). Простые и пегилИрованные интерфероны назначают в составе комбинированной противовирусной терапии в сочетании только с рибавирином или в сочетании с рибавирином и софосбувиром. Рибавирин и софосбувир усиливают действие интерферона.

Очень важно правильно применять ИФН, так как в противном случае у пациентов возникают нежелательные побочные эффекты со стороны системы кроветворения, эндокринной системы, сердечно-сосудистой и нервной систем. Эффективность применения устаревших схем лечения на основе пегилИрованного интерферона в сочетании с рибавирином при гепатите С не превышает 50%

Продолжительность курса лечения зависит от генотипа вируса HCV и может составлять 24 или 48 недель, но в особых случаях увеличивается до 72 недель. Обычно для лечения применяют следующие виды интерферонов:

Эффективность применения устаревших схем лечения на основе пегилИрованного интерферона в сочетании с рибавирином при гепатите С не превышает 50%. Продолжительность курса лечения зависит от генотипа вируса HCV и может составлять 24 или 48 недель, но в особых случаях увеличивается до 72 недель. Обычно для лечения применяют следующие виды интерферонов:

Вирусная нагрузка при гепатите С

С помощью анализа ПЦР возможно определить не только наличие РНК вирусов в крови — качественный анализ (обнаружено/не обнаружено), но и их количество — вирусную нагрузку (количество единиц вирусной РНК в 1 мл крови). Количественный показатель ПЦР применяется с целью контроля эффективности лечения.

Методы, применяющиеся для проведения ПЦР, обладают разной чувствительностью. В РФ согласно методическим рекомендациям 2014 года рекомендовано применять методики, обладающие чувствительностью 25 МЕ/мл и менее. Согласно рекомендациям Европейской ассоциации по изучению печени 2015 года предлагается применять методики определения вирусной РНК, обладающих чувствительностью 15 МЕ/мл и менее.

В зависимости от чувствительности тест-системы больной получает тот или иной результат исследования:

• Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR составляет 600 МЕ/мл (анализатор старого поколения).
• Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR ВГС-TEST составляет 50 МЕ/мл, что составляет 100 копий в 1 мл.
• Минимальная чувствительность анализатора РеалБест РНК ВГС составляет 15 МЕ/мл, что составляет 38 копий в 1 мл (входит в группу современных тест-систем). Специфичность данных анализаторов составляет 100%. С их помощью выявляются РНК вирусов гепатита С субтипов 1а и 1b, 2а, 2b, 2c и 2i, 3, 4, 5а и 6.

При наличии копий РНК ниже порога чувствительности данного анализатора пациент получает ответ «не обнаружено».

Рис. 4. Пример анализа ПЦР (количественный тест). Определение вирусной нагрузки.

Интерпретация результатов анализа ПЦР на гепатит С

• Отсутствие РНК вируса указывает на отсутствие инфицирования.
• Отсутствие РНК в анализе на фоне наличия антител в крови указывает на исчезновение болезни под влиянием лечения или при самоизлечении.
• В ряде случаев вирус присутствует в крови, но в подпороговых уровнях, когда его концентрация не улавливается анализаторами. Такие больные остаются опасными в плане заражения.
• Выявление РНК вируса в течение 6 месяцев подряд у больных с острым гепатитом С говорит о том, что заболевание приняло хроническое течение.
• Снижение вирусной РНК в анализах на фоне лечения говорит об эффективности проводимой терапии и наоборот.

Рис. 5. Макропрепарат. Жировой гепатоз — одно из последствий заболевания.

Как проходит обследование?

Чтобы сделать количественный ПЦР вирусной РНК гепатита С, надо соблюдать методику выполнения исследования:

1. Лучше всего для тестирования подходит венозная кровь. Анализы сдаются натощак. Пациенту не рекомендуют есть жирную и жареную пищу, пить спиртное за два дня до манипуляции.
2. После забора биологического материала, его доставляют в лабораторию, обрабатывают.
3. ПЦР состоит из трёх этапов (подготовка, увеличение копий ДНК возбудителя, идентификация) на каждом из которых используется определённое оборудование и реактивы.
4. Образцы, взятые для исследования, маркируются. Из них с помощью реагентов выделяют РНК вируса, обозначенного качественным ПЦР.
5. Процесс амплификации (создание и увеличение копий) проходит несколько раз посредством изменения температуры материала (нагревания, охлаждения) с использованием реактивов.
6. На последнем этапе происходит определение вирусной нагрузки. Результат исследования интерпретирует лечащий врач, у которого есть расшифровка, таблица значений и итоги предварительной диагностики.

Какие анализы сдают при гепатите C?

Чем раньше пациент обратится к врачу, назначит лабораторные тесты, тем больше шанса вылечить заболевание. Для выявления болезни используют следующие анализы:

• исследование крови (общий анализ, биохимия);
• общий анализ мочи;
• иммунологические тесты для обнаружения антител к появившемуся антигену;
• определение ДНК патогенного микроорганизма;
• анализ полученного биологического материала путем иссечение кусочка органа (биопсия).

Тестирования помогут с точностью выявить возбудителя, определить состояние организма, отклонения показателей в анализе крови и мочи при гепатите.

«Малые печеночные знаки»

Обычно на «малые печеночные знаки» человек долгое время не обращает внимания, потому что они не существенны. С состоянием печени их тоже редко кто связывает, кроме врачей-гастроэнтерологов и гепатологов:

• Телеангиоэктазии – сосудистые звёздочки. Среди причин их появления: хроническая варикозная недостаточность, розацеа, системные заболевания соединительной ткани, эндокринные нарушения, а также патологии печени. Звёздочки на ногах – это, как правило, признак варикозного расширения вен, а вот телеангиоэктазии на других частях тела – в области крыльев носа, подбородка, щек, на ягодицах – обычно появляются из-за других проблем, в том числе из-за печени;
• Ксантелазмы – плоские желтоватые холестериновые бляшки, которые видны под кожей. Могут появляться на любых частях тела, но виднее всего они на глазах. Возникают как при врожденных нарушениях липидного обмена, так и на фоне приобретенных заболеваний: сахарного диабета, гипотиреоза, панкреатита, гепатитов и цирроза печени.
• Пальмарная или плантарная эритема – ярко-розовые ладони и/или подошвы. Этот симптом ещё называют печеночными ладонями (на стопах пятна появляются значительно реже). Ладони краснеют симметрично, высыпания проявляются в виде мелких пятен. Если надавить на покрасневший участок, он исчезает, но через некоторое время появляется снова. Пальмарная эритема при болезнях печени может сопровождаться повышенной утомляемостью, слабостью, незначительным повышением температуры тела. Она также может быть симптомом других проблем организма: избытка витамина А, дефицита витамина B, контактного дерматита, туберкулеза, патологий щитовидной железы и проч.;
• Лейконихии – белые пятна и полосы на ногтях. Многие люди считают, что основная причина побеления ногтей — недостаток микроэлементов (например, цинка). Но на самом деле круг причин гораздо шире. Лейконихии могут появиться на фоне инфекций, проблем с обменом веществ, заболеваний почек и печени, анорексии и постоянного стресса;
• Гинекомастия – увеличение молочных желез у мужчин. Может развиваться не только при гормональных нарушениях, но и циррозе печени;
• Атрофия яичек. Эта патология чаще возникает из-за воспалительно-инфекционных процессов, травм, заместительной терапии тестостероном и приёма анаболических стероидов. Но тяжелые заболевания печени, почек и гемохроматоз также предрасполагают к атрофии яичек;
• Гипертрофия околоушных желез;
• Капиллярная сетка на лице.

Если у вас есть несколько признаков из этого списка, обратитесь к доктору и попросите проверить печень (анализ на ферменты печени и УЗИ). «На ровном месте» подобные симптомы в любом случае не возникают. Не лишним будет узнать, что происходит с организмом и как ему помочь.

Методы диагностики гепатита С

Гепатит С развивается очень стремительно, и, как правило, хронический тип болезни всегда приводит к циррозу печени. Однако в 20% случаев человек, зараженный гепатитом С, может самоизлечиться. Постепенно симптомы начинают принимать обратную форму: в крови вырабатываются антитела, и вирус погибает, печень продолжает работать в нормальном режиме.

Еще в 20% случаев человек, даже не подозревая о наличии вируса в организме, становится его носителем и может заражать людей. В этом случае организм никак не проявляет внешних признаков наличия гепатита, единственное, если провести тест на маркеры, можно вычислить вирус.

В большинстве случаев люди узнают о том, что заражены, выступая донорами, так как в лабораториях всю донорскую кровь проверяют на гепатит С

Даже при такой скрытой форме рано или поздно вирус начнет атаковать печень, и чтобы начать лечение, важно поставить человеку правильный диагноз

Диагностика гепатита С подразумевает под собой использование нескольких методов, которые внедряются поэтапно:

Серологический метод. Подразумевает проведение иммуноферментного анализа (ИФА). Этот метод определяет, есть ли в организме антитела к вирусу гепатита С. Они вырабатываются только как ответная реакция на наличие маркеров вируса. При этом антитела, выработавшись однажды, могут находиться в организме человека очень долгое время, даже всю жизнь. Процесс вырабатывания антител начинается через 2-5 месяцев после заражения

Важно отметить: если результат серологического теста на гепатит С — положительный, это еще не дает 100% гарантии, что вы в данный момент заражены вирусом. Наличие в организме анти-HCV может говорить о том, что инфекция была перенесена раньше, и антитела — это показатель борьбы иммунитета

Этот метод чаще всего используют как первичный, после которого необходимо провести более детальную и углубленную диагностику, если человек страдает от болезни печени.

Тест на иммуноглобулины. Это антитела класса М, которые вырабатываются в крови через месяц после заражения. Очень большой выброс этих антител происходит на острой стадии заболевания. Постепенно их количество может уменьшиться. Новый этап увеличения наблюдается, когда болезнь примет хроническую стадию. Поэтому специалисты расшифровывают наличие иммуноглобулинов как острую стадию при хронической форме гепатита С. А вот, если антител класса М в организме нет, но иммуноферментный анализ показал положительный результат — человек является носителем вируса.

Метод полимеразной цепной реакции. Это один из самых эффективных методов диагностики гепатита С — вычисляет, есть ли в организме РНК вирус. Это молекулярная диагностика, позволяющая обнаружить вирус и вычислить, насколько он агрессивен. Суть метода состоит в том, что берется несколько пар оснований ДНК в определенном порядке и в них выявляется наличие того или иного вируса или инфекции. Медики называют этот метод качественным, поскольку он считается прямым методом и высоко специфическим. Только на его основе можно приступать к количественным методом диагностики.

Биопсия. Этот метод позволяет выяснить, насколько вирус активно атакует клетки печени, увидеть реальное состояние органа и принять адекватное решение по назначению лечения. Безусловно, эту процедуру нельзя назвать безболезненной. Под местным наркозом большой иглой у человека для анализа берут микрочастицу печени. Затем ее изучают и на основании исследований назначают лечение или делают окончательное заключение по диагнозу.

Эластометрия. Это современный метод, дающий высокий результат и позволяющий провести качественную диагностику хронического гепатита С. При этой болезни вырабатываются определенные вещества и сильно меняется структура печени. Фиброскан — прибор, которым проводится диагностика, вычисляет эти изменения на клеточном уровне. Известны случаи, когда эластометрия показывала более развернутую картину, чем биопсия.

УЗИ печени. Этот метод, конечно, далеко не такой высокоэффективный, как эластометрия, но часто врачу бывает необходимо посмотреть только поверхностные изменения органа, чтобы поставить точный диагноз. Ультразвуковое исследование позволяет узнать, стала ли печень больше, изменились ли ее края, возможно, есть отдельные участки на органе, пораженные вирусом.

Эксперсс-тест на гепатит С. Сегодня предлагают множество разнообразных тестов, которые быстро определяют антитела к HCV в любых условиях. Чувствительность подобных тестов — 96%. Определяется результат специальной кассетой, куда нужно поместить образец крови. Этот метод считается предварительной диагностикой и не может использоваться как единственный.

Характеристика количественного анализа

В целом, техника выполнения ПЦР по большому счету одинакова, как для качественного, так и количественного исследования. Образец биологического материала смешивают с тест-раствором, который содержит специальные соединения. Их роль состоит в стимуляции деления РНК патогена (причем строго специфичного генетического материала возбудителя). 

В результате концентрация HCV достигает лабораторно определяемого уровня. На данном этапе возможно проведение качественного анализа. Однако после сложных подсчетов (обычно для этих целей используют компьютерные программы) устанавливают количественный показатель содержания HCV. После этого полученный результат переводят в Международные Единицы и фиксируют в лабораторном бланке. 

В некоторых случаях вместо ПЦР используют другие методики – разветвленной ДНК и транскрипционной амплификации. Но из-за сложности выполнения и более низкой чувствительности большинство специалистов предпочитают выявлять количественные нормы гепатита С именно при помощи ПЦР. 

Показания

Сейчас практически в любой частной лаборатории пациент может пройти обследования без каких-либо бумаг и направлений от терапевта. Количественное определение вируса гепатита С в крови не является исключением. Вопрос в том, когда целесообразна сдача теста?

Гепатологи рекомендуют проведение исследования в таких случаях:

• позитивный ИФА + положительная ПЦР;
• негативный ИФА + положительная ПЦР. 

Кроме того, количественное определение HCV показано и в ходе противовирусной терапии. Врач сравнивает результаты виремии, полученные до начала курса приема медикаментов, с результатами тестирования, проведенного уже во время лечения. Нормой считается негативная ПЦР к 12 неделе применения препаратов. А предиктором 100% выздоровления считают отсутствие виремии уже через месяц терапии.

Тестирование продолжают и после окончания лечения для исключения риска рецидива. Пациент должен сдавать такой тест на протяжении еще 2 лет. При отрицательном результате говорят о выздоровлении. Больного снимают с учета у гепатолога или инфекциониста и дают общие рекомендации относительно восстановления состояния печени. 

Если спустя 2 года количественный тест на HCV вновь положителен, все исследования повторяют заново. В таком случае предполагают повторное инфицирование и, возможно, другой генотип вируса. Но требуется новая схема лечения, а вероятность благополучного исхода существенно ниже. 

Когда информативно проведение теста

Сроки выполнения количественного определения вирусной нагрузки при подтвержденной HCV-инфекции указаны в таблице.

Заключение

Гепатит А является достаточно распространенным заболеванием.
Во избежание заражения необходимо тщательно следить за гигиеной, мыть руки перед едой, использовать в пищу только чистые фрукты и овощи

Не стоит пить воду сомнительного качества.
Отдельное внимание следует уделить контролю над детьми, объяснив им элементарные правила профилактики инфекции.
При своевременной диагностике и правильном лечении болезнь быстро обретает положительную динамику и поддается лечению.
В организме человека, перенесшего гепатит А, на всю жизнь остаются антитела. Они препятствуют повторному заражению.