Андрей Смирнов
Время чтения: ~19 мин.
Просмотров: 2

Анализ крови на гепатит b и c

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:

  • качественный анализ;
  • количественный анализ;
  • генотипирование.

Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.

Качественный ПЦР гепатита С

Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.

Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.

Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента. Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.

Количественный ПЦР гепатита С

ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме. Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови. Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:

  • инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
  • метод и эффективность лечения;
  • длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).

Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.

Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.

Генотипирование

Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов)

На территории РФ распространены 1,2 и 3.

ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.

Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии. Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.

Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.

Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип. В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой. Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.

Обследование мочи

Хоть основными показательными исследованиями при HCV и являются анализы крови, опытный специалист даже по ОАМ сможет разглядеть признаки печеночного вирусного заболевания. Основным отклонением в урине при гепатите типа С является выраженное повышение показателей билирубина и уробилиногена, выявление в моче белка и крови.

  1. Билирубин. Желчный пигмент, образуется при распаде гемоглобина. В норме его в урине быть не должно. Повышенное содержание пигмента сильно изменяет цвет мочи, делая ее темной.
  2. Уробилиноген. Производное билирубина, в норме выделяется с мочой и каловыми массами, но при вирусных и хронических гепатитах его показатели сильно возрастают.
  3. Протеинурия. При активности вируса HCV в урине выявляется наличие белка, который в норме не должен обнаруживаться в данных анализах.
  4. Гематурия. При гепатите С в мочу выделяются эритроциты, но невооруженным глазом кровь в моче не просматривается, только под микроскопом.

Исследование урины не является показательным при диагностике HCV, обычно основным анализом считается ПЦР.

Лабораторные исследования методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена  к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР: 

  • праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
  • фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV. 

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование. 

Виды тестов

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

Перечень тестов Краткое описание
Анализ ПЦР на гепатит С качественный Предназначен для подтверждения результатов серологического теста (ИФА). Используемые тест-системы позволяют только выявить РНК патогена без определения его содержания
Анализ ПЦР вирусное содержание возбудителя патологии Чувствительность исследования составляет 5–10 МЕ/мл. Для удобства расшифровки используют универсальный параметр, так как при определении количества копий могут возникать различные погрешности. Исследование проводится в обязательном порядке и не может заменить ни качественный тест методом ПЦР, ни генотипирование
Генотипирование При исследовании определяется последовательность протеинов, что определяет разновидность возбудителя гепатита С. В настоящее время установлено 6 генотипов, и практически каждый требует индивидуального подхода в терапии

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

  1. Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
  2. Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
  3. Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
  4. Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
  5. Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения. 

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР. 

Гепатит С способы передачи

Заразиться гепатитом С можно:

  • через кровь. Возможно инфицирование при переливании зараженной крови, при проведении операций и манипуляций с кровью, лечении зубов, удалении родинок и бородавок, если были допущены погрешности в стерилизации инструментов;
  • в салонах красоты при выполнении тату, пирсинга, обрезного маникюра и педикюра, косметологической чистки лица и др.;
  • от матери к ребенку во время родов (5%);
  • во время незащищенного секса с инфицированным человеком;
  • во время принятия инъекционных наркотических средств не одноразовыми шприцами;
  • во время оказания первой помощи инфицированному вирусом человеку, если не соблюдать меры безопасности

В отличие от других гепатитов способы передачи гепатита С в основном связаны с кровью. Бытовым путем заразиться гепатитом С невозможно! Ни рукопожатия, ни обычные поцелуи (несексуального характера) и общение, ни пользование предметами бытового назначения не могут передать гепатит С! Не стоит только брать маникюрные и бритвенные принадлежности у человека, который страдает гепатитом С! При оказании первой помощи при травмах пациентам с гепатитом С нужно обязательно надевать перчатки! Вирус погибает при кипячении через пару минут, а при стирке при температуре 60 °С – через тридцать минут. Замораживание не убивает вирус. Убийственно воздействует на вирус УФ-излучение. Через 16 часов вирус при комнатной температуре погибает!

Анализ крови на гепатит и ВИЧ. Биохимический анализ

В первую очередь при появлении симптомов заболевания необходимо прийти на обследование к специалисту.

Общий осмотр у пациента может выявить проявления слабости, изменение пигментации кожи, заметно вздутие живота вследствие асцита. Характерными чертами протекания болезни являются пальмарная эритема (покраснение ладоней), «голова медузы» (проявление вен на животе), «звездочки» кровеносных сосудов, гематомы на теле.

Очень важно предоставить специалисту максимально полную историю болезни, описать условия, при которых возможно произошел контакт с возбудителем вируса – составить общий анамнез для того, чтобы врач назначил общий или биохимический анализ на вирусную инфекцию.

 Спектр методов обнаружения вируса гепатита состоит из таких анализов:

  • Клинический (общий) анализ крови
  • Биохимический анализ крови
  • ПЦР
  • ИФА
  • Экспресс-тест

Общий анализ гепатит и ВИЧ отслеживает нагрузку на печень, изменения количественных показателей состава крови, т.е. общий уровень эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и др. Биохимический анализ крови при гепатите заключается в наблюдении печеночного белка, билирубина, ферментов печени, щелочной фосфатазы. Кроме этого биохимический анализ отслеживает общий белок.

Билирубин выделяется вследствие разложения эритроцитов, именно он окрашивает кожные покровы в характерный цвет желчи. Норма содержания билирубина повышается при заражении.  

Также при заражении вирусом норма концентрации печеночных ферментов заметно возрастает. Биохимический анализ белкового спектра крови и общий белок указывают на состояние иммунной системы. При заболевании гепатитом уровень концентрации альбумина уменьшается. По темпам его уменьшения определяют фазу течения заболевания. Расшифровкой анализа занимаются опытные специалисты в медицинских учреждениях.

 Полимеразная цепная реакция указывает на генетическое происхождение инфекции, ее количественный показатель и выявляет фазу протекания заболевания.

Иммуноферментные анализы при гепатите выявляют антитела класса М и G к первопричине заболевания.

Существует экспресс-метод диагностики гепатита в домашних условиях. Капля крови из пальца помещается на индикатор. Норма для этого теста – появление одной полоски, т.е. инфекции не обнаружено. Если появилось две контрольные полосы – результат положительный.

Где купить экспресс-тест? Купить такой тест вы можете в любой аптеке

Его цена варьируется в пределах 1000 руб.Важно: перед тем, как использовать экспресс-тест убедитесь, что его срок годности не закончился. Экспресс-тест не является основанием для постановки диагноза

При положительном результате экспресс-теста обязательно обратитесь к врачу за консультацией.

Определение РНК гепатита С

Определение РНК вируса HCV-RNA, также именуемый ПЦР гепатита С, это исследование биологического материала (крови), с помощью которого можно определить в организме непосредственное наличие самого геноматериала вируса гепатита (любой отдельно взятый вирус является одной-единственной частичкой РНК).

Основной метод проведения теста — ПЦР, или метод полимеразно-цепной реакции.

Существуют два вида тестов крови на определение РНК HCV:

  • качественный;
  • количественный.

Качественный тест

Проведение качественного анализа дает возможность определить, находится ли вирус в составе крови. Все пациенты, у которых найдены антитела С-гепатита, должны пройти данный тест. По его результатам можно получить 2 ответа: «присутствует» либо «отсутствует» вирус. По положительному результату теста (обнаружено) можно судить об активном размножении вируса, который заражает здоровые клетки в печени.

Тест, проводимый на качественный ПЦР, настроен на конкретную чувствительность, от 10 до 500 МЕ/мл. Если обнаруженный в составе крови вирус гепатита при удельном содержании меньше 10 МЕ/мл, то обнаружение вируса может стать невозможным. Очень низкое значение удельного содержания вируса наблюдается среди пациентов, для которых назначена противовирусная терапия. Поэтому важным является тот факт, насколько высока чувствительность медицинской системы для диагностирования и постановки качественного результата при полимеразной цепной реакции.

Зачастую полимеразная цепная реакция C-гепатита проводится сразу же после нахождения соответствующих антител. Последующие тесты, при прохождении противовирусной терапии, проводятся на 4-ю, 12-ю и 24-ю недели. И еще один анализ после прекращения ПВТ делается через 24 недели. Затем — один раз в год.

Количественный тест

Количественный анализ ПЦР РНК, иногда называемый вирусной нагрузкой, определяет концентрацию (удельное содержание) вируса в составе крови. Другими словами, под вирусной нагрузкой понимается определенное количество вирусной РНК, которое может находиться в конкретном количестве крови (принято использовать 1 мл, равный 1 см в кубе).

Единицы измерения для результатов теста — международные (стандартные) единицы, разделенные на один миллилитр (МЕ/мл). Содержание вируса иногда представляется по-разному, это зависит от лабораторий, где проводятся исследования. Для гепатита С количественное определение иногда использует такие значения, как копии/мл.

Проверка «вирусной нагруженности» позволяет определить степень инфекционности заболевания. Так риск заразить вирусом другого человека повышается при повышении концентрации гепатита в составе крови. К тому же высокое содержание вируса снижает эффект от проводимого лечения. Поэтому малая вирусная нагрузка является очень благоприятным фактором для успешного лечения.

К тому же тест гепатита С и его определение методом ПЦР играют большую роль при применении терапии от болезни и определения успешности лечения. На основании результатов теста осуществляется планирование курса реабилитации. Например, при слишком медлительном уменьшении удельной концентрации вируса гепатита, противовирусная терапия продлевается, и наоборот.

В современной медицине считается, что нагрузка больше 800000 ME/мл является высокой. Нагрузка же сверх 10000000 ME/мл считается критической. Но у специалистов из разных стран и по сей день не появилось одинакового мнения о пределах вирусной нагрузки.

Частота проведения количественного теста

В общих случаях количественный анализ на гепатит HCV-RNA делается перед проведением противовирусной терапии и через 3 месяца по окончании лечебных процедур для определения качества проведенной терапии.

В качестве результата для количественного теста станет считаться количественная оценка результатов по образцу, указанному выше. В результате будет вынесен вердикт «ниже измеряемого диапазона» или «в крови не обнаружено» — это является нормой для здорового человека.

Параметр чувствительности качественного теста обычно ниже, чем чувствительность количественного анализа. Расшифровка «Отсутствующий» показывает, что оба вида анализов не нашли РНК вируса. При показателе теста «ниже измеренного диапазона» анализ количественного типа, скорее всего, не нашел РНК гепатита, хотя это подтверждает наличие вируса с очень маленьким удельным содержанием.

Что покажут анализы на гепатит при инфекции

Показатели анализов при гепатите С сначала оценивает терапевт. После основных анализов врач может направить больного на дополнительное обследование: биопсию, УЗИ печени. Это позволит увидеть полную картину заболевания. 

ИФА

Исследуя показатели крови при гепатите С, обязательно назначают иммуноферментный анализ (ИФА). Он показывает ответ иммунной системы на столкновение с вирусом HCV. На момент проведения обследования количество патогенных клеток может быть очень мало, а антитела к вирусу гепатита С уже циркулируют в кровеносной системе. Появляются они в срок от нескольких дней до 2 недель после инфицирования. 

Анализ показывает только наличие и количество иммуноглобулинов G и М, поэтому диагноз с точностью поставить невозможно. Можно лишь определить стадию гепатита.

По иммуноглобулинам М видно, что человек только заразился. Это говорит об острой фазе патологии. Иммуноглобулины G свидетельствуют о хроническом течении болезни (более 6 месяцев) или об инфицировании в прошлом. 

При исследовании показателей крови методом ИФА можно получить псевдоотрицательный результат. Это значит, что инфицирование произошло недавно и антитела еще не успели выработаться. Врачи называют этот период «диагностическим окном», который может длиться до полугода. 

Также возможен ложноположительный результат, когда реагент связывается с неспецифическим белком сыворотки крови. Такой показатель возможен при:

наличии онкологии;

вакцинации, которая была проведена накануне взятия крови;

туберкулезе;

склеродермии, рассеянном склерозе и прочих аутоиммунных заболеваниях;

повышенной температуре тела.

Чтобы получить точные показатели, результаты ИФА интерпретируют совместно с ПЦР. 

ПЦР

Полимеразная цепная реакция проводится для выявления РНК вируса в крови человека. Выделяется несколько видов ПЦР-анализа:

Качественный, благодаря которому выявляется генетический материал HCV.

Количественный анализ. Предназначен для определения вирусной нагрузки при гепатите С. Обязателен перед началом противовирусного лечения, а после на 1, 4, 12 и 24 неделе терапии для оценки ее эффективности.

Генотипирование для выявления генотипа вируса гепатита, поскольку он постоянно мутирует.

Расшифровкой показателей занимается врач-гепатолог. Он интерпретирует их в комплексе с результатами ИФА, биохимии крови, УЗИ и биопсии. В заключении при сдаче качественного анализа пишется:

  • Обнаружено. Это означает, что в крови человека выявлен генетический материал HCV, и инфицирование подтверждается.
  • Не обнаружено. Заражение не подтверждено или уровень РНК возбудителя находится ниже границы чувствительности аппаратуры. 

Показатели количественного анализа:

Не обнаружено Человек либо полностью здоров, либо концентрация РНК HCV ниже пределов чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Количество РНК очень мало. Данные показатели следует соотносить с результатами других анализов или проводить повторное обследование. 
До 8*10^5 МЕ/мл Незначительный уровень вирусной нагрузки. Свидетельствует об успешности ПВТ.
Более 8*10^5 МЕ/мл Вирусная нагрузка имеет высокие показатели.
Более 2,4*10^7 МЕ/мл При таких показателях назначается повторная сдача крови с разбавлением ее образца.

Расшифровка показателей генотипирования:

Не обнаружено Человек полностью здоров либо уровень РНК вируса слишком мал. 
Выявлена РНК вируса HCV У больного редкий генотип HCV, который не относится к первым трем типам. Назначаются дополнительные анализы.
Присутствует РНК определенного типа В заключении пишется определенный генотип (1а, 1b).

Когда анализ ПЦР является отрицательным, а ИФА — положительным, это означает, что человек ранее уже перенес гепатит С, но вылечился самостоятельно. 

Отклонения

Для определения степени поражения печени назначают биопсию.

При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса. На получение недостоверного результата могут повлиять отдельные факторы, например, загрязнение образцов; присутствие в крови гепарина и веществ, замедляющих действие компонентов ПЦР; ошибки лабораторий; несоблюдение правил проведения теста.

Также результат в нескольких лабораториях может различаться, возможно, была другая методика проведения исследований. Чтобы узнать, насколько поражена печень и опасность болезни, недостаточно провести количественный ПЦР гепатита. Дополнительно проходят биохимические процедуры и биопсию.

Планируя лечение, проводят генотипирование вируса. В связи с тем, что гепатит С способен изменяться, существует несколько групп. Для разных типов лечение может отличаться. Бывают ситуации, когда присутствует несколько видов, но анализ находит один, тот, что преобладает. Тогда тест пересдают.

Вирусная нагрузка при гепатите С

С помощью анализа ПЦР возможно определить не только наличие РНК вирусов в крови — качественный анализ (обнаружено/не обнаружено), но и их количество — вирусную нагрузку (количество единиц вирусной РНК в 1 мл крови). Количественный показатель ПЦР применяется с целью контроля эффективности лечения.

Методы, применяющиеся для проведения ПЦР, обладают разной чувствительностью. В РФ согласно методическим рекомендациям 2014 года рекомендовано применять методики, обладающие чувствительностью 25 МЕ/мл и менее. Согласно рекомендациям Европейской ассоциации по изучению печени 2015 года предлагается применять методики определения вирусной РНК, обладающих чувствительностью 15 МЕ/мл и менее.

В зависимости от чувствительности тест-системы больной получает тот или иной результат исследования:

  • Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR составляет 600 МЕ/мл (анализатор старого поколения).
  • Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR ВГС-TEST составляет 50 МЕ/мл, что составляет 100 копий в 1 мл.
  • Минимальная чувствительность анализатора РеалБест РНК ВГС составляет 15 МЕ/мл, что составляет 38 копий в 1 мл (входит в группу современных тест-систем). Специфичность данных анализаторов составляет 100%. С их помощью выявляются РНК вирусов гепатита С субтипов 1а и 1b, 2а, 2b, 2c и 2i, 3, 4, 5а и 6.

При наличии копий РНК ниже порога чувствительности данного анализатора пациент получает ответ «не обнаружено».

Рис. 4. Пример анализа ПЦР (количественный тест). Определение вирусной нагрузки.

Интерпретация результатов анализа ПЦР на гепатит С

  • Отсутствие РНК вируса указывает на отсутствие инфицирования.
  • Отсутствие РНК в анализе на фоне наличия антител в крови указывает на исчезновение болезни под влиянием лечения или при самоизлечении.
  • В ряде случаев вирус присутствует в крови, но в подпороговых уровнях, когда его концентрация не улавливается анализаторами. Такие больные остаются опасными в плане заражения.
  • Выявление РНК вируса в течение 6 месяцев подряд у больных с острым гепатитом С говорит о том, что заболевание приняло хроническое течение.
  • Снижение вирусной РНК в анализах на фоне лечения говорит об эффективности проводимой терапии и наоборот.

Рис. 5. Макропрепарат. Жировой гепатоз — одно из последствий заболевания.

ПЦР-диагностика

Полимеразной цепной реакцией (ПЦР) называется экспериментальная методика для выявления вирусов. Такой анализ на гепатит С позволяет существенно увеличить концентрацию некоторых фрагментов ДНК или РНК вируса в сданных пробах. Это дает возможность их распознать и даже подсчитать количество.

Данный тест на гепатит С выполняют по следующей методике:

  1. Проба крови (генетический материал), который может содержать искомый ген гепатита, вносится в пробирку. К ней помещают специальные вещества – праймеры, они представляют собой отрезки небольшой длины из искомого гена, которые синтезированы химическим путем. В данный сосуд также добавляется ДНК или РНК полимераза, она способна выстраивать цепочки из нуклеиновой кислоты, полностью идентичные первоначальной. К полученному составу добавляется и подборка из свободных нуклеотидов, являющихся особым строительным материалом для ДНК и РНК, причем один из них содержит мельчайшие частицы из радиоактивного фосфора.
  2. Полученная смесь вначале подогревается до 95 градусов, вследствие чего переплетенные в обычном состоянии обе спирали ДНК из-за такого воздействия расплетаются.
  3. Для продолжения анализа препарат охлаждается, в этот момент праймеры прикрепляются к искомому участку генома вируса гепатита, не позволяя ДНК сформироваться в двойную спираль. Когда происходит остывание смеси, полимераза отыскивает именно одиночные цепочки из нуклеотидов. Во время прикрепления данного фермента он скользит по цепи ДНК (как блок по веревке), а на двойной спирали он не способен «работать», для этого и проводят подогрев смеси.
  4. Чтобы продлить анализ, выполняют повторное нагревание, которое вновь приводит к разделению цепочек нуклеотидов. При выполнении таких циклов ПЦР в пробе количество искомых генов гепатита возрастает в геометрической пропорции, а остальные генетические материалы продуцируются (формируются) лишь в линейной закономерности.
  5. Для завершения исследования проводят очистку раствора от остаточных частиц нуклеотидов. Их разделяют с помощью электрофореза, при этом происходит отделение по параметрам молекулярной массы цепочек ДНК. Такие анализы на гепатит с при помощи ПЦР позволяют определить, присутствуют искомые гены вируса в исследуемом образце или нет.

Достоинством данного теста является очень высокий порог чувствительности реакции ПЦР. Такой методике для проведения диагностики, в идеальном варианте, требуется всего одним геном вируса на всю пробу.

Кроме того, такая ПЦР полностью специфична. В каждом из генов есть уникальная последовательность из нуклеотидов, которая, как отпечаток пальца, не может нигде повторяться. Для этого анализа на гепатит С праймеры синтезируются таким образом, чтобы они абсолютно соответствовали уникальным участкам искомых генов, которых нет ни у одной другой последовательности.

Данная методика позволяет также провести анализ на гепатит в с и детерминировать их, помогая установить окончательный диагноз.

Расшифровка результатов (таблица)

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

  • норма количественного ПЦР при гепатит С;
  • полученный результат;
  • другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатель Интерпретация
Отрицательный РНК возбудителя в биологическом материале не обнаружено
0 — 1,8Х10^2МЕ/мл Количество генетического материала вируса ниже установленного референтного значения
1,8Х10^2МЕ/мл — 8Х10^5МЕ/мл Невысокая вирусная нагрузка.
8Х10^5МЕ/мл — 2,4Х10^7МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка
2,4Х10^7МЕ/мл и более Превышена верхняя граница значений.

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации