Гемоглобин: разбираемся в анализах

Работа № 1. Определение количества лейкоцитов в крови

Определение
количества лейкоцитов так же как и
эритроцитов осуществляется в камере
Горяева. Разведение крови производят
в 20 раз 3-5% уксусной кислотой. При этом
эритроциты разрушаются и не мешают
счету.

Ход работы

Пипеткой
отмерьте 0,4 мл разводящего раствора
(3-5% раствора уксусной кислоты), подкрашенной
метиленовым синим и перенесите в чистую
пробирку.

Забор
крови производите в соответствии с
правилами, описанными в лабораторной
работе «Физиология красной крови»,
работа № 1. Кровь забирайте в капилляр
Сали, наполняя его самотеком до метки
(0,02). Кончик капилляра вытрите и перенесите
кровь в пробирку с разводящим раствором.
Получается разведение 1:20.

Подсчет количества
лейкоцитов производите в 5 больших
квадратах камеры Горяева (лабораторная
работа «Физиология красной крови»).

Расчет количества
лейкоцитов в 1 мкл крови осуществляется
с учетом разведения, объема камеры и
числа подсчитанных квадратов:

Х=(Nх4000х200)/80

Полученное
количество лейкоцитов обычно выражают
в количестве на 1л крови (полученный
результат умножается на 106).

Рекомендации
по оформлению протокола работы. Полученные
результаты
определения количества лейкоцитов
занесите в тетрадь протоколов опытов.
Сделайте
выводы,
исходя из того, в норме у взрослого
человека содержание лейкоцитов в крови
составляет 4-9 х 109
кл/л. При
мышечной работе – 18 х 109
кл/л.

Увеличение
количества лейкоцитов в крови называется
лейкоцитозом,
а уменьшение – лейкопенией.
Снижение количества лейкоцитов в крови
всегда имеет патологический характер.
Повышение количества лейкоцитов в крови
может быть физиологическим, то есть
возникать у здоровых людей (лейкоцитоз
пищевой, миогенный, при беременности),
и патологическим. Число лейкоцитов в
периферической крови в первые 5 дней
жизни составляет 18 — 20 х 109
кл/л, в
двухнедельном возрасте снижается до 9
— 12 х 109 кл/л,
а в последующие периоды онтогенеза не
отличается от уровня у взрослых.

Определение количества гемоглобина по методу Сали

Метод базируется на свойстве железосодержащего белка превращаться в хлорид гематита под действием соляной кислоты. Методика Сали считается неинвазивным вмешательством.

Интенсивность цвета жидкости прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в крови. Раствор хлоргемина при проведении исследования разводят дистиллированной водой до стандартного цветового спектра.

Метод Салли

Важно! Стоит отметить, что гемоглобин по Сали не получил широкого распространения на территории РФ. Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали»

Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда

Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали». Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда.

Боковые гнезда держат две склянки с веществами. Среднее гнездо данного прибора необходимо для размещения пронумерованной мензурки из стекла. Градуированная мензурка обладает шкалой с делениями, которые измеряют количество железосодержащего пептидного соединения в граммах на децилитр (г/дл). При клиническом исследовании крови используется специальная пипетка для воды и размешивания содержимого склянки.

При проведении полного анализа по методу Сали вначале в склянку наливается 0.10% раствор соляной кислоты. Потом выполняется забор исследовательского материала из кончика пальца в пипетку до отметки «0.04 мл». Впоследствии пипетку обтирают стерилизованной ваткой и размещают в мензурку с раствором HCl.

Медицинский сотрудник несколько раз встряхнет содержимое пробирки и поставит отстаиваться. Полное химическое превращение железосодержащего пептидного соединения в растворе соляной кислоты происходит не менее чем за 10-15 минут.

По истечении пяти минут оценивается цвет жидкости в гемометре со стандартными цветами. Как правило, он более темный, нежели в стандартных пробирках. Используя обычную пипетку к раствору постепенно добавляют чистую воду, попеременно перемешивая содержимое и сравнивая со стандартным цветом. На окончательном этапе цвет материала должен сравняться с нормативом. После всего вышеперечисленного замеряют уровень жидкости и проводят соответствующие подсчеты.

В промышленном масштабе выпускаются гемометры, которые содержат исключительно грамм-процентную градуированную шкалу. Нормой гемоглобина у мужчин и женщин принято считать значения 15 г%, или 168 г/дл. Но даже при соблюдении определенных правил наблюдаются небольшие погрешности в измерениях. В некоторых случаях разные результаты могут в значительной мере исказить данные о болезни.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

Степень устойчивости
эритроцитов в гипотоническом растворе
оценивается как их осмотическая
резистентность (устойчивость). Различают
минимальную и максимальную границы
осмотической резистентности. Для
здоровых лю­дей минимальная граница
соответствует раствору, содержащему
0,42 — 0,48 % NaCl, полный же гемолиз (максимальная
граница) происходит при концентрации
0,30—0,34 % NaCl.

Причины гемолиза. Гемолиз
может быть вызван химическими агентами
(хлороформ, эфир, сапонин и др.), разрушающими
мембрану эритроцитов. В клинике нередко
встречается гемолиз при отравлении
уксусной кисло­той. Гемолизирующими
свойствами обладают яды некоторых змей
{биоло­гический гемолиз).

При сильном встряхивании
ампулы с кровью также наблюдается
разру­шение мембраны эритроцитов —
механический гемолиз. Механический
ге­молиз иногда возникает при длительной
ходьбе из-за травмирования эрит­роцитов
в капиллярах стоп.

Если эритроциты заморозить,
а потом отогреть, то возникает термиче­ский
гемолиз. Наконец, при переливании
несовместимой крови и наличии аутоантител
к эритроцитам развивается иммунный
гемолиз. Последний яв­ляется причиной
возникновения анемий и нередко
сопровождается выде­лением гемоглобина
и его производных с мочой (гемоглобинурия).

37.
Лейкоциты. Лейкоцитарная фор­мула.
Лейкон. Лейкопоэз.

38.Тромбоциты:
строение, количество, формы, функции.Система
мегакариоцит-тромбоцит.

39.
Группы крови. Резус-принадлежность.
Переливание крови. Кровезамещающие
растворы.

Количественное определение билирубина в сыворотке крови по методу Иендрашека.

_{Количественное
определение билирубина в сыворотке
крови по методу Иендрашека.}

_{Принцип
метода.
В основе метода Иендрашека лежит реакция
Ван ден Берга, описавшего способность
билирубина давать розово-фиолетовое
окрашивание с диазореактивом Эрлиха.
Интенсивность образующейся окраски
прямо пропорциональна концентрации
билирубина в растворе. Разрушение
билирубин-альбуминового комплекса
(свободный, или непрямой билирубин)
осуществляется кофеиновым реактивом,
который одновременно переводит билирубин
в растворимое диссоциированное состояние.
Интенсивность образующейся окраски
измеряется на ФЭКе при зеленом светофильтре
(563 нм), а количество билирубина определяется
по калибровочному графику.}

_{Ход
работы. В
3 пробирки отмерить указанные в таблице
реактивы и колориметрировать через 5 —
10 мин. на ФЭКе в кювете 10 мм против
контроля при зеленом светофильтре.}

_{По
калибровочному графику определить
содержание общего и связанного билирубина.
Вычитая из уровня общего билирубина
количество прямого, рассчитать содержание
непрямого (свободного) билирубина.
Сопоставить с нормой содержания у
здоровых людей и сделать вывод.}

_{Нормальное
содержание билирубина в крови – 8,5
– 20,5 мкмоль/л; 75% общего билирубина
составляет непрямой (свободный), 25% —
прямой (связанный) билирубин.}

_{Клинико-диагностическое
значение определения содержания
билирубина в сыворотке крови: определение
общего билирубина и его фракций
используется для диагностики и
дифференциальной диагностики желтух
различной этиологии – гемолитической
(надпеченочной), паренхиматозной
(гепатоцеллюлярной, печеночной) и
обтурационной (механической, подпеченочной).
При гемолитической желтухе гипербилирубинемия
развивается в основном за счет непрямого
(свободного) билирубина. При паренхиматозной
желтухе происходит деструкция гепатоцитов
и нарушается экскреция прямого билирубина
в желчные ходы, он попадает в кровь.
Кроме того из-за функциональной
несостоятельности гепатоциты не способны
эффективно захватывать из крови непрямой
билирубин и конъюгировать его. При
паренхиматзной желтухе наблюдается
гипербилирубинемия смешанного типа.
При обтурационной желтухе нарушается
эвакуация желчи в двенадцатиперстную
кишку, что приводит к повышению в крови
прямого, а в более поздние сроки болезни
и непрямого билирубина. 18.
Пробы коллоидной устойчивости плазмы
крови Вельтмана и тимоловая}

_{Пробы
коллоидоустойчивости белков сыворотки
крови.}

_{А.
Тимоловая проба}

_{Принцип
метода. Метод
основан на образовании плохо растворимого
глобулино-тимололипидного комплекса
при взаимодействии сыворотки крови с
тимоло-вероналовым буфером.}

_{Ход
работы.
К 6 мл тимоло-вероналового буфера (рН
7,6) прибавить 0,1 мл негемолизированной
сыворотки крови и через 30 минут
отколориметрировать при красном
светофильтре в кюветах толщиной 10 мл
против тимоло-вероналового буфера.
Расчет произвести по калибровочному
графику.}

_{В
норме
интенсивность помутнения колеблется
в пределах от 0 до 4 условных единиц.}

_{Б.
Проба Вельтмана}

_{Принцип
метода. Метод
основан на нарушении коллоидоустойчивости
белков сыворотки крови в присутствии
раствора хлористого кальция при
нагревании.}

_{Ход
работы.
К 0,1 мл негемолизированной сыворотки
крови прилить 4,9 мл воды, перемешать и
нагреть над пламенем спиртовки до
однократного закипания пробы. Охладить
смесь и посмотреть ее содержимое на
свет. Если в пробирке нет единичных
хлопьев коагулированного белка, добавить
еще 0,1 мл 0,5% раствора хлористого кальция
и вновь прокипятить. Процедуру повторять
до тех пор, пока не выпадут хлопья.}

_{В
норме
коагуляции наступает при добавлении
0,4 — 0,5 мл раствора хлористого кальция.}

_{Клинико-диагностическое.
Осадочные
пробы широко распространены в клинической
практике. Данная группа проб основана
на исследовании изменений коллоидной
устойчивости белков сыворотки крови
при патологических состояниях,
сопровождающихся диспротеинемией
(воспалительные заболевания, заболевания
печени и почек и др.). Лабильность
сывороточных белков, определяемая в
первую очередь соотношением крупно- и
мелкодисперсных фракций (альбумины/глобулины)
и снижением коллоидоустойчивости при
действии различных денатурирующих
агентов, может быть связана с относительным
увеличением глобулинов при уменьшении
альбуминов. Большое значение имеет и
относительное увеличение γ-глобулинов
в глобулиновой фракции.}