Андрей Смирнов
Время чтения: ~16 мин.
Просмотров: 3

Альфа-амилаза

Бизнес и финансы

БанкиБогатство и благосостояниеКоррупция(Преступность)МаркетингМенеджментИнвестицииЦенные бумагиУправлениеОткрытые акционерные обществаПроектыДокументыЦенные бумаги — контрольЦенные бумаги — оценкиОблигацииДолгиВалютаНедвижимость(Аренда)ПрофессииРаботаТорговляУслугиФинансыСтрахованиеБюджетФинансовые услугиКредитыКомпанииГосударственные предприятияЭкономикаМакроэкономикаМикроэкономикаНалогиАудитМеталлургияНефтьСельское хозяйствоЭнергетикаАрхитектураИнтерьерПолы и перекрытияПроцесс строительстваСтроительные материалыТеплоизоляцияЭкстерьерОрганизация и управление производством

Щелочная фосфатаза (ЩФ)

  • Выявление поражений печени, связанных с закупоркой желчных путей (например, желчнокаменная болезнь, опухоль, киста, абсцесс);
  • Диагностика заболеваний костей, при которых происходит их разрушение (остеопороз, остеодистрофия, остеомаляция, опухоли и метастазы в кости);
  • Диагностика болезни Педжета;
  • Рак головки поджелудочной железы и почек;
  • Заболевания кишечника;
  • Оценка эффективности лечения рахита витамином Д.
  • Дети младше 1 года: мальчики – 80 – 480 Ед/л, девочки – 124 – 440 Ед/л;
  • Дети 1 – 3 года: мальчики – 104 – 345 Ед/л, девочки – 108 – 310 Ед/л;
  • Дети 3 – 6 лет: мальчики – 90 – 310 Ед/л, девочки – 96 – 295 Ед/л;
  • Дети 6 – 9 лет: мальчики – 85 – 315 Ед/л, девочки – 70 – 325 Ед/л;
  • Дети 9 – 12 лет: мальчики – 40 – 360 Ед/л, девочки – 50 – 330 Ед/л;
  • Дети 12 – 15 лет: мальчики – 75 – 510 Ед/л, девочки – 50 – 260 Ед/л;
  • Дети 15 – 18 лет: мальчики – 52 – 165 Ед/л, девочки – 45 – 150 Ед/л.
  • Заболевания костей с усиленным распадом костной ткани (болезнь Педжета, болезнь Гоше, остеопороз, остеомаляция, рак и метастазы в кости);
  • Гиперпаратиреоз (увеличенная концентрация гормонов паращитовидной железы в крови);
  • Диффузный токсический зоб;
  • Лейкозы;
  • Рахит;
  • Период заживления переломов;
  • Заболевания печени (цирроз, некроз, рак и метастазы в печень, инфекционные, токсические, лекарственные гепатиты, саркоидоз, туберкулез, паразитарные инфекции);
  • Закупорка желчевыводящих путей (холангиты, камни желчных протоков и желчного пузыря, опухоли желчевыводящих путей);
  • Дефицит кальция и фосфатов в организме (например, вследствие голодания или неправильного питания);
  • Цитомегалия у детей;
  • Инфекционный мононуклеоз;
  • Инфаркт легких или почек;
  • Недоношенные дети;
  • Третий триместр беременности;
  • Период быстрого роста у детей;
  • Заболевания кишечника (язвенный колит, энтерит, бактериальные инфекции и др.);
  • Прием препаратов, токсичных для печени (метотрексат, хлорпромазин, антибиотики, сульфаниламиды, большие дозы витамина С, магнезии).
  • Гипотиреоз (дефицит гормонов щитовидной железы);
  • Цинга;
  • Тяжелая анемия;
  • Квашиоркор;
  • Дефицит кальция, магния, фосфатов, витаминов С и В12;
  • Избыток витамина Д;
  • Остеопороз;
  • Ахондроплазия;
  • Кретинизм;
  • Наследственная гипофосфатазия;
  • Прием некоторых лекарственных препаратов, таких, как азатиоприн, клофибрат, даназол, эстрогены, оральные контрацептивы.

Повышение уровня

Наиболее выраженное повышение уровня альфа-амилазы в крови происходит при остром панкреатите: активность фермента увеличивается в 6–10 раз. Резкое изменение показателей происходит в промежутке от 2 до 12 часов после повреждения тканей поджелудочной железы и сохраняется на протяжении нескольких дней. При острой боли, вызванной панкреатитом, результаты анализа обычно превышают 1000 Ед/л, но в отдельных случаях они могут находиться в рамках референсных значений. При хроническом течении заболевания активность амилазы сначала умеренно повышается, а затем, по мере гибели клеток поджелудочной железы, уменьшается, достигая нормального уровня.

Также резкое и выраженное повышение количества амилазы в крови происходит при острых состояниях: травмах брюшной полости с повреждением пищеварительного тракта и/или поджелудочной железы, перфорации язвы желудка, кишечной непроходимости, остром аппендиците, перитоните. Умеренное увеличение активности фермента определяется при наличии воспалительного процесса в поджелудочной железе и органах, расположенных рядом. Выход фермента из клеток происходит из-за местного повышения температуры и усиления циркуляции крови. Изменения такого характера наблюдаются при хроническом аппендиците, брюшном тифе, холецистите, внематочной беременности (без разрыва трубы), начальных стадиях рака поджелудочной железы. Причинами незначительного или умеренного повышения концентрации альфа-амилазы в крови могут быть: почечная недостаточность, паротит, вирусный гепатит, саркоидоз, алкоголизм, макроамилаземия, диабетический кетоацидоз.

Работа 25. Демонстрация абсолютной субстратной специфичности

уреазы
(карбамидамидогидролаза;
КФ 3.5.1.5.)

Реактивы.
Мочевина, 1%-ный раствор; тиомочевина,
1%-ный раствор; ацетамид, 1%-ный раствор;
фенолфталеин, 0,5%-ный спиртовой раствор;
лакмусовая бумага.

Оборудование.
Аптечные весы с разновесами; штатив с
пробирками; глазные пипетки; пипетки
вместимостью 1 мл.

Материал.
Соевая мука.

Метод
основан на определении аммиака,
образующегося под действием уреазы
соевой муки на мочевину:

уреаза

O

мочевина

Выделение
аммиака обнаруживается по запаху и по
изменению окраски фенолфталеина и
красной лакмусовой бумаги.

Сравнивают
возможность гидролиза уреазой веществ,
сходных по строению с мочевиной:

H2N
― C ― NH2

S

тиомочевина

CH3
― C ― NH2

O

ацетамид

Ход
определения.
В одну пробирку помещают 1 мл раствора
мочевины, во вторую – тиомочевины, в
третью – ацетамида.

В
каждую пробирку добавляют примерно 100
мг соевой муки и 2 капли раствора
фенолфталеина, тщательно перемешивают
стеклянной палочкой и оставляют стоять
при комнатной температуре.

Следят
за появлением розовой окраски содержимого
в пробирках. Выделение аммиака обнаруживают
также по запаху и с помощью влажной
лакмусовой бумажки, которую подносят
к отверстию пробирок. Сравнивают
результаты выявления аммиака в трех
пробах.

Оформление
работы.
Данные оформить в виде таблицы, сделать
вывод о специфичности уреазы и ее
практическом значении.

Фермент

Субстрат

Пробы на аммиак

Фенолфталеин

Запах

Лакмусовая
бумага

Практическое
значение работы.
Ферменты с абсолютной субстратной
специфичностью, к которым относится
уреаза, катализируют превращение только
одного вещества. Эти ферменты используют
в клинической биохимии и фармации как
аналитические реагенты для определения
веществ, к которым они имеют абсолютную
специфичность. Например, уреаза
используется для определения мочевины
в биологическом материале и лекарственных
препаратах.

Работа 26.
Специфичность действия амилазы
(α-1,4-глюкан-4-глюкангидролаза;
КФ 3.2.1.1.) и сахаразы

(β-D-фруктофуранозид-фруктогидролаза;
КФ 3.1.1.26)

Реактивы.
Крахмал, 1%-ный раствор; сахароза, 2%-ный
раствор; реактив Фелинга*.

Оборудование.
Штатив с пробирками; водяная баня;
лабораторный термометр; глазные пипетки.

Материал.

  1. Слюна,
    разбавленная (см. работу 19).

  2. Сахараза,
    извлеченная из дрожжей. (Для получения
    сахаразы из дрожжей 2 г дрожжей размять
    в ступке, растереть, добавив 10-12 мл
    дистиллированной воды. Содержимое из
    ступки перенести в пробирку и поставить
    в водяную баню при 37˚С на 10-15 мин.
    Отцентрифугировать смесь при 3000 об/мин
    в течение 10 мин. Надосадочную жидкость,
    которая содержит фермент сахаразу,
    слить и использовать в работе).

Метод основан
на сравнительном изучении гидролиза
α-амилазой и сахаразой разных субстратов,
содержащих гликозидные связи: крахмала
и сахарозы. Гидролиз крахмала и сахарозы
оценивают пробой Фелинга на восстанавливающие
сахара (мальтоза, глюкоза).

Ферменты
катализируют реакции по схеме:

α-Амилаза

Крахмал
+ nH2O
Декстрины + Мальтоза

Сахараза

Сахароза
+ H2O
Глюкоза + Фруктоза

Ход
определения.
В одну пробирку вносят 10 капель раствора
крахмала, в другую – такой же объем
раствора сахарозы. Для выявления
специфичности α-амилазы в обе пробы
добавляют по 5 капель разбавленной
слюны, перемешивают встряхиванием и
ставят в водяную баню при 38˚С на 10 мин.
Затем с жидкостью в обеих пробирках
проделывают пробу с реактивом Фелинга
(см. работу 19) и сравнивают окраску.

Для
выявления специфичности сахаразы в
одну пробирку наливают 10 капель раствора
крахмала, а в другую – сахарозы и
прибавляют к ним по 5 капель экстракта
сахаразы дрожжей. Пробы перемешивают
встряхиванием и помещают в водяную баню
при 38˚С на 10 мин, после чего с жидкостью
обеих пробирок проделывают пробу с
реактивом Фелинга. Сравнивают окраску.

Оформление
работы.
Данные занести в таблицу, сделать вывод
о специфичности изученных ферментов и
обозначить, к какому типу специфичности
они относятся.

Фермент

Субстрат

Проба
с реактивом Фелинга

Специфичность
действия

Практическое
значение работы.
Ферменты с абсолютной и относительной
групповой субстратной специфичностью,
обладающие меньшей избирательностью
действия на субстраты, участвуют, как
правило, в гидролизе питательных веществ
или превращении чужеродных соединений.
В частности, α-амилаза и сахараза
проявляют специфичность не к структуре
субстрата в целом, а к типу гликозидных
связей, находящихся в соответствующих
углеводах.

Альфа-амилаза Гемотест

Клиника Инвитро является одним из крупнейших медицинских учреждений коммерческого характера, которая отвечает всем международным стандартам качества лабораторных исследований. Результатам анализов, проведенных в данной клинике, бесспорно, доверяет практически каждый врач. Именно поэтому преобладающее большинство врачей рекомендует сдавать в лабораториях клиники Инвитро протромбин и проводить многие другие исследования. Сдать анализ крови на протромбин в данной клинике можно, как непосредственно в процедурном кабинете одного из офисов. Также можно воспользоваться услугой «анализа на дому», когда к вам приезжает специалист и производит забор крови у вас дома. проводит анализ крови с помощью такого метода, как кинетический колориметрический метод, результаты которого указываются в Ед/л. Альфа-амилаза Гемотест, цена анализа составляет 350 рублей и плюс забор крови.

Показания и противопоказания

Геморрой в 79% случаев убивает пациента

Основное показание для выполнения анализа на альфа-амилазу в крови – острый и хронический панкреатит и другие заболевания, которые вовлекают в патологический процесс поджелудочную железу: рак, закупорка панкреатического протока опухолью или камнем, его обструкция, спазм сфинктера Одди, очаговый панкреонекроз. К этой же группе показаний относятся травмы поджелудочной железы вследствие механического воздействия (удара, падения), эндоскопической ретроградной холангиопакреатографии. В этих случаях исследование уровня амилазы выполняется в комплексе с тестом на липазу и амилазу панкреатическую. Результаты используются для диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний, контроля компенсации панкреатического протока после удаления камней из желчного пузыря. Основанием для назначения анализа могут послужить жалобы пациента на сильную боль в животе и спине, потерю аппетита, рвоту, повышение температуры. Второй группой заболеваний, при которой необходимо исследование уровня альфа-амилазы в крови являются патологии слюнных желез – паротит и другие состояния, при которых нарушается проходимость железистых протоков. Чтобы определить, за счет какой именно изоформы фермента произошло повышение показателей, анализ проводится вместе с тестом на амилазу панкреатическую.

В составе комплексного обследования как вспомогательный метод анализ на альфа-амилазу в крови назначается при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, сопровождающихся нарушением целостности органов или выраженным воспалением: остром аппендиците, перитоните, язве желудка с риском перфорации стенки, остром холецистите, кишечной непроходимости, травмах брюшной полости. Также исследование показано при прерванной трубной (внематочной) беременности, разрыве аневризмы аорты. В комплексе с тестом на амилазу в моче данный анализ выполняется при почечной недостаточности, макроамилаземии – состоянии, при котором фермент соединяется с крупными глобулинами и не способен пройти через почечные клубочки (накапливается в сыворотке).

Анализ на альфа-амилазу в крови не показан при тотальном некрозе поджелудочной железы, последних стадиях онкологии этого органа, муковисцидозе, а также после операций, в ходе которых была удалена большая часть железистой ткани. Во всех этих случаях уровень фермента сильно понижен или не определяется. Противопоказаниями для процедуры забора крови являются: выраженная артериальная гипотония или анемия, моторное и/или психическое возбуждение, сниженная свертываемость крови.

Достоинством этого анализа является его высокая специфичность и возможность выполнить процедуру в короткие сроки. К ограничениям можно отнести недостаточную информативность при изолированном проведении теста – полученные данные интерпретируются в рамках комплексного биохимического исследования мочи и крови, в частности с показателями амилазы панкреатической и липазы.

Альфа-амилаза в моче

Биохимический анализ определения альфы-амилазы в моче проводится при подозрении на острое воспаление поджелудочной железы и для оценки эффективности лечения острого панкреатита.Альфа-амилаза — фермент, который обеспечивает расщепление сложных углеводов. Имеет две формы: слюнную (S) и панкреатическую (P). Альфа-амилаза S вырабатывается преимущественно в слюнных железах. В меньших количествах образуется также в печени, лёгких, в кишечнике, фаллопиевых трубах. Альфа-амилаза Р вырабатывается поджелудочной железой.Из организма выводится почками, поэтому определяется в моче. Хотя диагностическая ценность в случае панкреатита меньше, чем при определении амилазы в крови.Амилаза в моче (диастаза) — является непрямым показателем содержания амилазы в крови и способности почек пропускать ее в мочу.

Показания к определению альфа-амилазы

Биохимический анализ мочи на альфу-амилазу назначают пациентам при:

  • патологии поджелудочной железы (панкреатите, травме, закупорке панкреатического протока, онкологии);
  • перфоративной язве желудка, остром аппендиците, перитоните;
  • паротите (воспалении слюнных желез);
  • муковисцедозе (поражение желёз внешней секреции, тяжёлом нарушении функций органов дыхания);
  • прерывании внематочной беременности;
  • кетоацидозе (сахарном диабете в стадии декомпенсации);
  • остром холецистите (воспаление желчного пузыря);
  • вирусных инфекциях;
  • непроходимости кишечника.

Как собрать мочу на амилазу?

Мочу на альфу-амилазу необходимо собирать в течение суток, после туалета наружных половых органов. Первую порцию мочи утром следует спустить в унитаз. Всю последующую мочу собирают днем, ночью и утром следующего дня в чистый сухой контейнер, который следует хранить в холодильнике. После сбора мочу необходимо перемешать. Затем измеряют объем мочи в миллилитрах и указывают время сбора на направительном бланке.

Расшифровка анализа мочи

Норма амилазы в моче составляет от 24 до 400 Ед/л.Высокий уровень амилазы в моче связан с её повышенным содержанием в крови. В норме амилаза попадает в кровь при естественной гибели определённого процента клеток поджелудочной железы. Если же разрушение носит патологический характер (панкреатит), то в кровь выделяется большее количество фермента. Соответственно больше фильтруется и в мочу. При этом повышение уровня фермента имеет определённую характерную динамику, с максимумом в течение 1-х суток и нормализацией через несколько дней. Стоит отметить, что при панкренекрозе (массивном разрушении ткани поджелудочной железы с полной гибелью её клеток), повышения уровня альфа-амилазы может и не быть, т.к. она не будет образовываться. В случае хронического панкреатита, повышение уровня фермента будет наблюдаться только в периоды обострения.Также амилаза повышена при травмах брюшной полости или операциях на её органах, когда неминуемо имеет место раздражение поджелудочной железы. Кроме этого альфа-амилаза может повышаться при закупорке панкреатического протока камнями или сдавлении его опухолью. Также может повышаться при холецистите, холангите, перитоните, после погрешностей в диете или злоупотребления алкоголем. Повышен уровень амилазы и при раке поджелудочной железы, яичников или лёгких, при воспалительных процессах тазовых органов, перфорации язвы.Стоит помнить, что амилаза вырабатывается и некоторыми другими органами. Поэтому повышение её в моче может иметь и непанкреатические причины. Например, в случае прерывания внематочной беременности тоже возможно повышение уровня альфа-амилазы. Также она может увеличиваться и при воспалении слюнных желез.При почечной недостаточности количество альфа-амилазы, выводимой с мочой может уменьшиться, что представит ложную картину изменения её уровня.Снижение уровня альфа-амилазы определяется при панкреонекрозе, раке поджелудочной железы, тиреотоксикозе.За счет своей небольшой молекулярной массы (55000-60000 дальтон) фермент фильтруется в мочу и выводится из организма почками. Как и другие вещества с небольшой молекулярной массой реабсорбируется в проксимальных канальцах нефрона. Следовательно, гиперпродукция других низкомолекулярных веществ, конкурирующих с амилазой за реабсорбцию, может приводить к ложно низкому результату анализа.

2. Протеинограмма (белковые фракции)

В обычном анализе исследуют только общий белок крови. Если его уровень ниже нормы — это гипопротеинемия. Чтобы выяснить, каких именно белков не хватает, делают подробный анализ разных белковых фракций. С помощью электрофореза в лаборатории общий белок разделяется на 5 полосок. Соответственно, получают 5 фракций белков.

В норме протеинограмма (SPE) выглядит следующим образом:

  • альбумины (ALB) – 55,8 – 66,1%;
  • альфа-1-глобулины (alpha-1) – 2,9 – 4,9%;
  • альфа-2-глобулины (alpha-2) – 7,1 – 11,8%
  • бета-1-глобулин (beta-1) – 4,7 – 7,2%
  • бета-2-глобулин (beta-2) – 3 ,2 – 6,5%
  • гамма-глобулин (gamma) – 1,1 – 18,8%.

Альбумины

Вы когда-нибудь задумывались, как вода удерживается в сосудах? Так вот, ее удерживают альбумины. Образуются они в печени, а выводятся из организма почками. При достаточном количестве альбуминов мы можем не бояться возникновения отеков.

Среди всех белков крови альбумины составляют около 60%. Чтобы узнать реальное количество, обычно их рассчитывают отдельно вне протеинограммы в граммах на литр. Нормальный уровень альбуминов – это 35 – 52 г/л (грамм на литр).

Низкий уровень альбуминов наблюдается при:

  • гепатитах, циррозе и опухолях печени;
  • дефиците белка в пище;
  • болезнях желудочно-кишечного тракта;
  • тяжелой патологии почек;
  • ожогах и травмах тканей;
  • значительном кровотечении;
  • лихорадке и острых инфекциях;
  • гнойных очагах в организме;
  • повышенной активности щитовидки;
  • застойной сердечной недостаточности;
  • злокачественных опухолях;
  • язвенной болезни;
  • пневмонии;
  • саркоидозе;
  • ревматических болезнях;
  • приеме гормональных препаратов (противозачаточных таблеток и кортикостероидов) и противоаритмических средств (например, амиодарон).

Важно!

Повышение альбуминов обычно означает, что у Вас обезвоживание.

Интересный факт!

Глобулины

Глобулины бывают 4 видов: 

  • Альфа-1-глобулины. Их количество увеличивается при воспалении, обострении хронических болезней, распаде тканей и активном делении клеток.
  • Альфа-2-глобулины. Их становится больше, если в организме есть полость, заполненная гноем, при аутоиммунных болезнях и злокачественных опухолях. Эта же фракция снижается при сахарном диабете, панкреатите и токсических гепатитах.
  • Бета-глобулины. Их количество превышает норму при высоком уровне холестерина в крови, болезнях печени, нефротическом синдроме, кровоточащей язве желудка и дефиците гормонов щитовидной железы.
  • Гамма-глобулины. Так называют защитные антитела различных классов иммуноглобулинов (Ig). Их количество в крови увеличивается при вирусных, бактериальных и грибковых инфекциях, аутоиммунных болезнях и циррозе печени. А дефицит гамма-глобулинов означает, что иммунная система истощена.

Важно!

Преальбумины

Это еще одна фракция белков крови, которые несколько отличаются от остальных. Второе название преальбумина – транстиретин (TTR). Оно прямо указывает на особенность протеина – дословно «транстиретин» значит «переносчик гормонов щитовидной железы».

Нормальный промежуток значений преальбуминов – 150 – 500 мг/л (миллиграмм на литр). Они первыми реагируют на дефицит белка в организме, поэтому их низкий уровень считается предвестником протеиновой недостаточности. А еще, преальбуминов становится меньше, если в организме начинается воспалительная реакция.

Персональный сайт – Альфа-амилаза

Амилаза

Альфа-амилаза (диастаза, альфа-1,4-глюкан-4-глюканогидролаза) относится к классу гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов, включая крахмал и гликоген, до декстринов и простых ди- и моносахаридов (мальтоза, глюкоза).

Амилаза в самых больших концентрациях находится в поджелудочной железе и слюнных железах соответственно – в форме поджелудочного и слюнного изоферментов. В физиологических условиях амилаза сыворотки крови состоит на 40% из панкреатической амилазы и на 60% из слюнной амилазы.

Используя специфические ингибиторы или разделение электрофорезом, можно установить происхождение фермента, присутствующего в плазме. Амилаза удаляется из плазмы почками и экскретируется с мочой. Это обуславливает большую информативность определения активности альфа-амилазы в моче как теста оценки функционального состояния поджелудочной железы.

Рост активности амилазы имеет самое большое значение при диагностике заболеваний поджелудочной железы.

Клинико-диагностическое значение:

Активность альфы-амилазы крови и мочи в течение суток значительно меняется.

Гиперамилаземия – повышение активности амилазы в сыворотки крови.

Ø Острый панкреатит – максимальные значения имеют место в первые 6 – 12 часов после проявления симптомов болезни. После этого времени активность фермента снижается, нормализуется через 2 – 5дней. Если активность сохраняется увеличенной более 5 дней, это свидетельствует о увеличении воспаления.

Ø Обострение при хроническом панкреатите

Ø Перфорация язвы двенадцатиперстной кишки

Ø Кишечная непроходимость

Ø Холецистит

Ø Перитонит

Ø Острый аппендицит

Ø Паротит

Ø Алкалоиды (морфин, героин, кодеин)

Ø Отравление метанолом

Ø Большие дозы этанола (у алкоголиков)

Гипоамилаземия – снижение активности амилазы в сыворотки крови (практически не имеет диагностического значения).

Ø Некроз поджелудочной железы

Ø Тиреотоксикоз

Ø Инфаркт миокарда

Гиперамилазурия – повышенное выделение амилазы с мочой.

Ø Острый панкреатит – повышение активности фермента наблюдается в течение первых 24 часа воспаления. Повышенное выделение фермента с мочой сохраняется в последующие 7 -10 дней, несмотря на то, что активность амилазы в крови уже после 3 – 4дней нормальная.

Ø Рак поджелудочной железы

Ø Перфорация язвы двенадцатиперстной кишки

Ø Желчекаменная болезнь

Ø Болезни слюнных желез, паротит, камни в слюнных протоках

Гипоамилазурия – снижение выделения амилазы с мочой.

Ø Болезни почек

Ø Болезни печени

«Определение активности альфы-амилазы в биологических жидкостях унифицированным методом Каравея»

Принцип: под действием альфы-амилазы крахмал гидролизуется с образованием продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Интенсивность уменьшения окраски йод-крахмального комплекса в единицу времени пропорциональна активности фермента.

Исследуемый материал: свежая сыворотка крови, моча.

Состав набора:

Реагент №1 – буфер

Реагент №2 – концентрированный субстрат

Реагент №3 – концентрированный раствор йода

Реагент №4 – раствор фторида калия

Реагент №5 – кислота соляная

Подготовка реагентов к процедуре анализа:

Рабочий раствор субстрата: смешать реагенты №1 и №2 в соотношение 24:1.

Рабочий раствор йода: смешать дистиллированную воду, реагент №3 и реагент №4 в соотношении 7:1:2.

Ход определения:

Реактив Опытная проба Контрольная проба
Субстрат 500 мкл 500 мкл
Водяная баня (370С) 5 минут
Образец (сыворотка, моча) 0,01 мкл
Перемешать и инкубировать при 370С в течение 5 минут
Соляная кислота 4,0 мл 4,0 мл
Образец (сыворотка, моча) 0,01 мкл
Рабочий раствор йода 300 мкл 300 мкл

Опытные и контрольную пробы фотометрировать против дистиллированной воды при длине волны 630 – 690 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см. Активность альфы-амилазы выражается в единицах активности, которые определяются как:

Количество крахмала (мг), гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 сек инкубации.

Расчет активности альфы-амилазы в сыворотке/плазме крови проводить по формуле:

(мг/с х л) =(Екон-Ео/Екон) х С хt х К или (Екон-Ео/Екон) х 66,6

где Ео и Екон – экстинкция опытной и контрольной проб, измеренные относительно воды.

С – коэффициент пересчета на 1 мг крахмала, t – коэффициент пересчета на 1 секунду инкубации

К – коэффициент пересчета на 1 л жидкости.

При соблюдении приведенных в инструкциях соотношений ( С хt х К)=66,6

Нормальные величины: сыворотка/плазма – 3,3 – 8,9 мг/с х л

моча – до 44 мг/с х л

Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации