Экспресс-тест на сифилис: достоинства диагностики, показания, как подготовиться и показания к проведению

Виды анализов крови на сифилис

Для диагностики сифилиса разработан целый ряд методов, но ни один из них не дает 100% точного результата. Материалом для исследования чаще всего служит плазма крови, также используется отделяемое из кожных высыпаний, в некоторых случаях проводится пункция лимфоузлов. К основным видам исследования относят серологические анализы, которые используют для первоначальной диагностики и для контроля результатов терапии.

Серологические анализы на сифилис основаны на механизме образования в организме, при попадании в него возбудителя заболевания, антител, которые взаимодействуют со специальными антигенами. Основные серологические анализы крови на сифилис следующие:

• Реакция Вассермана – в ходе этого анализа к сыворотке крови пациента добавляют сифилитические антигены для определения антилипидных антител (реагинов). Антигены образуют с реагинами иммунный комплекс, который адсорбирует и связывает комплемент. При образовании такого комплекса эритроциты не разрушаются, а выпадают в осадок, что указывает на положительную реакцию. Если в сыворотке крови реагины отсутствуют, происходит гемолиз (разрушение эритроцитов), в этом случае реакция отрицательная.
• Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR или РМП) —  скрининговый метод диагностики сифилиса, который можно рассматривать как более современную модификацию реакции Вассермана. Основными показаниями к тому, чтобы сдать анализ крови на сифилис этим методом являются первичное обследование, медицинские осмотры, контроль эффективности терапии. Если при расшифровке анализа крови на сифилис этим методом получен положительный результат, для его подтверждения назначают другие более точные тесты.
• Анализ крови на сифилис ИФА (иммуноферментный анализ крови) —  относится к передовым и перспективным методам лабораторной диагностики этого заболевания. Принцип исследования заключается в выявлении специфического комплекса антиген-антитело, который образуется при соединении сифилитических антигенов, абсорбированных на твердом носителе, с антителами сыворотки крови пациента. В современной медицинской практике распространен непрямой вариант анализа крови на сифилис ИФА, при котором используются антитела к иммуноглобулинам человека, соединенные с ферментными маркерами. В зависимости от количества связанных антител происходит окрашивание конечных продуктов этой реакции, по степени которого и оценивают результаты анализа.
• Анализ на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) – в ходе этого исследования изучают соединение возбудителей сифилиса в сыворотке крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. Если в сыворотке крови присутствуют бледные трепонемы, происходит агглютинация эритроцитов, то есть склеивание с последующим осаждением. Для расшифровки анализа крови на сифилис методом РПГА оценивают окрашивание пробы, так как агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет.
• Исследование реакции иммунофлюоресценции (РИФ) – в ходе этого анализа определяется интенсивность свечения бледных трепонем в препарате, которая возникает, только если в сыворотке крови присутствуют антитрепонемные антитела.
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – самый специфичный диагностический тест на сифилис, при этом в сыворотке крови определяют наличие видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. Под микроскопом проводят подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Данный анализ крови на сифилис проводят не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.

Анализ RPR может дать ложноположительную реакцию, так как антитела к нему могут выделяться не только при сифилисе, но и в результате некоторых других заболеваний. По статистике анализ на реакцию Вассермана дает один ложноположительный результат на 10 000 исследований. Чтобы исключить ошибочную диагностику сифилиса, результат дополнительно уточняют с помощью других исследований. Наиболее точными методами считаются РИФ, РИБТ и ИФА, которые позволяют выявить сифилис уже в инкубационном периоде и на всех последующих стадиях.

Сравнение с лабораторными анализами на сифилис

Экспресс-тесты могут использоваться только для скрининга.

То есть, они дают ориентировочные результаты.

Даже если такой тест проведен в условиях клиники, под контролем врача, то никакой его результат не является поводом для установления или исключения диагноза.

Потому что тест иногда дает ложноположительные и ложноотрицательные анализы.

Скрининговые исследования всегда должны быть подтверждены другими тестами.

Если же вы проводите анализ дома, что делать его можно исключительно для удовлетворения собственного любопытства.

Ни один врач этот анализ не признает и не внесет в медицинскую карту.

Потому что нет документального подтверждения.

Никто не видел, как вы брали кровь, у кого, как хранили тест-систему и в каких условиях её использовали.

Возможно, на тестовой полоске вы нарезали колбасу, а потом проводили анализ.

Интерпретация результатов анализа

По истечении времени, которое указано выше, пациенту следует смотреть на тестовую часть индикаторного поддона. Интерпретировать результаты экспресс — теста необходимо так:

• Две красные линии возле букв «C» и «T» — подтверждение наличия болезни у тестируемого;
• Одна полоса красного цвета напротив буквы «C» — результат отрицательный, сифилиса, и какого либо сифилитического заболевания у тестируемого нет.

Если же экспресс-анализ показывает одну красную линию возле буквы «T», это значит, что тест был проведен с ошибкой, и результаты невозможно правильно истолковать.

Если линии вообще отсутствуют, это так же признак неправильно выполненного анализа. В таких ситуациях необходимо купить новый тест и повторить процедуру, точно выполняя все инструкции и рекомендации.

При положительном результате тестирования, нужно срочно обращаться к врачу — венерологу и обследоваться.

Если диагноз подтвердится, пациенту будет назначено лечение, которое направлено на уничтожение Treponema pallidum в организме.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

Нетрепонемные тесты

В диагностике сифилитической инфекции не бывает мелочей. От точности результата зависит правильность лечения, а также дальнейшее развитие инфекции. Нетрепонемные анализы не считаются специфическими, поэтому всегда присутствует возможность получения ложноположительного результата. К таким видам тестов относится:

1. Реакция Вассермана. Такое исследование проводится все реже, так как появились более точные методы диагностики сифилиса.
2. Микроскопический тест. На его основании нельзя поставить диагноз. Однако он должен стать толчком для анализа крови РПГА или других исследований.
3. Антикардиолипиновое исследование (быстрых плазменных реагинов). Он дает экспресс-результат и разрешается к применению в домашних условиях. Он в 75% случаев позволяет увидеть антифосфолипидные антитела в крови человека, у которого присутствует первичный сифилис. Чем дольше развивается патология, тем достовернее будет результат. Его разрешается использовать на любой стадии заболевания.

Положительный анализ является прямым показанием к комплексной диагностике и назначению медикаментозного лечения. Не стоит упускать из виду симптоматику болезни.

Что представляют собой способы обнаружения трепонемы

После того, как доктор соберёт анамнез больного и проведёт первичный осмотр ротовой полости, половых органов, кожных и слизистых покровов, у него появляется базовая информация по поводу состояния обратившегося к нему пациента, однако этого недостаточно для постановки точного диагноза.

Среди методик обнаружения наличия бледной трепонемы в организме – темнопольная микроскопия, метод полимеразной цепной реакции, а также прямой реакции иммунофлюоресценции.

Микроскопические исследования, или темнопольная микроскопия. Для выявления микроорганизмов во взятом материале, его микроскопия проводится в тёмном поле. Использование этого метода объясняется тем фактом, что некоторые бактерии плохо поддаются окрашиванию или вовсе не окрашиваются специальными красителями. К тому же, изучение материала в тёмном поле даёт возможность изучить состояние живых бактерий, а так как темнопольная микроскопия не требует окрашивания, она отличается более низкой стоимостью и занимает меньше времени для проведения.

Для анализа отбирается содержимое кожных сифилитических образований – язв, папул, эрозий, в некоторых случаях – материал из периферических лимфоузлов.

Что может показать такой анализ? Обнаружение в биологическом материале движущихся бледных трепонем в любом количестве является доказательством наличия у обследуемого сифилиса. Отличить бледную трепонему от других, непатогенных спирохет, можно по количеству завитков.

Следует отметить, что такой метод является единственным объективным способом определить диагноз “сифилис”, если речь идёт о ранних, свежих, первичных формах, когда серологические анализы дают негативные результаты. Особенно ценны его показания при диагностировании нейросифилиса и состояния реинфекции.

Как производится забор материала? Эрозия или папула сначала обрабатываются антисептическим средством – так место отбора жидкости готовится к вмешательству медика. После этого на её поверхность производится надавливание тупым скальпелем – таким образом медик добивается выделения тканевого сока прозрачного жёлтого цвета. Кроме того, может осуществляться соскоб или взятие мазка со слизистых. Срок годности полученного материала достаточно мал, поэтому анализ должен осуществляться сразу после его забора.

По результатам исследования у больного можно диагностировать первичный или вторичный сифилис, а также ранний врождённый сифилис у ребёнка.

Положительные результаты рассматриваются как достоверное основание для определения заболевания. Если у человека не выявлены трепонемы, процедуру повторяют до трёх раз, до этого применяя к ране компрессы с физиологическим раствором.

Если есть подозрение на третичный сифилис, или сочетание сифилиса с онкологическими новообразованиями, темнопольное микроскопирование сочетается с окрашиванием по методу Романовского-Гимзе, или серебрением по Морозову.

Метод ПИФ. Отличается большей безопасностью для проводящего его персонала, чем темнопольное исследование. Трепонемы в мазках при этом зафиксированы, они не обязательно должны быть живыми, поэтому осуществлять такое обследование можно в любое время после отбора материала.

Для изучения у больного отбирается содержимое жидкости, отделяемой сифилидами, или тканевые срезы с областей кожных проявлений сифилиса, лимфатических узлов. Чувствительность метода составляет до 95%.

Метод ПЦР. С помощью полимеразной цепной реакции, результат обследования можно получить уже через несколько часов после забора материала. Его чувствительность достигает 98,6%.

Однако, несмотря на кажущиеся преимущества, методика практически не используется в России и Украине, так как его чувствительно и специфичность недостаточно хорошо изучена в сравнении с прямыми методами диагностики. ПЦР-скрининг используют как дополнительный способ диагностирования врождённого сифилиса, нейросифилиса, а также при затруднении диагностики сифилиса у ВИЧ-больных.

Изучение сыворотки крови таким способом неэффективно, для ПЦР отбирают содержимое сифилидов.

Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 — Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

1. 1Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
2. 2Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
3. 3Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
4. 4Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
5. 5Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.