Как определить группу крови по стандартным сывороткам

Переливание крови

В медицинской практике встречается ряд заболевания, при которых жизнь пострадавшему можно спасти только путем переливания крови: острые кровопотери, инфекционные заболевания, шоковые состояния. Могут проводить переливание крови при низком гемоглобине. Процедуру назначают при его значительном снижении (до 60г/л). Во время гемотрансфузии быстро увеличиваются содержание Hb, железа, и самочувствие больного значительно улучшается. Но процесс переливания крови имеет много сложностей и это довольно опасная процедура, она должна проводится только в условиях стационара опытным трансфузиологом.

Человек, от которого берут кровь для трансфузии, называется донором, а тот, кто принимает кровь, является реципиентом. Во избежание осложнений во время трансфузии нужно перед процедурой тщательно исследовать кровь реципиента.

При переливании крови, совместимость проверяется трижды

Группа крови и резус фактор всегда определяются при госпитализации больного, нуждающегося в переливании крови. Гемотрансфузия несовместимой крови может закончиться летальным исходом. Поэтому перед началом переливания, кровь донора и реципиента неоднократно проверяют на групповую принадлежность, затем проводят индивидуальную и биологическую пробу на совместимость.

Во время индивидуальной пробы кровь донора и реципиента смешивают отдельно на планшете и наблюдают за ее состоянием. Если через 5 минут агглютинация не произошла можно переходить к пробам.

Следующий этап – биологическая проба, когда кровь вводят непосредственно пациенту. Сначала переливают примерно 10 мл крови и наблюдают за состоянием больного 3 минуты, если патологической реакции на трансфузию нет, снова повторно вводят 10 мл крови и ожидают 3 минуты. Повторяют процедуру три раза. Только после этого проводят гемотрансфузию.

Переливание в зависимости от групп

Таблица переливания крови по группам
Группа реципиента	Группа донора
I (0)	II (A)	III (B)	IV (AB)
I (0)	+	—	—	—
II (A)	+	+	—	—
III (B)	+	—	+	—
IV (AB)	+	+	+	+
«-» агглютинация, кровь несовместима; «+» отсутствие агглютинации, переливание возможно.

I(0) группу крови можно переливать всем людям – человек с данной группой крови универсальный донор. Обладатели IV(AB) группы крови – универсальные реципиенты, могут принимать кровь от всех доноров.

Существуют станции переливания, где происходит забор крови, ее заготовка и переработка. Ценными донорами являются люди с IV группой – это самая редкая группа крови, определяется у 6% людей (еще реже определяется IV группа с отрицательным резусом). Самая распространённая группа крови — первая (у 40% жителей).

Обязательно при переливании крови и определении совместимости следует учитывать резусную принадлежность!

Как узнать группу крови? Сделать это можно в медицинских учреждениях, где врач, пользуясь специальными методиками, установит групповую принадлежность крови.

Может ли в течении жизни поменяться группа крови? Определенно нет. Группа крови закладывается на генетическом уровне, передается от родителей и поменяться в ходе жизнедеятельности не может.

Для определения группы используют в основном два способа: метод определения по стандартным сывороткам или с цоликлонами.

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Разведение производится так:

1. В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.

2. Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

1. На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
2. Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

• Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы;
• Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй;
• При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III;
• Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

0(I)	A(II)	B(III)	AB(IV)	0(I)	A(II)	B(III)
–	–	–	–	–	+	+	0(I)
+	–	+	–	–	–	+	A(II)
+	+	–	–	–	+	–	B(III)
+	+	+	–	–	–	–	AB(IV)

+ агглютинация;

– агглютинация отсутствует;

— реакцию не проводят.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Результат агглютинации	Анти-А	Анти-В
–	–	0(I)
+	–	A(II)
–	+	B(III)
+	+	AB(IV)

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

• Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0;
• Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования;
• Стеклянные палочки для перемешивания образцов;
• Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Как определить группу крови

Существующие на сегодняшний день способы установления группы крови далеки от совершенства. Все они подразумевают доставку образцов в лабораторию и занимают не менее 20 минут, что может быть весьма критично в определенных условиях. Три года назад в Китае разработали экспресс-тест, способный определить группу вашей крови всего за 30 секунд даже в полевых условиях, но пока он широко не применяется в медицине, поскольку имеет сильную погрешность.

Для определения группы кровь берут из вены

Скорость тестов на группу крови является одной из главных проблем. Попади человек в аварию, случись с ним несчастный случай – его группу крови необходимо будет установить, чтобы спасти ему жизнь. В случае же, если данных по пострадавшему нет, придётся ждать еще 20 минут, и это при условии, что лаборатория находится под рукой.

Поэтому врачи настоятельно рекомендуют либо запомнить свою группу крови (такой тест как минимум делают в детстве, в больницах и даже на призывной комиссии в армию), либо записать ее. Вон на айфоне есть приложение «Здоровье», куда можно внести информацию о себе, включая рост, вес и группу крови. На случай, если вы окажетесь без сознания в больнице.

Раздел «Медкарта» в приложении «Здоровье»

На сегодняшний день в мире используют 35 систем определения группы крови. Наибольшее распространение, в том числе в России, получила система ABO. По ней кровь делится на четыре группы: А, В, О и АВ. В России им для удобства использования и запоминания присвоены номера — I, II, III и IV. Между собой группы крови отличаются содержанием в плазме крови и эритроцитах особенных белков. Эти белки не всегда совместимы между собой, и если несовместимые белки соединить, они могут склеивать эритроциты и разрушать их. Поэтому существуют правила переливания крови, чтобы переливать кровь только с совместимым типом белков.

Для определения группы крови ее смешивают с реагентом, содержащим известные антитела. На основу наносят три капли крови человека: к первой капле добавляют реагент анти-А, к другой капле — реагент анти-В, к третьей – реагент анти-D. Первые две капли используются, чтобы определить группу крови, а третья — для выявления резус-фактора. Если эритроциты не склеились в ходе опыта, значит, группа крови человека совпадает с типом анти-реагента, который в нее добавили. Например, если в капле, куда добавили реагент анти-А, частички крови не слиплись, значит у человека группа крови А (II).

1 группа крови

Первая (I) группа крови, она же группа O. Это самая распространенная группа крови, она выявлена у 42% населения. Ее особенность в том, что на поверхности кровяных телец (эритроцитов) нет антигена A или антигена B.

Поскольку в I группе нет антигенов, долгое время считалось, что человек с I группой крови «универсальный донор» – мол, она подойдет к любой группе и «приспособится» к антигенам на новом месте. Сейчас медицина отказалась от этого понятия, поскольку были выявлены случаи, когда организмы с другой группой крови все равно отвергали I группу. Поэтому переливания производятся почти исключительно «группа в группу», т. е. у донора (от кого переливают) должна быть та же группа крови, что и у реципиента (кому ее переливают).

Человека с I группой крови ранее считали «универсальным донором»

2 группа крови

Вторая (II) группа крови, она же группа A, означает, что на поверхности эритроцитов находится только антиген А. Это вторая по степени распространения группа крови, она есть у 37% населения. Если у Вас группа крови А, то вам нельзя, например, переливать кровь группы В (третья группа), ибо в таком случае в вашей крови имеются антитела, которые борются против антигенов В.

3 группа крови

Третья (III) группа крови — группа B, которая противоположна второй группе, так как на кровяных тельцах присутствуют исключительно антигены B. Она присутствует у 13% людей. Соответственно, если перелить человеку с такой группой антигены типа A, они будут отторгнуты организмом.

4 группа крови

Четвертая (IV) группа крови в международной классификации называется группа AB. Это означает, что в крови есть как антигены A, так и антигены B. Считалось, что если у человека такая группа, ему можно переливать кровь любой группы. Из-за наличия обоих антигенов в IV группе крови нет белка, который склеивает эритроциты — это главная особенность данной группы. Поэтому эритроциты крови человека, которому делают переливание, не отталкивают четвертую группу крови. И носителя группы крови АВ можно назвать универсальным реципиентом. По факту медики стараются редко прибегать к этому и переливать только ту же самую группу крови.

На самом деле для четвертой группы в этом нет ничего критичного — главное перелить кровь с тем же резус-фактором.

Наглядное отличие групп крови

3.2.1. Определение группы крови с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток

На
основании реакции агглютинации
эритроцитов установлено, что кровь
каждого человека принадлежит к одной
из четырех групп. Кровь различных групп
отличается наличием агглютининов и
агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие
вещества) находятся в плазме. Агглютиногены
– вещества, способные склеиваться,
содержатся в эритроцитах.

Имеются
два вида агглютиногенов – А и В и
соответственно два вида агглютининов
– 
и .
Реакция агглютинации, т. е. склеивание
эритроцитов, наступает лишь при смешении
одноименных агглютининов и агглютиногенов,
например 
и А или 
и В. Агглютинацию нельзя смешивать с
процессом свертывания крови – выпадением
фибрина в виде нерастворимых нитей.

Определение
группы крови имеет практическое значение
для переливания крови. При этом
учитывают, прежде всего, свойства
эритроцитов донора, так как плазма
вводится в малом количестве и, разводясь
в крови реципиента, теряет свои
агглютинирующие качества. Однако при
переливании значительного
количества
крови, учитывают и агглютинины донора.

Для
работы необходимы:
донорская кровь, стандартные сыворотки
I,
II
и III
групп двух
разных серий,
предметные стекла (чашка Петри), пипетки,
стеклянные палочки.

Проведение
работы.
Группы крови определяют по свойствам
эритроцитов, которые устанавливают с
помощью стандартных сывороток, содержащих
известные агглютинины.

1. На
   чистые чашки Петри в обозначенные
   участки наносят по 1 капле сыворотки
   I,
   II
   и III
   групп двух
   серий,
   содержащих соответственно агглютинины:
   I
   – 
   и ,
   II
   – 
   и III
   – .

2. В
   каждую каплю сыворотки с помощью
   стеклянных палочек или разных углов
   предметных стекол вносят небольшое
   количество донорской крови и тщательно
   размешивают кровь в капле сыворотки
   палочкой до тех пор, пока смесь не примет
   равномерного розового цвета.

3. Покачивают
   чашку Петри в течение 5 минут. При
   наличии агглютинации капля становится
   прозрачной, а эритроциты склеиваются
   в виде комочков.

4. По
   мере наступления агглютинации, но не
   раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь
   добавляют по одной капле физиологического
   раствора для предупреждения образования
   «монетных столбиков» из эритроцитов.

5. Определяют
   наличие агглютинации в каждой капле и
   устанавливают группу крови.

• Отсутствие
  агглютинации во всех трех каплях
  говорит об отсутствии агглютиногенов
  А и В в эритроцитах исследуемой крови,
  такая кровь принадлежит O(I)
  группе.

• Если
  агглютинация произошла с сыворотками
  I
  и III
  групп, содержащих соответственно
  агглютинины 
  и ,
  то, следовательно, эритроциты исследуемой
  крови содержат агглютиноген А и эта
  кровь принадлежит А(II)
  группе.

• Если
  агглютинация произошла с сыворотками
  I
  и II
  групп, содержащих агглютинины 
  и ,
  то эритроциты исследуемой крови
  содержат агглютиноген В и эта кровь
  принадлежит В(III)
  группе.

• Наличие
  агглютинации в сыворотках всех трех
  групп указывает на присутствие в
  эритроцитах исследуемой крови
  агглютиногенов А и В, следовательно,
  она принадлежит АВ(IV)
  группе. Однако, в этом случае для
  исключения неспецифической агглютинации
  эритроцитов необходимо провести
  дополнительное исследование со
  стандартной сывороткой группы АВ (IV).
  Отсутствие агглютинации в этой капле
  позволит считать реакцию специфической
  и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).

Источниками
ошибок могут быть:

1. Оценка
   реакции отрицательной
   при фактическом
   наличие агглютинации. Это может быть
   обусловлено:

   1. Поздней
      или слабовыраженной агглютинацией в
      связи с малой активностью стандартных
      сывороток;

   2. Нарушением
      соотношения 1:10 при взятии большого
      количества крови;

   3. Наличием
      температуры воздуха большей, чем 25оС.
      В таких случаях исследования проводят
      при охлаждении стекла.

2. Оценка
   реакции положительной
   при практическом отсутствии агглютинации.
   Это может быть обусловлено:

   1. Образованием
      «монетных столбиков»;

   2. Наличием
      панагглютинации, которая развивается
      при

t=15
оС; для ее
исключения следует повторить определение
при более высокой температуре;

1. 1. Подсыханием
      сывороток и образованием по краям
      капель «зернистости», принимаемой за
      агглютинацию. Это может быть в тех
      случаях, когда чтение результатов
      производится более чем через 5 минут.

Оформление
протокола. Записать
принцип метода определения группы
крови, ход работы. Зарисовать полученные
результаты: обозначить номер группы
крови, агглютинины стандартных сывороток
и отсутствие или наличие агглютинации,
например, —

группа
крови

неизвестная
кровь (эритроциты)

агглютинины
сывороток

Вывод.
Назвать и
правильно записать группу крови.
Обосновать полученный результат. Указать
в каких случаях исследуемая кровь может
быть использована в качестве донорской.
Нарисовать схему совместимости групп
крови системы АВО.

Методика определения показателей

Определение групп крови по стандартным сывороткам проводится с использованием реактивов, содержащих агглютинины разных групп, вступающих в реакцию с агглютиногенами, находящимися на поверхности эритроцитов.

Чтобы выявить группу крови, достаточно воспользоваться стандартными сыворотками лишь II и III групп. Однако для исключения возможных ошибок с целью дополнительного контроля используют и остальные (I и IV групп).

Изготовление сыворотки

Стандартные сыворотки для определения группы крови получают из донорской крови. С этой целью используют специальную систему: выделяют плазму вместе с находящимися в ней антителами, затем ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия.

Помещают 1 мл раствора NaCl 0,9% в пробирку, добавляют плазму (1 мл), взбалтывают состав. Берут 1 мл полученной смеси, переносят в другую пробирку с изотоническим раствором.

Для одного исследования группы крови с помощью стандартных сывороток их требуется 3 (2 серий для каждой группы), отличающихся по цвету:

• I (0) — прозрачная жидкость, флакон снабжен белой этикеткой;
• II (А) — жидкость голубая, флакон с 2 полосами синего цвета;
• III (В) — бледно-розовая жидкость, флакон с 3 розовыми полосками;
• IV(АВ) — желтая жидкость, на этикетке флакона 4 желтые полоски.

На этикетках указаны:

• титр;
• срок годности;
• дата выпуска;
• серийный номер.
• данные об изготовителе.

Проведение исследования

Температура в помещении должна быть в пределах +15…+ 25°С, требуется хорошее освещение.

Используют специальный планшет, имеющий области с пометками. На него наносят каждую сыворотку (берут 2 образца, 1 из них — контрольный, 2 — для диагностики).

Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают каплю крови, смешивая с каждым в отдельности реагирующим раствором. Спустя несколько минут (5-6) анализируют полученные данные:

• если происходит реакция агглютинации — сывороточный тест считается положительным;
• при отсутствии агглютинации тест отрицательный.

Результаты исследования

В случае положительного результата эритроциты склеиваются (в реагирующем растворе образуются красные сгустки).

Если цвет раствора не изменился, реакция считается отрицательной. Есть закономерности, зависящие от комбинаций отрицательных и положительных реакций, происходящих в растворах:

• I(0), если ни в одном образце нет положительной реакции;
• II (А), если в образце II (А) состояние не изменилось, а в 2 остальных оказалась положительная реакция;
• III(В), если только в образце III(В) реакция оказалась отрицательной;
• IV(АВ), если в каждом из 3 образцов реакция оказалась положительной.

Появление других комбинаций связано с погрешностями, возникающими при исследовании.

Использование старых реактивов или неправильное проведение анализа может сопровождаться слабой реакцией. В таких случаях с целью уточнения необходимо сделать тесты с использованием других методик.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки

Стандартные
изогемагглютинирующие сыворотки,
используемые для определения группы
крови, соответствуют четырем группам
крови 0 (I),
А (I
I),
В (I
I
I),
AB (IV). Их получают из крови, реже из других
жидкостей (асцитической, плеврального
экссудата). Используется
кровь от доноров, трупная или плацентарная
кровь. Кровь отстаивается и забирается
сыворотка, к которой добавляется
консервант (борная кислота из расчета
3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После
отстаивания сыворотка разливается по
стерильным ампулам или флаконам, которые
сразу же запаиваются или герметично
закупориваются.

Требования,
предъявляемые к стандартным
изогемагглютинирующим сывороткам:

1. агглютинация с
   соответствующими эритроцитами должна
   появиться в течение 15-20 с, а через 2 мин.
   она должна быть четкой;

2. не
   давать агглютинацию с эритроцитами
   одноименной и первой групп;

3. титр
   сыворотки
   должен быть не ниже 1 : 32;

4. сыворотка
   должна быть без признаков микробного
   загрязнения, прозрачной;

5. каждая
   ампула должна иметь паспорт с обозначением
   группы, срока годности, титра, места и
   времени приготовления, нанесены
   соответствующего цвета полосы.

Во
избежание ошибок при определении групп
крови сыворотки окрашивают в определенный
цвет. Окраска стандартных изогемагглютинирующих
сывороток: 0(I)-
неокрашивается, А(II)
— синий цвет, B(III) – розовый, AB(IV)- желтый.
Сыворотки хранят герметично закрытыми,
в темном месте, лучше в холодильнике.

Техника определения группы крови системы АВ0 стандартными сыворотками

Показания:необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить:стандартную тарелочку с углублениями;набор стеклянных палочек;изотонический раствор хлорида натрия;набор гемагглютинирующих сывороток 1,2,3,4 групп двух серий;пипетки;исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0С.

№ 11

studopedia.ru

Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (цоликлон анти-d Супер).

На
тарелку наносятбольшую
каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом
помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл)
исследуемой крови и смешивают кровь с
реагентом. Реакция агглютинации начинает
развиваться через 10 — 15 сек., а четко
выраженная агглютинация наступает
через 30 — 60 сек. Результаты реакции
учитывают через 3 мин. Тарелку после
смешивания реагента с кровьюрекомендуется
покачивать не сразу, а через 20 — 30 сек,
что позволяет за это время развиться
более полной крупнолепестковой
агглютинации. Цоликлон анти-D Супер
выпускается во флаконах по 2, 5 или 10 мл
(1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1
год в холодильнике при 2-8°С.
Вскрытый флакон можно хранить в
холодильнике в течение месяца в закрытом
виде.