Определение глюкозы в крови гексокиназным методом

Глюкозооксидазный способ определения глюкозы

Для определения концентрации исключительно глюкозы в различных жидкостях организма человека используют глюкозооксидазный метод. Преимуществом этого теста является его точность.

Диагностика в отличие от экспресс-методов позволяет выявить количество чистой глюкозы, без домеси к ней фруктозы и других сахаров. Принцип этой реакции заключается в окрашивании раствора, которое происходит вследствие взаимодействия окислителей со специфическими красителями.

Оценка результатов исследования проводится с помощью метода колориметрии и сравнения со стандартными растворами.

Когда назначается проведение глюкозооксидазного метода?

Этот тест используют для выявления нарушения толерантности к сахару и развития преддиабета, а также в стадии разгара болезни. Но для таких целей анализ используют редко, это связано с его высокой стоимостью и длительным ожиданием результата. Чаще всего определение глюкозы в крови и моче с помощью этого метода применяют при дифференциальной диагностике таких заболеваний, как:

• синдром непереносимости лактозы;
• непереносимость фруктозы;
• выделение фруктозы с биологическими жидкостями организма;
• повышенная концентрация пентозы в моче.

Что в основе этого способа?

При окислении сахара кислородом происходит выделение перекиси.

Существуют различные методы определения концентрации глюкозы в крови, но глюкозооксидазный является наиболее точным. Подоснова его состоит в том, что при взаимодействии сахара с кислородом воздуха происходит окисление реагента. В раствор выделяется перекись водорода.

Это вещество взаимодействует с ортотолуидином, образуя окрашенное соединение. Для поведения этой реакции необходимо присутствие специальных ферментов. При реакции окисления должна присутствовать глюкозооксидаза, а при окрашивании жидкости — пероксидаза.

Интенсивность окраски раствора будет зависеть от содержания глюкозы и быть более всего интенсивной при высоком ее содержании.

Суть глюкозооксидазного метода определения глюкозы

Оценка результата происходит с помощью количественного метода фотометрии через один и тот же промежуток времени. Обязательно использование калибровочного раствора, который содержит определенную заявленную норму сахара и, отталкиваясь от нее, можно судить о концентрации глюкозы в выделяемых жидкостях организма, чаще в крови.

Как проводится анализ?

Забор материала от больного осуществляется натощак. Для проведения теста используют венозную кровь в количестве 5 мл. Накануне диагностики больному показана строгая диета.

Это позволит судить о достоверности результата и исключить возможные погрешности анализа. За 2 дня перед изъятием крови пациент должен отказаться от вредных привычек употребления алкоголя и курения.

Также необходимо ограничить прием чрезмерно сладких блюд и по возможности избегать стрессовых ситуаций.

Для получения плазмы с сахаром проводится центрифугирование крови.

Чаще всего этот метод определения концентрации глюкозы выполняют способом центрифугирования, которым выделяют форменные элементы.

Расчет уровня глюкозы проводится по калибровочному графику или с помощью правила порций.

Реактивы для исследования

Для определения сахара наиболее удобно использовать экспресс-методы определения глюкозы в крови. Это объясняется простотой в использовании и быстрым получением результата.

Кроме этого, больному не нужно идти в лабораторию или больницу. Но в отличие от глюкозооксидазного теста такая диагностика является недостоверной.

Так как не дифференцирует глюкозу от других сахаров и определяет их концентрацию вместе.

Основу глюкозооксидазной реакции составляет натрия хлорид 9% раствор и цинка сульфат 50%. Их добавляют на стадии центрифугирования крови. Кроме этого, используют буферный раствор с уксусной кислотой и ацетатом натрия.

После, добавляется глюкозооксидаза, из-за чего выделяется перекись водорода и пероксидаза, участвующая в окрашивании раствора до нужной концентрации для получения точного результата.

Нормы при проведении анализа

Глюкозооксидазное исследование крови проходят обязательно на пустой желудок и используют для этого плазму или сыворотку. Норма количества ее для взрослых как для женщин, так и для мужчин составляет 3,3—5,5. Для детей до 15-ти лет этот показатель немного ниже и колеблется в пределах 3,2—5,3.

У новорожденных глюкоза крови составляет 1,7—4,2. Увеличение показателей наблюдается при развитии у больного сахарного диабета или при нарушении толерантности к глюкозе.

Это состояние является преддиабетом, и если его вовремя не лечить, то в скором времени оно приведет к развитию этой тяжелой патологии.

4.Методы и один из способов определения сахара в крови

Определение сахара в крови:

Содержание сахара в крови определяют
методами, основанными на восстанавливающих
свойствах глюкозы (метод Хагедорна-Йенсена,
Крицелиуса Фолина-Ву и др.) или на ее
цветных реакциях с определенными
реактивами (ортотолуидиновая методика
Фрида и Гофльмайера и др.).

Глюкозооксидазно-пероксидазный метод
с колориметрическим завершением (метод
Триндера). Принцип метода заключается
в следующем: глюкоза окисляется кислородом
воздуха в присутствии фермента
глюкозооксидазы (ГО) с образованием
глюконовой кислоты и эквимолярного
количества перекиси водорода. Перекись
водорода в присутствии пероксидазы
(ПО) окисляет компоненты хромогенной
смеси с образованием красителя.

Интенсивность окраски образовавшегося
продукта пропорциональна концентрации
глюкозы.

Как провести тест?

Чтобы аппарат выдавал стабильный, точный результат следует:

• Хранить аппарат в хороших условиях, без сильных перепадов температур и высокой влажности.
• Полоски для теста должны сохраняться в защитном контейнере.

Перед проведением теста нужно:

• Тщательно вымыть руки, а место прокола продезинфицировать спиртовой салфеткой.
• После прокола кожу нужно обработать антисептиком.
• Проводить забор крови для теста лучше в ванной комнате.
• Игла должна быть простерилизована.
• Глубину и место прокола должен определить лечащий врач.

Кровь на полоске должна аккуратно прислоняться к глюкометру, внимательно следовать инструкции в зависимости от типа аппарата. Проводить забор крови нужно не более 4 раз в сутки.

Причины недостатка сахара в крови

Снижение количества глюкозы в крови также является настораживающим признаком. Возможные причины этого состояния:

• длительное голодание, в том числе и скрытое при болезнях системы ЖКТ;
• недостаток жидкости в организме;
• заболевания пищеварительной системы – колиты, дуодениты, гастриты;
• хронические заболевания в анамнезе;
• недавний эпизод тяжелого заболевания, состояние после травмы;
• инсулинома – новообразование в поджелудочной железе, продуцирующее избыток инсулина.

Все это приводит к снижению уровня сахара, патологии головного мозга, интоксикации соединениями мышьяка, хлороформом; к саркоидозу – полиорганному воспалительному процессу, при котором происходит образование гранулем.

Резкое падение уровня сахара в крови отражается на поведении ребенка. На начальных этапах присутствует возбуждение, малыш просит чего-нибудь сладкого. При невозможности удовлетворить тягу к углеводам у ребенка появляется следующая симптоматика:

• гипергидроз;
• головокружение;
• нарастающая слабость;
• судороги;
• утрата сознания.

Введение глюкозы способствует улучшению состояния ребенка. Если же этого не сделать, то развивается гипогликемическая кома. Это может закончиться печально.

Прорыв в области эндокринологии

Настоящим прорывом в области эндокринологии, по мнению российских ученых, стал тонометр-глюкометр «Омелон В-2», действительно способный облегчить жизнь многомиллионной армии больных сахарным диабетом.

Что такое «Омелон В-2»?

«Омелон В-2» — уникальная разработка российских ученых, открывающая новые возможности диагностики нарушений углеводного обмена. Он принципиально отличается от уже существующих тонометров и глюкометров. Омелон — прибор, разработанный совместно учеными Российской Академии Медицинских Наук и инженерами МГТУ им. Н.Э. Баумана специально для одновременного измерения артериального давления и уровня глюкозы в крови человека. Фактически, один аппарат совмещает в себе функции тонометра и глюкометра. При использовании прибора «Омелон В-2» измерение содержания глюкозы в крови происходит неинвазивным способом. Данный способ измерения основан на хорошо известной и давно выявленной зависимости динамической упругости сосудов человека от содержания глюкозы в крови. Определение КГК проводится по методу Эльбаева-Перковского (интраполярный анализ пульсовой волны). При работе тонометра в процессе измерения артериального давления прибор снимает и анализирует параметры пульсовой волны по запатентованной методике (для анализа используется 12 параметров пульсовой волны: скорость, ритм, сила, давление в капиллярах, систолический объём крови и т.д.) Затем по этим параметрам математически рассчитывается концентрация глюкозы.

Как измерять уровень глюкозы в крови с помощью этого прибора?

Измерение уровня глюкозы крови при помощи прибора «Омелон В-2» не требует взятия крови на анализ. В этом заключается основное отличие данного устройства от обычных глюкометров и основное его преимущество перед ними.

Использование аппарата «Омелон В-2» значительно упрощает контроль уровня глюкозы, поэтому прибор может использоваться не только людьми, уже страдающими сахарным диабетом, но и теми, кто хочет этого заболевания избежать. «Омелон В-2» доступен и очень удобен для использования в домашних условиях, а значит про посещение поликлиники, длинные очереди и долгое ожидание результатов анализа можно забыть. Кроме того, процесс абсолютно безопасен и безболезнен – ведь прокалывать палец больше не придется.

Важность контроля артериального давления и уровня глюкозы крови

Многие из нас не знают, насколько важно одновременно контролировать уровень артериального давления и концентрации глюкозы крови, так как их совместное повышение увеличивает риск развития инсульта, других заболеваний сердечнососудистой системы в 10 раз

Почему же на сегодняшний ни один мировой производитель не использует данную методику измерения, несмотря на огромные и явные преимущества для потребителя?

Во-первых, потому что понимание какого-либо процесса требует технического воплощения и здесь всегда кто-то является первым.

Во-вторых, существующий и доминирующий способ быстрого измерения уровня глюкозы в крови приносит огромные доходы производителям и внедрение новой технологии чревато для них снижениями прибылей в связи с утратой доходов от продажи тест-полосок и лезвий для скарификаторов.

«Омелон В-2» вернет контроль над здоровьем

«Омелон В-2» позволит осуществлять контроль над вашим здоровьем, не доставляя неудобств, и дополнительных затрат. Он сэкономит не только деньги, но и нервы, ведь благодаря этому прибору измерение КГК больше не будет ассоциироваться с болью в проколотом пальце. Разработанный российскими учеными прибор запатентован в России и США. Производит его одно из крупнейших оборонных предприятий РФ — Воронежский ОАО «Электросигнал». «Омелон В-2» прошёл клинические испытания, имеет все разрешительные документы и сертификаты.

Удобно и практично — измерение глюкозы крови в домашних условиях без забора крови из пальца. Метод безболезнен, безопасен и нетравматичен.

Методы и один из способов определения ацетона в моче.

Определение ацетона в моче.

К методам определения кетоновых тел
относится:

1. Проба Ланге

2. Модифицированная проба Ротеры

3. Проба Легаля

4. Проба Лестраде

5. Экспресс-тесты.

Для качественного определения кетоновый
тел в моче чаще всего используют пробу
Ланге или ее модификации, а также
индикаторные таблетки, меняющие окраску
при нанесении на них 1—2 капель мочи,
содержащей повышенное количество
кетоновых тел

Проба Ланге основана на
свойствах ацетона и ацетоуксусной
кислоты давать с нитропруссидом натрия
в щелочной среде фиолетовую окраску.
Несколько капель свежеприготовленного
раствора нитропруссида натрия и 0,5 мл
концентрированной уксусной кислоты
добавляют в пробирку с 8-10 мл мочи, а
затем осторожно по стенке пробирки
наслаивают несколько миллилитров
концентрированного раствора аммиака.
При наличии ацетона на границе между
обеими жидкостями в течение 3 мин
возникает фиолетовое кольцо. Ацетон в
моче обнаруживают не только при
декомпенсированном сахарном диабете,
но также при тяжелых лихорадочных
состояниях, неукротимой рвоте, длительном
голодании и интоксикации

Проведение анализа

Анализ проводят фельдшера – лаборанты с применением различных методик. Одни из самых распространенных методов является глюкозоксидазный и кинетический. Говоря простым языком, принцип метода основан на определении точки поглощения смеси (глюкоза и реактив), которую устанавливает биохимический анализатор. Стоит отметить, что для определения глюкозы в биохимических анализаторах преимущество отдают венозной крови (открученная кровь). Капиллярную кровь чаще всего исследуют на специальных аппаратах («глюкозник»). Особую популярность набирают портативные глюкомерты, в которых необходима тест – полоска и капля кровь пациента из пальца. Затем через пару секунд на дисплее глюкометра отражается концентрация глюкозы в капиллярной крови.