Анализ пцр гепатита с (рнк гепатита с)

Краткое изложение основных рекомендаций

1. Скрининг на потребление алкоголя и консультирование в целях сокращения умеренного и высокого уровней потребления алкоголя
В отношении всех лиц с HCV-инфекцией рекомендуется проводить оценку уровня употребления алкоголя и в случае выявления умеренного и высокого уровня потребления предлагать меры по коррекции поведения для сокращения потребления алкоголя.
2. Обследование пациентов для определения стадии фиброза или цирроза печени
В условиях ограниченной обеспеченности ресурсами для определения стадии гепатического фиброза вместо других дорогостоящих неинвазивных тестов, таких как эластография или FibroTest, проводится тестирование для расчета отношения аминотрансферазы к числу тромбоцитов (APRI) или тест FIB-4.
Рекомендации по лечению гепатита С
3. Обследование для определения показаний к лечению
Все взрослые и дети с хронической HCV-инфекцией должны пройти обследование для определения наличия показаний к назначению противовирусной терапии.
4. Лечение
ВОЗ рекомендует предлагать пройти лечение всем лицам старше 12 лет с диагностированным гепатитом С вне зависимости от стадии заболевания. 

ВОЗ рекомендует использовать для лечения лиц старше 18 лет с хронической HCV инфекцией пангенотипные комбинации ПППД.  

Для лечения хронического гепатита С у подростков в возрасте 12–17 лет или с массой тела более 36 кг, имеющих хроническую HCV-инфекцию, ВОЗ рекомендует назначать:  

• софосбувир/ледипасвир в течение 12 недель для генотипов 1, 4, 5 и 6;
• софосбувир/рибавирин в течение 12 недель для генотипа 2;
• софосбувир/рибавирин в течение 24 недель для генотипа 3.  

В отношении детей младше 12 лет с хроническим гепатитом С ВОЗ рекомендует: 

• отложить назначение лечения до достижения ребенком возраста 12 лет;
• более не назначать курсы лечения на основе интерферона.  

Как ожидается, в конце 2019 г. или в 2020 г. появятся новые высокоэффективные пероральные схемы пан-генотипических ПППД для лечения детей в возрасте до 12 лет. Это позволит расширить доступ к лечению и даст возможность начинать лечение представителей этой уязвимой группы пациентов на более ранних этапах болезни.  

Расшифровка результатов анализа

Кульминацией проведения анализа являются качественные результаты – положительный (в этом случае подробно пишут количественное значение, а также характеризуют степень зараженности), либо отрицательный.

Вирусная нагрузка при гепатите C расшифровывается в международных единицах (МЕ/мл) — количество рибонуклеиновых кислот на миллилитр крови.

Низкая нагрузка, МЕ/мл:

• < 800 тысяч;
• <2 млн копий/мл.

Высокая нагрузка, МЕ/мл:

• >800 тысяч;
• >2 млн копий/мл.

Рассмотрим степени нагрузки более детально:

• от 600 до 30000 МЕ/мл – низкая;
• от 30000 до 800000 МЕ/мл – средняя;
• свыше 800000 – высокая.

В большинстве случаев при подозрении на гепатит C у пациентов обнаруживается вирусная нагрузка в районе 1100000 МЕ/МЛ. Если будет назначено правильное лечение, то нагрузка постепенно начнет понижаться. При концентрации вируса свыше 400 тыс. МЕ/МЛ, принято считать, что вирус гепатита C не просто есть, но еще и стремительно размножается.

Об эффективности терапии и отрицательном результате можно судить только при абсолютном отсутствии РНК вируса гепатита C в крови пациента. Для полного спокойствия отрицательный анализ нужно получить несколько раз с большими временными интервалами. Бывает и так, что после завершения терапии и хороших анализов, происходит опять увеличение нагрузки. Это свидетельствует о большой вероятности рецидива заболевания.

https://www.youtube.com/watch?v=36qNpm7UoHsVideo can’t be loaded because JavaScript is disabled: Фиброз. Вирусная нагрузка гепатит С. Лечение гепатита С. (https://www.youtube.com/watch?v=36qNpm7UoHs)

Нередко в результате анализа пишут, что РНК ниже диапазона измерений. Это свидетельствует о том, что вирус определяется, но его генетического материала недостаточно для определения количества используемым методом. В этом случае на помощь приходит только способ полимеразной цепной реакции.

Женщине, получившей положительный анализ на нагрузку на гепатит C во время беременности, нужно понимать, что вирусная нагрузка очень сильно повышает вероятность заражения будущего ребенка. В таких случаях ставится ребром вопрос о сохранении беременности, так как терапия медикаментозными средствами может спровоцировать сложные генные мутации у плода.

Вирус гепатита С. Чем он опасен. Как вовремя его идентифицировать.

Вирус гепатита С или ВГС – инфекционное заболевание, которое несет в себе молекулу рибонуклеиновой кислоты.

Этот тип вируса умеет легко приспосабливаться к условиям обитания и часто трансформируется в разные формы болезни, поэтому нашей защитной системе организма так сложно с ним справиться. Классифицируют шесть главных генетических типов инфекции и десятки подтипов. В наших краях зачастую встречаются первые три типа вируса.

По статистике лишь четверть случаев заболевания ВГС протекают без осложнений, во всех остальных случаях норма, если инфекция перерастает в хронический процесс, который пагубно влияет на внутренние органы. Так гепатит может осложняться печеночным фиброзом – процесс замены печеночных клеток. Дальше осложнения развиваются по цепной реакции: вследствие фиброза появляются раковые опухоли, болезнь печени перерастает в цирроз.

В большинстве случаев инфекция попадает в организм человека по кровеносным сосудам. Диагностируют вирус гепатита С несколькими методами. Отслеживают уровень концентрации антител к ВГС. Инфицирование не произошло, если в крови пациента не будут найдены антитела к ней. В противном случае вирус изучается более глубоко, проводят еще один тест – ПЦР. Только этот метод позволяет идентифицировать РНК вируса спустя всего полторы недели после заражения, во время, когда организм не успевает начать производство антител к инфекции, и последствия заражения никак не отражены на общем состоянии, тем более в результатах других исследований, таких как БАК и биопсия.

ПЦР диагностика

ПЦР – наиболее распространенный и точный метод определения вируса и его количественных возможностей. Метод способен определять вирусы в разных формах и диагностировать малоизвестные заболевания.

Анализ ПЦР (полимеразной цепной реакции) осуществляется путем забора крови и определения в ней вирусной РНК.

В образцы крови добавляются специфические ферменты и определяются в специальный реактор. Там происходит клонирование клеток.

Сначала одна клетка делится на две копии, потом каждая из копий делится еще на две. Таким образом, после синтеза копий появляются сотни клеток ДНК.

ДНК можно сравнить с базой информации о всевозможных возбудителях и выявить инфекцию на ранних сроках заболевания.

Преимущества ПЦР метода:

• многие методы диагностики выявляют только наличие вируса путем выделения в крови продуктов жизнедеятельности инфекционных микроорганизмов. Метод ПЦР напрямую указывает на возбудителя инфекции;
• специфика ПЦР заключается в том, что в исследуемой пробе крови выявляется уникальный фрагмент ДНК. Это исключает шанс на ложный результат;
• ПЦР способно выявить даже единичные клетки инфекции и диагностировать несколько возбудителей в одной пробе крови.

Качественный анализ

Помогает обнаружить вирус в крови. При положительном результате следует продолжить обследование и провести количественный анализ, который определит стадию болезни, и предоставит врачам возможность спланировать наиболее благоприятную тактику лечения. При проведении данного анализа допускаются только два заключения:

«Обнаружено». Свидетельствует о наличии вируса в крови. Подобный результат считается положительным. В крови уже выявлен РНК вируса, который уже начал развиваться, заражая здоровые клетки и поражая печень.

«Не обнаружено». Говорит о том, что в пробе крови отсутствуют РНК гепатита С. Также существуют случаи, что в исследуемом образце концентрация вируса ничтожно мала и не попадает в рамки чувствительности анализа. Стоит заметить, что анализ выявляет инфекцию на 10-й день после инфицирования, что дает возможность определить вирус еще до его существенных внешних проявлений.

Количественный анализ

Выявляет концентрацию генетического материала вируса в определенном объеме крови. Это не только дает возможность определить тяжесть болезни, но и позволяет увидеть полную клиническую картину заболевания (в том числе при лечении). В результате проведения данного анализа могут быть только 3 заключения:

Результат «Положительный». Результат в числовом показателе отражает вирусную нагрузку. Концентрация вируса определяет количество вируса в 1 миллилитре, что равно 1 кубическому сантиметру крови. Единицы измерения данного анализа МЕ/мл (международные принятые единицы на миллилитр). Если концентрация вирусных частиц меньше 8х10 000 МЕ/мл, то лечение эффективно, если же наоборот, то стоит изменить тактику лечения. Если вирусная нагрузка в течение первых недель терапии падает до 60 %, то эффективность лечения является высокой. Низкий уровень равен до 400 000 МЕ/мл, а высокий от 1 000 000 МЕ/мл. Вирусная нагрузка определяет степень заболевания и возможность его передачи. При высоком уровне концентрации вирусных клеток в крови риск передачи заболевания вертикальным или же половым путем достаточно велик.

Результат «Недействительный». Этот результат означает, что при качественном анализе вирус в организме был обнаружен, но количественный анализ не смог определить его концентрацию в крови. Такое происходит, когда количество частиц РНК вируса в крови ниже диапазона определения.

Результат «Не обнаружено». Расшифровка анализа означает отсутствие РНК клеток гепатита С в образце крови.

Количественный анализ ПРЦ проводится на всех стадиях болезни. Для выявления оптимального лечения анализы проводятся на сроках: (4-я, 12-я, 16-я, и 24-я неделя). Если по результатам наблюдается снижение вирусной нагрузки, то лечение можно считать эффективным. После завершения терапии количественный анализ проводится для обнаружения рецидива, то есть, обнаружения вируса после снижения его активности до минимума.

Как снизить высокую вирусную нагрузку

Только у 15–17% пациентов наступает самостоятельное излечение острой формы вируса без медикаментозной терапии. Но в подавляющем большинстве случаев болезнь переходит в хроническое течение, что требует приема определенных лекарственных препаратов.

Обычно доктора назначают:

• Даклатасвир;
• Софосбувир;
• Ледипасвир;
• Асунапревир и др. 

Медикаментозное лечение – единственный способ быстро снизить ВН и полностью избавиться от патологии. 

Но наравне с приемом предписанных врачом медикаментов необходимо соблюдение диеты с исключением вредных для печени блюд и продуктов. Категорически противопоказан алкоголь. Рекомендуют отказаться от пристрастия к никотину. Также терапия может не оказать должного результата при употреблении наркотиков. 

Разнообразные народные средства, рецепты нетрадиционной медицины на основе трав, продуктов пчеловодства и т.д. могут применяться лишь как дополнение к основной медикаментозной терапии.

Виремия. Роль анализа в диагностике инфекции

Чтобы определить степень активности инфекции в организме, применяют метод исследования виремии. На основе такого анализа специалист дает заключение о возможности заражения пациентом окружающих, вступающих с ним в тесный контакт.  Особой значимости набирает этот анализ при опасности передачи инфекции во время беременности от матери к плоду.

Данный тест проходят пациенты, у которых в крови нашлись антитела к инфекции. Примерно четверть больных острым гепатитом С излечиваются самостоятельно, то есть при клинических исследованиях следов вируса не выявляется. По итогам теста врач прогнозирует дальнейшее протекание болезни и назначает соответственное лечение.

Лечебные процедуры  назначаются после проведения исследования ПЦР. Высокие показатели по результатам ПЦР снижают шансы на беспрепятственное восстановление здорового состояния организма, низкие же наоборот – повышают.

Также данный тест проходят пациенты уже параллельно с терапевтическими процедурами: в начале первого месяца, конце первого месяца, в конце квартала и через пол года.

Если уровень заражения с течением времени, а в частности в конце первого квартала лечения, не снижается, значит, лечение малоэффективно. Врачу следует изменить вектор терапии.

Снижение активности заражения определяется понижением в десять раз количеством молекул вируса в крови. То есть если на первой неделе было найдено10000 единиц, а в конце квартала 1000 единиц, инфекция считается угасающей, а лечение стоит продолжать.

Результат теста может быть некорректным из-за присутствия человеческого фактора при исследовании материала. Лаборантом может быть не соблюдены условия содержания опытных проб, например:

• попадание грязи на испытуемую пробу
• присутствие в плазме гепарина
• наличие в плазме специальных веществ, действующих на реагенты, входящие в состав ПЦР.

В дополнение к уровню виремии необходимо идентифицировать генетический тип инфекции, особенно в период назначения и прохождения курса лечения. Стоит понимать, что характер болезни невозможно выявить путем проведения анализа ПЦР. Для этого служат и обязательны к применению другие тесты, такие как биохимический анализ крови (БАК), биопсия печени и так далее.

Гепатит С способы передачи

Заразиться гепатитом С можно:

• через кровь. Возможно инфицирование при переливании зараженной крови, при проведении операций и манипуляций с кровью, лечении зубов, удалении родинок и бородавок, если были допущены погрешности в стерилизации инструментов;
• в салонах красоты при выполнении тату, пирсинга, обрезного маникюра и педикюра, косметологической чистки лица и др.;
• от матери к ребенку во время родов (5%);
• во время незащищенного секса с инфицированным человеком;
• во время принятия инъекционных наркотических средств не одноразовыми шприцами;
• во время оказания первой помощи инфицированному вирусом человеку, если не соблюдать меры безопасности

В отличие от других гепатитов способы передачи гепатита С в основном связаны с кровью. Бытовым путем заразиться гепатитом С невозможно! Ни рукопожатия, ни обычные поцелуи (несексуального характера) и общение, ни пользование предметами бытового назначения не могут передать гепатит С! Не стоит только брать маникюрные и бритвенные принадлежности у человека, который страдает гепатитом С! При оказании первой помощи при травмах пациентам с гепатитом С нужно обязательно надевать перчатки! Вирус погибает при кипячении через пару минут, а при стирке при температуре 60 °С – через тридцать минут. Замораживание не убивает вирус. Убийственно воздействует на вирус УФ-излучение. Через 16 часов вирус при комнатной температуре погибает!

Что такое ПЦР

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков. 

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.). 

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл. 

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении

Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл. 

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови. 

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Виды исследования

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C. 

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV. 

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР. 

Расшифровка результатов: нормы и отклонения

Отрицательный результат анализа говорит о том, что вирусы гепатита у человека отсутствуют. Тем не менее, нельзя полностью исключить наличие инфекции, так как состояние иммунной системы у всех людей разное, к тому же,у каждой инфекции существует определенный инкубационный период.

Окончательно удостовериться в правильности результатов первого анализа поможет повторная сдача крови. Для максимально корректного сравнения данных рекомендуется сдавать кровь оба раза в одной и той же клинике в то же самое время суток.

Вирусный гепатит А

Диагностика на определение lg G вируса проводится имуннохемилюминисцентным методом. Положительные результаты анализа на антитела свидетельствуют об остро текущем либо только что перенесённом заболевании. Нормой считается наличие менее 1 S/CO.

Анализ на гепатит В

Результат исследования со знаком плюс фиксируется специалистами при нахождении в крови пациента даже следов антител класса LgM. Это означает, что у человека присутствует данное заболевание в острой или хронической форме.

Показатели исследований на гепатиты С, D, E и G

Аналогичная гепатиту А форма заболевания под буквой Е особенно опасна для женщин, ожидающих ребёнка. Гепатит D протекает в большинстве случаев параллельно с В-типом. Заболевание вида G весьма схоже с С-формой, но, как правило, гораздо менее тяжелое и не столь опасное.

Исследование на антитела к перечисленным формам вирусов делается по методу ИФА. Несмотря на состоявшееся заражение, в первые 1,5 месяца болезни анализ крови на антитела будет еще отрицательным и не покажет их наличия. В связи с этим требуется повторная диагностика. Нормой является отсутствие в крови антител. Данные анализа будут положительными в период течения болезни либо тотчас после выздоровления.

Результаты анализов на невирусные гепатиты

При подозрении на невирусные формы болезни кровь изучают на:

билирубин

В норме его уровень у взрослого человека 5-21 мкмоль/л. Превышение нормального уровня говорит о возможном заболевании.

белок фибриноген

У здорового человека его может быть от 1,8 до 3,5 грамма на литр. При поврежденной печени уровень фибриногена падает ниже нормы.

общий белок сыворотки крови

В здоровой крови его концентрация достигает 66-83 г/л. При гепатите уровень альбуминов значительно снижается.

белковые ферменты

Норма АЛТ составляет от 0 до 50, АСТ — от 0 до 75 единиц на литр. При заболевании гепатитом количество ферментов в крови превышает нормально допустимые значения.