Анализ на коронавирус методом ифа

В чем суть ИФА?

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что  ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих  спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд.  На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 — Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

Клиническая картина

Заболевание начинается с возникновения безболезненной язвы на плотном основании (стадия твердого шанкра). Спустя 10–14 дней происходит увеличение регионарных лимфоузлов. Первичный сифилис самостоятельно проходит в течение 1–1,5 месяцев.

Вторичный сифилис развивается через несколько недель (от 2 до 6). На теле пациентов (включая ладони и стопы) появляются бледные высыпания. Высыпаниям могут предшествовать ухудшение общего самочувствия, лихорадка, головная боль. Затем происходит генерализованная лимфаденопатия. В последующем процесс принимает хроническое течение с периодами обострений.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментное исследование крови (ИФА) направлено на комплексную оценку защитной реакции организма.
Цель исследования:

• подсчитать количество лейкоцитов и макрофагов;
• определить соотношение иммунных клеток;
• количественные показатели антител.

Иммуноферментный анализ крови назначают в следующих ситуациях:

• при инфекционных заболеваниях для поиска антител и антигенов;
• исследование гормонального баланса пациента;
• исследование на онкомаркеры;
• диагностика аутоиммунных заболеваний.

Плюсы исследования

Почему назначается иммуноферментное исследование крови?
Положительные стороны метода:

• высокая чувствительность и избирательность анализа;
• отслеживание процесса лечения в динамике;
• доступность и легкость проведения диагностики.

Показания для проведения анализа

Иммуноферментный анализ проводят для диагностики следующих заболеваний:

• вирусные гепатиты;
• ВИЧ-инфекция;
• цитомегаловирус;
• вирус Эпштейн-Барр;
• герпес и токсоплазмоз;
• краснуха и корь, клещевой энцефалит;
• бруцеллез, аспергиллез, дизентерия;
• лямблиоз, токсокароз, трихинеллез, описторхоз, эхинококкоз;
• венерические заболевания;
• бактерия Хеликобактер;
• иммунные и онкомаркеры;
• гормоны репродуктивной сферы и щитовидной железы.

Как проводится анализ

Для проведения исследования потребуется кровь из вены пациента. Забор проводится утром на голодный желудок. Но для анализа подходит и спинномозговая жидкость, и стекловидное тело, и околоплодные воды. Если пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, то нужно обязательно сообщить лаборанту.
Существует 4 методики исследования:
 — прямой
 — метод блокирования
 — непрямой
 — конкурентный.
Чаще всего используется методика под названием ELISA.
У врача в наличии специальный планшет. В ячейках находится антиген возбудителей различных заболеваний. Врач добавляет кровь пациента и образуется так называемый  «особый антиген».
Далее «особый антиген» реагирует с веществом-конъюгатом. Образуется иммунный комплекс. Добавляется вещество, которые окрашивает продукты реакции в определенный цвет.
Оценка результатов при помощи многоканального спектрофотометра. Для этого проводится сравнение оптической плотности образца с эталонными культурами.

Как разобраться с анализом?

На бланке можно увидеть положительный (+) или отрицательный (-) результат для каждого вида иммуноглобулинов.

1. Организм не может бороться с конкретной инфекцией – показатели  иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA будут со знаком «минус»;
2. Правильная реакция на прививку – IgA, IgM отрицательный, IgG – положительный;
3. Инфекционный процесс в остром периоде – IgG, IgA,  IgM будут иметь положительное значение;
4. Хронический процесс во время обострения – IgG, IgM, IgA со знаком «плюс»;
5. Пациент здоров – IgM отрицательный, IgA, IgG – не обнаруживаются.

Но в любом случае правильный диагноз может установить только лечащий врач.

ИФА анализ крови

ИФА (иммуноферментный анализ) производится в лабораторных условиях для того, чтобы выявить степень защиты организма, а именно его функций. В ходе такой процедуры специалист может определить свойства и количество клеток, а также наличие антител в организме. Такое тестирование может быть проведено для диагностирования аутоиммунных, гематологических или инфекционных заболеваний.

Чтобы провести такое исследование крови ИФА, должны быть определенные показания для этого. Их обычно выявляет врач, который и проводит лечение.

Кровь может браться на анализ в таких случаях:

1. Для диагностирования инфекций, которые могут передаваться половым путем (сифилис, хламидиоз и прочие).
2. Для диагностирования наличия вирусных инфекций (гепатит, герпес и прочие).
3. Для выявления количества и качества гормонов в теле.
4. Для диагностирования онкологического заболевания.
5. Для определения уровня иммунодефицита.
6. Для диагностирования организма на наличие тех или иных заболеваний при пересадке органов.
7. Для оценки эффективности проводимой терапии.

В основе данного принципа анализа лежит то, что при помощи его можно выявить в организме иммуноглобулины (белковые антитела). Такие тела вырабатываются организмом, а именно иммунной системой, когда в тело попадает инфекция. Такие вещества, которые вырабатывает организм, способны связываться с возбудителями инфекции и нейтрализовать их в процессе этого.

Классификация антител, которые борются с инфекцией в организме

Иммуноглобулины имеют особую характеристику. Это специфичность, чем и отличаются от других антител. Благодаря такой своей способности они могут связываться с другими антигенами, образовывая комплексное антитело. Именно при анализе ИФА и можно выявить такие тела в крови. В настоящее время специалисты различают иммуноглобулины пяти типов.

Обычно же их делят на три класса:

1. А.
2. М.
3. G.

Такие антитела могут накапливаться в организме человека при попадании в него инфекции. При этом появляются они в разное время после инфицирования.

Самые первые, которые появляются в крови после инфицирования, это антитела класса М. Они образуются на пятый день после заражения. Находятся в теле они 20-24 дня, а потом исчезают. Такие антитела могут указывать на то, что инфекция в организме острая или уже перешла в хроническую стадию. Это дает врачу информацию о том, что надо незамедлительно начинать процесс лечения.

Через 20-25 дней после появления заражения появляются тела G. Внутри человека они могут находиться на протяжении двух лет. Если при сдаче тестов два раза подряд будут выявлены эти антитела в крови (между анализами промежуток составляет 2-3 недели), то это говорит врачу, что инфекция в организме протекает повторно. То есть, человек еще раз заразился подобной инфекцией.

Тела класса А можно обнаружить в организме через 2-3 недели после инфицирования или обострения болезни. Тут следует отметить, что только 20% этих тел могут находиться в крови. Все остальные же в это время будут располагаться на слизистых. Полностью исчезают такие антитела через 3-7 недель после того, как они уничтожат тела инфекции. Если их при проведении анализа не будет обнаружено в теле, то это говорит о том, что инфекции нет в организме. Если на протяжении определенного срока в организме еще будут обнаружены данные антитела, то это может сказать о том, что заболевание стало уже хроническое.

Чтобы провести тестирование ИФА, берется кровь у пациента. Есть также возможность проводить данные исследования и при взятии другого материала, например, околоплодных вод или спинномозгового вещества. Кровь обычно берется для тестирования из вены.

Специалисты советуют данные тесты сдавать на голодный желудок. После употребления еды должно пройти 10-12 часов. Также, если клиент употребляет какие-либо лекарственные препараты при сдаче анализа ИФА, то он должен сообщить об этом своему лечащему врачу. Это может повлиять на точность тестирования. На достоверность тестирования влияет спиртное или наркотики. Их не следует употреблять на протяжении 3-5 дней перед сдачей анализов.

После проведения исследования сданного материала врач ставит диагноз. Он может быть положительным (+) или отрицательным (-). Такие оценки ставятся по каждому классу иммуноглобулинов.

Сроки годности и сроки готовности анализов крови

На сроки анализов крови оказывает влияние несколько факторов:

— вид лабораторного исследования;

— уровень технологического оснащения лаборатории;

— специфика исследования (количество и свойства заданных показателей для диагностики).

Рассмотрим сроки анализов крови по основным видам исследований более подробно.

Клинический (общий) анализ крови. Самый распространенный анализ, при этом он является одним из важнейших диагностических методов терапевтических, гинекологических, кардиологических, урологических, эндокринологических исследований.

Срок готовности анализов крови – 5 дней.

Срок действия анализов – 10–14 дней.

Биохимический анализ крови. Позволяет оценить функционирование основных внутренних органов, дает информацию о процессах метаболизма (углеводный, белковый, липидный обмен), а также позволяет определить потребность в необходимых микроэлементах.

Срок годности анализов крови – 10–14 дней.

Аллергологическое исследование крови. Дает представление о состоянии иммунной системы человека. Позволяет определить наличие аллергенов, вызывающих аллергические реакции в организме.

Срок готовности анализов крови – 5–7 дней.

Срок действия анализов крови – до 1 месяца.

Гормональные исследования. Дают оценку состояния эндокринных органов, помогают диагностировать различные гормональные изменения и выявить заболевания поджелудочной, щитовидной железы, половых желез, оценить состояние жирового обмена.

Срок готовности анализов – 5–10 дней.

Срок годности – до 6 месяцев.

Анализы крови на инфекции ВИЧ. Позволяют выявить антитела, которые возникают в организме при инфицировании вирусом иммунодефицита человека.

Срок действия анализов крови – до 6 месяцев.

Анализ крови на сифилис (RW). Особый вид лабораторных исследований крови. Позволяет определить наличие возбудителя заболевания в организме человека.

Срок готовности анализов крови – 4–8 дней.

Срок годности – от 20 дней до 3 месяцев.

Анализы крови на маркеры вирусных гепатитов групп В, С, D, E. Лабораторные исследования, позволяющие определить наличие антител к вирусам гепатитов.

Срок готовности анализов – 4–5 дней.

Срок действия анализов крови – до 3 месяцев.

Анализ крови на сахар. Является основным видом исследования для диагностики сахарного диабета.

Срок годности анализов крови – 10–15 дней.

Анализ на грибковые и паразитарные инфекции. Определяет наличие антител к простейшим паразитам и грибам.

Срок готовности анализов крови – 4-8 дня.

Срок действия анализов – до 6 месяцев.

В наше время медицина шагнула далеко вперед и сегодня существует возможность определить общее состояние целого организма по капле крови. Для диагностики различных заболеваний на самых ранних стадиях применяется огромное количество видов исследований крови. Мы перечислили только самые основные и распространенные исследования. Сдать анализы крови, чтобы проверить собственное здоровье, сегодня можно в любой частной клинике, коих много в любом городе. Однако результаты расшифровки анализов носят только информационный характер и не могут служить диагнозом какого-либо заболевания. Для получения более подробной информации и назначения квалифицированного лечения необходимо обратиться к специалисту и получить очную консультацию у хорошего врача. Сроки анализов крови ограничены, по этой причине следует своевременно обращаться к специалисту за расшифровкой и консультацией. В противном случае анализы придется пересдавать. Желаем вам крепкого здоровья.

Для определения присутствия в организме бледной трепонемы (спирохеты), возбудителя сифилиса, применяется особое лабораторное исследование, но чтобы уточнить, сколько действителен анализ крови на RW, необходимо обратиться к специалистам учреждения. В разных лабораториях в зависимости от того, с какой целью проводилась диагностика, этот срок может варьироваться от 20 до 90 календарных дней.

Особенности проведения теста и расшифровка

В большинстве случаев для иммуноферментного исследования берется кровь больного. Но при определенных обстоятельствах может осуществляться забор тканей с поверхности стекловидного тела. У беременных женщин ИФА диагностика может проводиться посредством изучения состава околоплодных вод.

Забор крови выполняется с использованием шприца, при этом материал для исследования берут, как правило, из вены, походящей на внутренней стороне локтевого сгиба. Пациент при этом должен находиться в расслабленном состоянии, в положении сидя.

Особенности подготовки

Анализ крови на ИФА требует выполнения определенных подготовительных процедур:

• отказа от завтрака в день теста;
• прекращения приема препаратов, разжижающих кровь, и других фармакологических средств, способных повлиять на результаты (после предварительной консультации у лечащего врача);
• воздержания от курения в день исследования;
• отказа от употребления спиртного за день до забора крови;
• исключения приема наркотических веществ (в том числе, и медпрепаратов, которые их содержат).

Соблюдение таких правил подготовки к иммунохимическому анализу крови исключает возможность искажения данных.

Трактовка данных

Результаты исследования выдаются пациенту на руки, после чего он проходит повторную консультацию у специалиста. Расшифровка данных ИФА может быть положительной или отрицательной. При этом в расчет также принимаются цифры, обозначающие уровень иммуноглобулинов (если таковые были обнаружены).

Если ИФА отрицательный, это может говорить об отсутствии патологических процессов, либо о начальной фазе их развития. Также «минусовый» результат исследования наблюдается при выздоровлении пациента после пройденного курса терапии. Но подобные данные можно получить только по истечении определенного промежутка времени (1 – 2 месяцев).

Если иммуноглобулины IgA и IgM в крови отсутствуют, а анализ ИФ показал положительный результат на IgG, это может свидетельствовать о том, что у пациента сформировался стойкий иммунитет к определенному виду антигенов. Подобное происходит при иммунизации.

При высокой концентрации IgM на фоне отсутствия IgG и IgA речь может идти о воспалительном процессе, протекающем в острой фазе.

Что означает, если ИФА положительный для всех видов иммуноглобулинов? В подобных случаях речь может идти о рецидиве инфекционной патологии. При этом возникновение антител фиксируется только при острой фазе хронической болезни.

При переходе заболевания в фазу затухания показатели IgM будут отрицательными. А вот ИФА на IgG и IgA будет положительным.

Положительный ИФА

Результат считается положительным, если в ходе исследования в крови были обнаружены иммуноглобулины класса IgG и IgM. Наличие представленных компонентов указывает на развитие следующих заболеваний:

• сифилиса;
• гепатита вирусного типа;
• ЦМВИ (цитомегаловируса);
• герпеса;
• ветряной оспы;
• болезней, провокаторами которых выступают стафилококки и стрептококки;
• хламидиоза.

При развитии сифилиса, специфические антитела обнаруживаются в крови спустя 14 суток после заражения. По их количеству специалист определяет тяжесть течения болезни. Активная терапия сифилиса позволяет устранить все бактерии через 6 месяцев. Если лечение отсутствует, на полное восстановление организма уйдет не менее 1,5 лет.

Анализ ИФА выявляет гепатит вирусного типа еще в инкубационном периоде, до появления первых симптомов.

ЦМВИ является распространенной патологией, которая встречается у каждого третьего человека. Для населения она не несет опасности, инфицирование происходит в утробе матери.

В норме, антитела к герпетическому вирусу в организме человека отсутствуют. При их обнаружении принято диагностировать острую фазу заболевания.

При развитии ветряной оспы, в крови человека обнаруживаются специфические иммуноглобулины IgM. Они способны сохраняться в организме на протяжении 2-х лет, после полной ликвидации патологии.

Определить болезни, вызванные стрептококками и стафилококками, позволяет двукратная сдача анализа на ИФА. При повторном исследовании, уровень специфических антител стремительно возрастает.

На развитие хламидиоза указывает высокий уровень иммуноглобулина — 1:8 и выше. Показатель способен варьироваться в зависимости от прогрессирования болезни.

Действия после подтверждения диагноза

Как только данные ИФА на сифилис подтвердились, инфицированный и контактировавшие с ним лица проходят терапию антибиотиками. Все рекомендации врача — дозировку, периодичность приема лекарств — необходимо соблюдать в точности!

На время лечения работающим гражданам выдается справка с зашифрованным согласно МКБ-10 диагнозом. После полного излечения медицинская книжка продлевается. Выздоровевший работник может приступать к своим непосредственным обязанностям. Работодатель не вправе отказать ему в восстановлении на рабочем месте.

Таковы основные данные по проведению ИФА. Заразившимся нужно помнить: постановка диагноза не ставит крест на всей последующей жизни больного. Сейчас существуют эффективные препараты, позволяющие надежно излечивать это заболевание. Вовремя проведенные обследование и лечение позволяют избежать самых опасных последствий недуга и защитить от него других членов общества.

Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Рисунок 2 — Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

Инструментальное исследование при сифилисе

Инструментальная диагностика проводится в зависимости от вовлеченности органов. Например, гранулематозное поражение печени можно увидеть при компьютерной томографии брюшной полости.

Рентгенография органов грудной клетки у пациентов с третичным сифилисом может показать дилатацию аорты. Линейная кальцификация по ходу аорты свидетельствует в пользу сифилитического аортита.

Ангиография может быть полезна в диагностике абдоминальной сифилитической аневризмы.

При диагностике нейросифилиса при соответствующих симптомах используют люмбальную пункцию с забором спинномозговой жидкости.

Мишина Виктория, уролог, медицинский обозреватель

20,210 просмотров всего, 2 просмотров сегодня