Иммунологические методы с применением химических меток

Иммуноблоттинг

Немаловажное свойство этой мембраны — возможность ее многократного использования. Нейлоновые мембраны Zeta-Probe эффективно связывают SDS-белки в отсутствие спирта, причем это связывание устойчиво к последующим обработкам

Низкомолекулярные белки также удерживаются эффективно. Благодаря высокой связывающей емкости — около 480 мкг белка на 1 см2 — мембраны Zeta-Probe позволяют обнаруживать следовые количества белка в анализируемых смесях.

После того как антиген оказывается иммобилизованным на мембране, оставшиеся центры связывания блокируют растворами желатина, либо бычьего сывороточного альбумина, либо обезжиренного молока.

Затем мембрану инкубируют в растворе поликлональных или моноклональных антител к исследуемому анти гену. После отмывки несвязавшихся антител мембрану инкубируют в растворе вторичных антител, которые представляют собой конъюгат ферментов щелочной фосфатазы (alkaline phosphatase, АР) или пероксидазы хрена (horseradish peroxidase, HRP) с антивидовыми антителами (козьи антитела к иммуноглобулинам кролика, мыши или человека) либо белками А (белок Staphylococcus aureus) или G (белок Streptococcus sp.), имеющими высокую аффинность к Fc-области иммуноглобулинов.

Детекцию образованных иммунных комплексов проводят химическим или хемилюминесцентным способом. Субстратами для химической реакции при использовании конъюгатов щелочной фосфатазы служат 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат (BCIP) или тетразолий голубой (NBT), а при использовании конъюгатов пероксидазы хрена — 4-хлор-1-нафтол и перекись водорода.

В результате ферментативных реакций на мембране образуется окрашенная полоса или пятно в месте локализации комплекса антиген-антитело.

Чувствительность данного метода составляет 100 пг белка при использовании конъюгатов АР и 100-500 пг при использовании конъюгатов HRP. Хемилюминесцентная детекция иммунных комплексов позволяет определять менее 5 пг антигена. Принцип этого метода заключается в том, что при реакции HRP с перекисью водорода и циклическим диацилгидразинлюминолом происходит эмиссия света длиной волны 428 нм, которая может быть зафиксирована на светочувствительной пленке.



Реакция иммуноблотинга (РИ) разработана на основе ИФА. Является самым специфичным и чувствительным методом иммунохимического анализа. Иммуноблотинг (от англ. blot – промокать, пятно) сочетает ИФА с электрофорезом. Применяется для выявления не комплексных антител к ВИЧ, а антитела к отдельным его структурным белкам (белки-р24, гликопротеины-gр120, gр 41 и др.). Относятся к экспертным (подтверждающим) реакциям диагностики ВИЧ-инфекции.

Реакция проводится в несколько этапов:

Вирус разрушают на компоненты — антигены (р24, gр120, gр 41 и др.), которые подвергаются электрофорезу в полиакриламидном геле, то есть разделению антигенов на фракции по молекулярной массе.

2. Гель покрывают нитроцеллюлозной мембраной и на неё при помощи электрофореза переносятся фракции антигенов. Нитроцеллюлоза ведёт себя подобно промокательной бумаге. Мембрану разрезают на полоски (стрипы). Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции

Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:

1. Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
2. Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
3. Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
4. Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
5. Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.

Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.

Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.

Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:

• неправильный забор биологического материала;
• неправильное хранение биоптата;
• неправильная транспортировка диагностических систем;
• длительное хранение тест-системы.

На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.

После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.

Почему быстрее, удобнее и выгоднее сдавать анализы в Lab4U?

Вам не нужно долго ждать в регистратуре

Все оформление и оплата заказа происходит онлайн за 2 минуты.

Путь до медцентра не займет более 20 минут

Наша сеть вторая по величине в Москве, а еще мы есть в 23 городах России.

Сумма чека не шокирует вас

Постоянная скидка в 50% действует на большинство наших анализов.

Вам не придется приходить минута-в-минуту или ждать в очереди

Сдача анализа происходит по записи в удобный промежуток времени, например с 19 до 20.

Вам не придется долго ждать результатов или ходить за ними в лабораторию

Мы пришлем их на эл. почту в момент готовности.

Антиген	Значение
Sm (Smith)	Специфический маркер системной красной волчанки (входит в 10-ый критерий СКВ Американского колледжа ревматологов, АСR)
SS-A (Ro52)	Отмечается при различных аутоиммунных заболеваниях, чаще при системной красной волчанке и ее кожных формах, системных ревматических заболеваниях, ревматоидном артрите, аутоиммунных заболеваниях печени и т.д.
SS-A (Ro60)	Системная красная волчанка, кожные формы красной волчанки, фоточувствительность при системной красной волчанке, высокий риск врожденной красной волчанки и поражения сердца плода. Основной серологический показатель при синдроме Шегрена. Нередко отмечается совместно с антителами к SS-A (Ro52) антигену.
SS-B	Синдром Шегрена, системная красная волчанка.
PCNA	Системная красная волчанка, риск волчаночного нефрита.
Рибосомы (Ribo P)	Системная красная волчанка, риск поражения центральной нервной системы.
Нуклеосомы	Системная красная волчанка, высокий риск волчаночного гломерулонефрита.
Двуспиральная ДНК	Специфический маркер системной красной волчанки (входит в 10-ый критерий СКВ ACR), высокий риск волчаночного нефрита.
snRNP/Sm	Смешанное заболевание соединительной ткани, системная красная волчанка с низким риском поражения почек, склеродермия.
Гистоны	Системная красная волчанка, лекарственная волчанка, склеродермия.
Scl-70	Системный склероз с диффузным поражением кожи и внутренних органов.
PM-Scl	Cклеродермия, сопровождающаяся полимиозитом.
CENР-B	CREST синдром со склеродактилией, телангиэктазиями, подкожными кальцинатами, синдромом Рейно, эзофагитом.
Jo-1	Полимиозит в виде антисинтетазного синдрома.
AMA-M2	Первичный билиарный цирроз, синдром Шегрена.

Негативный результат

В случае недостатка положительных линий, соответствующих белкам вируса СПИДа, иммуноблот расшифровывают как отрицательный результат. Анализ однозначно подтверждает отсутствие заражения вирусом иммунодефицита или указывает на «период окна». Если иммуноблот дает отрицательный результат, человек не является носителем вируса СПИДа.

Для исследования берут образцы сыворотки крови ВИЧ-инфицированных пациентов. Их хранят в замороженном виде при температуре -20°С. Анализ проводят с помощью тест-систем:

• Антиген;
• Рекомбинат-ВИЧ;
• Пептоскрин.

Регистрация отрицательного результата указывает на отсутствие в сыворотке антител к оболочечным гликопротеинам ВИЧ gp120, gp160, Sp41.

Нередко больного интересует вопрос, может ли быть отрицательный результат иммуноблота на ВИЧ у пациента, имеющего инфицированного сексуального партнера. После проведенного исследования нередко получают сомнительный результат или фиксируются антитела к белкам gp120 и gp160, что указывает на полное отсутствие отрицательных данных. Иногда сомнительный ответ регистрируют у пациентов с бессимптомно протекающей инфекцией.

Предназначения анализа иммуноблоттинга на ВИЧ?

Иммуноблоттинг на ВИЧ — сложный компонентный анализ при помощи которого выявляют антитела к вирусу иммунодефицита человека. Он является сочетанием ИФА и разделённых электрофоретическим образом белков вируса. Будучи составной частью геля они переносятся на мембрану из нитроцеллюлозы. Вся процедура проходит в несколько этапов строго в лабораторных условиях и требуют соответствующей квалификации и оборудования.

Все кто интересуются, что такое иммуноблот на ВИЧ, детально изучают и механику проведения данного исследования. В ходе анализа, на первом этапе вирус очищается, разрушается на составные части и проходит воздействие электрофорезом. А его антигены делятся в соответствии с молекулярным весом. Следом применяется метод блоттинга, используя который, антигены из геля переносят на нитроцеллюлозу или фильтр из нейлона. На них содержатся белки, которые характерны для ВИЧ и на данном этапе они абсолютно невидимы глазу. После этого, на материал с антигенами наносится сыворотка или плазма крови. Если в них присутствуют антитела, то они связываются только со специфическими белками-агентами, которые соответствуют непосредственно им. Под воздействием сложных процедур, они визуализируются. Это и позволяет подтвердить наличие у человека заболевания.

Если иммуноблот положительный, то есть на мембране проявились следы, можно подтверждать наличие у человека ВИЧ. Диагностика одинаково эффективна на различных стадиях заболевания и позволяет выявить к каким именно антигенам вируса у пациента образовались антитела.

Почему данный анализ является необходимостью?

Коварство вируса иммунодефицита человека заключается в том, что длительное время он может абсолютно не проявляться. Тем временем, он живёт в клетках, встраивая в их ДНК свою информацию. В отличии от более простых вирусных инфекций, организм самостоятельно не может с ним справиться. Более того, лекарства которые могут убить болезнь — не изобретены. В результате своей деятельности, ВИЧ разрушает лейкоциты, снижая иммунитет и человек становится бессильным против любой, даже минимальной инфекции.

ВАЖНО! Если лечить ВИЧ при помощи поддерживающих препаратов, которые не позволяют вирусу размножаться, вести полноценную жизнь можно до глубокой старости. Поэтому, при малейших подозрениях, сдать анализ не будет лишним

В случае, если иммуноблот отрицательный — вируса в организме нет, даже если простой анализ крови говорит противоположное. А если заболевание выявлено и пациент не принимает терапию, то он обречён. Больше 10 лет с момента заболевания, люди которые не лечатся адекватными препаратами не живут. ВИЧ нельзя вылечить при помощи народной медицины, голоданий и прочих практик. На данном этапе эволюции, человечество изобрело только лекарства, которые останавливают развитие вируса.

Особенности метода

Что такое иммуноблот на ВИЧ и зачем он нужен — вопрос, который задают пациенты и их родные. Их любопытство не праздное, ведь диагноз уже подтверждён или опровергнут ИФА. Анализ на иммуноферменты точные результаты показывает далеко не всегда. И каждый раз, когда он определяет наличие вируса в организме, требуется подтверждение результатов с использованием ПЦР и вестерн-блотта. Только в случае, когда и иммуноблот на ВИЧ положительный, принимается решение о назначении лечения.

Терапия подбирается в каждом случае индивидуально и она является пожизненной. Её задача — остановить болезнь, чтобы человек мог вести полноценную жизнь

При этом, носителю всегда необходимо помнить о мерах предосторожности в процессе взаимодействия с близкими людьми и в обществе

ВИЧ-иммуноблоттинг позволяет выявить у больного вирус I-II типа. Антитела организм начинает вырабатывать уже спустя 2 недели после инфицирования. Их число стремительно увеличивается в крови и они не выводятся. Численность только растёт, если заболевание не лечить. При этом, будучи носителем, человек может совершенно не подозревать о своём ВИЧ-положительном статусе, так как вирус может абсолютно не проявлять себя несколько лет.

Иммуноблот на сифилис — что это

При подозрении на сифилис на первичных этапах диагностических мероприятий используются так называемые нетрепонемные тесты, которые позволяют определить антитела в крови к возбудителю заболевания. Для подобных способов является характерным низкий уровень точности, возможно получение положительного результата даже при отсутствии бледной трепонемы в организме, так как антитела могут вырабатываться и при других заболеваниях. Данные исследования расцениваются в качестве ориентировочных методов, в числе их преимуществ — затрата малого количества времени на получение результатов, дешевизна, широкая доступность для населения.

При получении положительного результата нетрепонемных тестов требуется проведение высокоточного тестирования (трепонемного), которое позволит точно определить наличие возбудителя сифилиса, а также продолжительность заражения. В этом случае и проводят иммуноблот, при котором используются специфические антигены, являющиеся свойственными исключительно для антител бледной трепонемы.

Критерии оценки

Если антитела есть в крови больного, на данном тесте будут образовываться специальные полоски. Их оценивают визуально по расположению и интенсивности, на основании чего делают выводы:

• Положительный – для антител, отнесенных к классу IgM является характерным присутствие единичной насыщенной полосы, для IgG – несколько выраженных линий.
• Неопределенный – IgM – слабовыраженная единичная полоса, IgG – одна четкая линия.
• Отрицательный – IgM, IgG – отсутствие полос.

Расшифровка результатов

В ходе проведения иммуноблота могут быть получены положительные, отрицательные, неопределенные результаты:

• Положительные результаты говорят о недавнем заражении сифилисом. Процент неинтерпретирумых и ложноположительных результатов крайне низок, так как метод выявления сифилитической инфекции характеризуется в качестве высокоточного. При задействовании непосредственно иммуноблота используются специфические антигены, являющиеся свойственными исключительно для бледной трепонемы.
• При отсутствии полос на мембране вероятность инфицирования бледной трепонемой не исключена. Отрицательный результат может говорить о сравнительно недавнем заражении, в ответ на которое иммунная система не успела спродуцировать выработку антител. При наличии подозрений на инфицирование рекомендуется провести повторное исследование через несколько недель.
• При получении неопределенных результатов требуется проведение повторного тестирования. Как правило, подобное случается на ранних этапах заражения бледной трепонемы, а также при допущении ошибок при проведении иммуноблота, сифилис в данном случае может отсутствовать.

Причины неопределенных результатов

Спровоцировать получение ложноположительных или неопределенных результатов иммуноблота могут различные факторы, в числе которых приводятся следующие:

• Период беременности. Особенно часто подобное наблюдается у женщин в период третьей или последующих гестаций. Причина получения неверных результатов заключается в разбалансировке гормонального фона.
• Прохождение в недавнем времени процедуры вакцинирования.
• Перекрестные реакции аллергического характера.
• Вирусные поражения организма. Чаще подобное наблюдается при инфицировании гепатитом или гриппом.
• Воспалительные процессы, поражающие сосудистую систему организма.
• Нарушения состава крови – низкий уровень свертываемости или, напротив, повышенная густота.
• Туберкулез, протекающий на различных стадиях.
• Аутоиммунные поражения печени.
• Использование в ходе проведения исследования неспецифичных антигенов.

Когда назначают анализ иммуноблот на ВИЧ?

Анализ иммуноблот на ВИЧ делается исключительно после ИФА, если его результат положительный или сомнительный. Помимо этого, обязательный тест на ВИЧ сдают пациенты перед операцией, доноры, женщины во время беременности или планирующие беременность. Раз в 6 месяцев, тест рекомендуют проходить людям, которые часто меняют половых партнёров, так как они находятся в группе риска.

Заразиться ВИЧ можно половым путём и через кровь, в том числе от не стерильных медицинских или косметологических инструментов. Если подтвердится статус ВИЧ-положительный, иммуноблот положительный будет в любом случае. Поэтому, стоит обратиться к врачу при следующих симптомах:

• Резкое снижение массы тела
• Постоянная слабость, снижение работоспособности
• Диарея более 3 недель
• Лихорадка
• Обезвоживание организма
• Увеличенные лимфоузлы
• Развитие туберкулёза, токсоплазмоза, пневмонии
• Обострившийся герпес продолжительное время

Всё это может указывать на наличие вируса. Кровь для анализа на ВИЧ берут из вены. Сдавать его следует натощак. А за сутки не рекомендуется пить кофе и кофеиносодержащие напитки, алкоголь, испытывать чрезмерные физические нагрузки.

Где можно сдать анализ?

Анализ на ВИЧ можно сдать как в обычной поликлинике, частной поликлинике, так и специальных центрах ВИЧ. Результаты ИФА и иммуноблот выдаются в течении суток. По желанию, можно сделать и срочный анализ.

Те, кому в результате анализов поставили диагноз ВИЧ, задаются вопросом — может ли иммуноблот быть ложноположительным? Это практически исключено, но у 1% пациентов подобное случается. Это происходит в том случае, когда тест реагирует на другие антитела. И зачастую, данная ошибка происходит у людей с иными серьёзными хроническими заболеваниями.

Иммуноблот ложноположительный на ВИЧ, зачастую подразумевает иную медицинскую формулировку — неопределённого статуса. В данном случае, тест реагирует на отдельные белки, определяя их как ВИЧ. Такое случается при аутоиммунных заболеваниях, онкологии и даже во время беременности. В данном случае требуется обязательное проведение дополнительных анализов в интервале 1, 3 и 6 месяцев.

Может ли иммуноблот быть ложноположительным — да, может, но крайне редко. Обязательно требуются дополнительные исследования, которые могут подтвердить или опровергнуть заболевание. Ряд людей, у которых возникает подозрение на вирус терзают сомнения — нужно ли сдавать анализ через 4 недели, если через 12 его нужно делать повторно. Можно и не сдавать, но врачи настоятельно рекомендуют это делать, если статус не измениться, то дождаться очередной диагностики будет легче. Если вы видите формулировку иммуноблот ложноположительный на ВИЧ, то скорее всего, статус подвергается сомнению.

Основные правила проведения лабораторных исследований

Анализ ИФА считается наиболее точным. Его погрешность составляет до 1%, но проводят данное исследование через 6-12 недель со дня предполагаемого заражения. В инкубационный период результат будет получен отрицательный (ложноотрицательный) либо сомнительный.

ПЦР можно проводить уже через 10-14 дней после возможного заражения, но точность этого анализа составляет всего 80-85%. Поэтому при получении положительного ответа пациенту назначают дополнительные исследования.

В перечень основных правил проведения процедуры анализа у ВИЧ-инфицированных больных входят:

1. Если человек заражен ВИЧ, то ему необходимо один раз в три месяца сдавать общий анализ крови. Подобная мера позволяет специалисту отследить динамику прогрессирования патологического процесса, корректировать и составлять терапевтические схемы.
2. Для получения максимально корректных результатов при заборе венозной крови необходимо создать одинаковые условия. Для большей точности исследований процедуру необходимо проводить в одной и той же специализированной медицинской лаборатории.
3. Сдача крови для выявления антител, вырабатываемых организмом по отношению к ВИЧ, проводится в утреннее время. Это обусловлено тем, что в начале дня у людей увеличивается концентрация эритроцитов.

Консультацию по вопросам осуществления процедуры по забору крови, подготовке и расшифровке результатов исследований можно получить в государственной или частной поликлинике, а также специализированных центрах по борьбе со СПИДом.

Иммуноблоттинг — дополнительный непрямой метод

Стрипы с нанесёнными на него антигенами ВИЧ погружают в сыворотку обследуемого и затем отмывают от несвязавшегося материала.

4. Стрипы инкубируют антиглобулиновой сывороткой, меченой пероксидазой, отмывают .

Добавляют субстрат и отмечают число окрашенных фракций (пятен), которые соответствуют в зоне локализации комплекса АГ-АТ.

Наличие полос на определённых участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ. Результат иммуноблоттинга считается положительным, если на мембране видны полосы, соответствующие любым двум из трех антигенов ВИЧ — р24, gp41 и gp 120 (рис.37).

РИСУНКИ

Рис.5. Споры В.anthracis.	Рис.6. Капсулы К.рneumoniaе-светлые ореолы вокруг палочковидных бактерий.
Рис. 7. Техника посева на твердую питательную среду.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Основная литература

Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник для студентов мед. вузов 2-е изд., испр. и доп. — 702 с. Под ред. А.А. Воробьева. М. : МИА, 2012.

2. Микробиология, вирусология и иммунология: руководство к лабораторным занятиям: учеб.пособие/(В.Б.Сбойчаков и др.); под ред. В.Б.Сбойчакова, М.М.Карапаца. – М.:ГЭОТАР-Медиа, 2014.- 320с.:ил.

3. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология : учебник для мед.

вузов — 760 с. — Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Коротяев А.И., Бабичев С.А. СПб.: Спецлит, 2010.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник: в 2 т. / Т. 1. — 448 с. — Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Зверев В.В., Бойченко М.Н.

М. : Гэотар Медиа, 2010. .

5. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник: в 2 т. Т. 2. — 480 с. Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Зверев В.В., Бойченко М.Н. М. : Гэотар Медиа, 2010.

Дополнительная литература

1. Иммунодиагностические реакции: учебное пособие / сост.: Г.К.Давлетшина, З.Г.Габидуллин, А.А.Ахтариева, М.М.Туйгунов, А.К.Булгаков, Т.А.Савченко, Р.Ф.

Хуснаризанова, Ю.З.Габидуллин, М.М.Алсынбаев – Уфа: Изд-во ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России, 2016. — 86с.

2. Особенности некоторых свойств, определяющих патогенный потенциал сокультивируемых вариаций бактерий Еnterobacter, Сitrobacter, Serratia, E.coli, Proteus: научное издание / Ю. З. Габидуллин, Р. С. Суфияров, И. И. Долгушин – Уфа, 2015. – 250 с.

Дата добавления: 2014-10-15; Просмотров: 2804; Нарушение авторских прав?;

Главная  »  Иммуноблот – что это? Иммуноблот в диагностике инфекционных заболеваний

Как проводится анализ

Иммуноблот позволяет идентифицировать антитела путем исследования крови и применения гель-электрофореза.

В первую очередь проводится разрушение бактериальных клеток или вирионов ультразвуком, после чего путем электрофореза – разделение всех антигенов вируса или бактериальных клеток. В итоге получается коммерческий реагент, помещаемый на специальную нитроцеллюлозную пленку.

Во время постановки иммуноблоттинга на материал с известным антигеном наносят и исследуемую сыворотку. После того, как провели инкубацию и отмывание несвязавшихся антител, начинают иммуноферментный анализ, наносят на сыворотку иммуноглобулины, которую помечают ферментом, и хромогенный субстрат, меняющий цвет при контакте с ферментом.

Если имеются антитела, на носителе образуются пятна.

Для проведения иммуноблоттинга на ВИЧ используется забор крови

Линейный метод

Линейный блот на ВИЧ – непрямое иммунологическое исследование, методом которого получают качественный показатель аутоантител класса IgG.

В ходе иммунологического исследования используют вирусное вещество ВИЧ-формата или антигены. В лабораторных условиях соединяют белки ВИЧ и отдельные антитела, которые были получены из сыворотки крови. Далее проводится инкубация путем добавления меченых антител и человеческого иммуноглобулина.

Диагностика ВИЧ у новорожденных

В организме ребенка до 9 месяцев, рожденного от инфицированной женщины, присутствуют антитела к ВИЧ матери, что становится причиной получения ложноположительного результата ИФА. По этой причине предпочтение отдают вирусологическим тестам – количественному анализу РНК и ДНК ПЦР. Более чувствителен культуральный метод диагностики инфекции.

Исследование при беременности

Так как ВИЧ-инфекция, развивающаяся у беременной женщины, может передаться будущему ребенку, требуется ранняя диагностика на вирус иммунодефицита.

В первую очередь проводится иммуноферментный анализ, применяемый в качестве скрининга. Диагностическое мероприятие помогает обнаружить в сыворотке крови антитела к инфекции. Несмотря на точные результаты анализа в период беременности, требуется повторное проведение исследования.

Разновидность ИФА – иммунный блоттинг, который часто используют в период беременности. По результатам диагностики можно выявить антитела к определенным антигенам, которые распределены по молекулярному весу методом электрофореза.

Причины ложноположительного анализа на ВИЧ

Большинство людей, сдающих, в силу разных причин, анализ на ВИЧ, всегда надеются на отрицательные показатели. Но иногда бывает, что у неинфицированного человека результат оказывается положительным, что заставляет немало поволноваться. Почему же возникают недостоверные результаты, и как их избежать?

Обнаружение инфицирования можно провести двумя способами:

• Определение антител методом иммуноферментного анализа (ИФА). В ходе исследования происходит сортировка антител на заведомо здоровые и подозрительные, появление которых может исказить результаты.
• Иммуноблотинг – более тщательный и достоверный метод. Заключается в разделении смеси антигенов с помощью электрофореза в специальном геле. Затем пластинку с гелем обрабатывают сывороткой, содержащей антитела к вирусу. Далее анализ продолжают методом ИФА.

Если пациент желает, то может сдать кровь на ВИЧ анонимно. Данные анализа обрабатываются в течение 3 недель.

Стоит внести некоторую ясность в терминологию. СПИД, или синдром приобретенного иммунодефицита, — терминальная стадия ВИЧ-инфекции, заканчивающаяся смертью. Лечения от этой болезни, к сожалению, на сегодняшний день не существует. А вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – это причина, вызывающая СПИД. Поэтому, как таковой, анализ на СПИД не сдается, а диагноз ставится на основании положительного теста на ВИЧ и соответствующей клинической картины.

И все же искаженный результат может возникнуть при наличии следующих заболеваний:

• аутоиммунные заболевания печени;
• патология иммунной системы;
• хронические артриты;
• наличие различной вирусной инфекции;
• онкологические заболевания;
• нарушения свертываемости крови.

Доноры крови также часто сталкиваются с неверным результатом, из-за постоянного обновления крови при частой сдачи.

Следует помнить, что диагноз ВИЧ-инфекции никогда не устанавливается по одному анализу. В случае получения положительных тестов нужно пересдать анализ примерно через 3 месяца. При отсутствии инфицирования новый анализ на вирусы должен показать отрицательный результат.

Существует тест-системы, позволяющие проводить анализ дома. По статистике именно они чаще всего показывают ложноположительные результаты. Для этого есть ряд причин:

• ненадлежащее хранение и эксплуатация тест-системы;
• несоблюдение стерильности при заборе материала;
• нарушение техники проведения анализа;
• сопутствующие состояния организма (вредные привычки, неправильное питание);
• завершение срока годности системы.

Несомненным плюсом применения домашних тестов является сохранение анонимности. Нередкая ситуация, когда положительный результат обнаруживается у беременных женщин. Это объясняется тем, что в ответ на имплантацию женский организм начинает вырабатывать антитела, воспринимая эмбрион как чужеродный материал. Отсюда и неверные показатели теста.

Если у беременной женщины пришел положительный анализ, врачу нужно быть крайне тактичным, чтобы сообщить эту неприятную новость. Желательно пересдать анализ в специализированных СПИД-центрах.

Не стоит забывать и о человеческом факторе. Случаи, когда анализы перепутали, не часто, но имеют место быть. Чтобы это не происходило, медицинскому персоналу нужно более ответственно подходить к выполнению своих обязанностей.

Чтобы избежать ложноположительного результата, при сдаче крови нужно соблюдать ряд правил:

• За несколько дней до сдачи крови нельзя курить, принимать алкоголь, вести активную половую жизнь, неправильно питаться.
• Недавно перенесенное инфекционное заболевания служит поводом для переноса сдачи анализа в среднем на месяц.
• Также необходимо учитывать прием лекарственных препаратов, которые тоже могут исказить результаты.

В любом случае, положительный анализ – еще не приговор. А чтобы его избежать, нужно соблюдать меры безопасности и заботиться о своем здоровье.

Иммуноблоттинг – что это

Иммуноблоттинг – это методика лабораторных исследований сыворотки крови, позволяющая выявить наличие в крови специфических белковых соединений (антител).

Название метода происходит от английского Blot (пятно). В нашей медицине принят термин “блоттинг”. Поскольку метод относится к сложной теме из молекулярной биологии, подробно его рассматривать не будем. Остановимся только на моментах, которые необходимы для понимания диагностической цепочки.

Метод диагностики иммуноблоттинг применяется для определения различных заболеваний. В диагностике ВИЧ он проявил себя эффективно.

Как проводится

Для проведения иммунного блоттинга используют электрофорез исследуемых белковых структур в полиакриламидном геле. После того, как произойдет разделение изучаемых антигенов по молекулярному весу, полученный материал переносят на нитроцеллюлозные или PVDF мембраны. На мембране остается спектр белков, характерный для исследуемого заболевания. После этого на мембрану наносят сыворотку крови пациента. В случае, если сыворотка содержит необходимые антитела, происходит реакция связывания типа антиген-антитело.

Связывание происходит строго по соответствующим полоскам антигенов на мембране. За счет этого становится возможна визуализация образовавшихся комплексов антиген-антитело.

При положительном анализе иммунного блоттинга появляются видимые полосы на определенных участках мембраны.

Также многие современные методики исследования иммуноблоттинга проводятся при помощи ИФА (иммуноферментный анализ) или иммуноокрашивания.

Для каждого конкретного исследования применяют специфичные к исследуемому белку антитела. За счет этого иммунный блоттинг относится к высокоточным исследованиям с низким уровнем погрешности.

В некоторых лабораториях вместо классического иммуноблоттинга применяют линейную методику, относящуюся к непрямым иммунологическим исследованиям, позволяющим провести качественную оценку наличия аутоантител класса IgG.

Различные классы антител IgG, IgM, IgA

Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M). Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций — это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов — госпитальный скрининг (анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С) не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств

Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.