Андрей Смирнов
Время чтения: ~23 мин.
Просмотров: 2

Как красить мазки на малярию

Исследование на малярию

Малярия — одно из опаснейших паразитарных заболеваний на планете, ежегодно поражающее сотни миллионов человек. Люди должны понимать, как проводятся исследования на малярию, как распознать симптомы и когда обратиться за лечением. Ежегодно из сотен миллионов заразившихся сотни тысяч умирают, несмотря на то, что существует лекарство, заболевание поддается лечению.

Симптомы малярии

Главными (и самим очевидными) симптомами, проявляющимся при малярии, являются повторяющиеся с равными промежутками времени приступы лихорадки, повышение температуры и озноб. Длятся они несколько часов и сопровождаются такими признаками:

  • повышение температуры до 41 °C;
  • дрожь;
  • проявления кашля;
  • повышенная потливость (обычно сопровождает окончание приступа и снижение температуры).

Кроме того приступы могут сопровождаться такими явлениями как:

  • расстройства пищеварительной системы,
  • боль в разных частях тела, мышцах, голове,
  • повышенная утомляемость,
  • желтуха.

Хотя обычно симптомы при малярии проявляются спустя несколько недель после заражения, некоторые возбудители могут месяцами жить в организме незаметно. Во время острых приступов наблюдается тенденция к изменению состава крови, может возникать анемия, в особенности при тропической лихорадке. Возможно увеличение внутренних органов, например селезенки, но точную оценку может дать лишь врач.

Диагностические исследования малярии

Для точного диагноза необходимо сделать общий анализ крови и мочи.

При обнаружении вышеперечисленных симптомов необходимо срочно провести диагностику малярии.

Единственным основным способом диагностирования заболевания до сих пор остается непосредственное обнаружение плазмодиев в крови, которая берется у больного во время приступов. Самые распространенные способы анализа включают взятие крови на малярию методом толстой капли и мазка.

Обнаружив плазмодии, можно определить, серьезно ли болен человек, каким именно штаммом. Проводятся также общее исследование крови, обследование мочи, биохимические исследования на содержание билирубина или уровень альбумина.

Общий анализ крови

Поскольку паразит влияет непосредственно на кровь, из-за лихорадки в ее составе наблюдаются различные изменения. Таким образом, показано проведение общего обследования крови для выявления малярии. Лейкоцитоз, анемия, тромбоцитопения — вот лишь немногие возможные последствия болезни.

В общий анализ входят:

  • Сравнение уровня гемоглобина, а также эритроцитов — плазмодии влияют напрямую на кровяные тельца, разрушая их во время болезни.
  • Оценка показания уменьшения тромбоцитов — наблюдается у подавляющего большинства больных, является одним их характерных признаков малярии.
  • Проверка лимфоцитов — их уровень тоже может меняться во время болезни.

Другие анализы

Толстая капля на малярию – простой метод обнаружения заболевания.

Можно также выделить ряд других анализов крови, что могут обнаружить малярию:

  • Метод выявления антител к малярии — позволяет с помощью введения в организм плазмодия отслеживать реакцию иммунитета на него. Если итогом будет негативная реакция, это позволит исключить диагноз.
  • Метод выявления белков плазмодия является одним из новейших возможных анализов, позволяющих определять составные молекулы возбудителя. При сравнительной быстроте способ обладает неплохой точностью, а также небольшими финансовыми затратами для пациента.
  • Метод ПЦР, или полимеразная цепная реакция — непосредственно определяет генетический материал малярийного плазмодия. Проводя такой анализ крови можно определить точное число возбудителей, даже если оно небольшое. К сожалению, одним из недостатков является высокая стоимость процедуры.

Анализ толстой капли крови и мазка

Анализ мазка и толстой капли крови являются наиболее дешевыми и простыми методами обнаружения малярии. В то же время они требуют внимательности и значительных трудозатрат, а также исполнения ряда рекомендаций.

При необходимости обследовать более одного пациента необходимо подготовить инструментарий заранее. При тонком мазке кровь берут из безымянного либо среднего пальца на левой руке. При изготовлении мазка палец удерживается ранкой кверху.

Мазок крови — небольшой, его располагают в центре стекла.

Толстая капля отличается от мазка возможностью исследовать больший объем материала. Если обычные мазки крови— тоненькие, то капля, наносимая на стекло этим методом, имеет размер с монету. В итоге, исследуется в десятки раз больший объем крови.

В дальнейшем каплю подсушивают, и после окрашивания краской Романовского, промывания — исследуют.

1.2 Лабораторная диагностика

Лабораторные
исследования играют важную роль в
установлении диагноза инфекционных
болезней, назначении терапии, проведении
контроля за эффективностью лечения.
Процесс специфической лабораторной
диагностики основан на выявлении
возбудителя и ответной реакции организма
человека в ходе инфекционного процесса.
Он состоит из трех этапов: сбора материала,
транспортировки и его исследования в
лаборатории. К проведению каждого этапа
предъявляют определенные требования,
от соблюдения которых зависит эффективность
лабораторной диагностики.

Лабораторные
методы диагностики различны по
чувствительности и специфичности.
Чувствительность метода отражает
вероятность того, что результат теста
будет положительным у инфицированного
пациента и определяется отношением
общего числа положительных результатов
к общему числу инфицированных пациентов.
Чем выше чувствительность теста, тем
меньше вероятность получения
ложноотрицательных результатов.

1Г. Тестовые вопросы по теме занятия

Микроскопический
метод диагностики:

-обнаружение
микроба-возбудителя в патологическом
материале с помощью микроскопии

выделение
микроба-возбудителя из патологического
материала в чистой культуре и его
идентификация

заражение
патологическим материалом лабораторного
животного

обнаружение
специфических антител или микробных
антигенов

Культуральный
метод диагностики:

обнаружение
микроба-возбудителя в патологическом
материале с помощью микроскопии

-выделение
микроба-возбудителя из патологического
материала в чистой культуре и его
идентификация

заражение
патологическим материалом лабораторного
животного

обнаружение
специфических антител или микробных
антигенов

Биологический
метод диагностики:

обнаружение
микроба-возбудителя в патологическом
материале с помощью микроскопии

выделение
микроба-возбудителя из патологического
материала в чистой культуре и его
идентификация

-заражение
патологическим материалом лабораторного
животного

обнаружение
специфических антител или микробных
антигенов

Иммунологический
метод диагностики:

обнаружение
микроба-возбудителя в патологическом
материале с помощью микроскопии

выделение
микроба-возбудителя из патологического
материала в чистой культуре и его
идентификация

заражение
патологическим материалом лабораторного
животного

-обнаружение
специфических антител или микробных
антигенов

Описательный
период развития микробиологии:

-изобретен
микроскоп и открыты микроорганизмы

разработаны
методы культивирования микроорганизмов
и открыты первые возбудители микробных
заболеваний человека

открыт
иммунитет

разработаны
молекулярные методы исследования

Физиологический
период развития микробиологии:

изобретен
микроскоп и открыты микроорганизмы

-разработаны
методы культивирования микроорганизмов
и открыты первые возбудители микробных
заболеваний человека

открыт
иммунитет

разработаны
молекулярные методы исследования

Иммунологический
период развития микробиологии:

изобретен
микроскоп и открыты микроорганизмы

разработаны
методы культивирования микроорганизмов
и открыты первые возбудители микробных
заболеваний человека

-открыт
иммунитет

разработаны
молекулярные методы исследования

Современный
период развития микробиологии:

изобретен
микроскоп и открыты микроорганизмы

разработаны
методы культивирования микроорганизмов
и открыты первые возбудители микробных
заболеваний человека

открыт
иммунитет

-разработаны
молекулярные методы исследования

Пастеровский
период развития микробиологии:

описательный
период развития микробиологии

-физиологический
период развития микробиологии

иммунологический
период развития микробиологии

современный
период развития микробиологии

Пастером
открыты:

-стафилококк

-пневмококк

-клостридии

палочка
сибирской язвы

холерный
вибрион

туберкулёзная
палочка

Кохом
открыты:

стафилококк

пневмококк

клостридии

-палочка
сибирской язвы

-холерный
вибрион

-туберкулёзная
палочка

Пастер:

-разработал
первые живые вакцины

-разработал
метод стерилизации пищевых продуктов
– пастеризацию

ввёл
использование плотных питательных сред

первым
стал использовать методы окраски мазков

оснастил
микроскоп иммерсионным объективом

Кох:

разработал
первые живые вакцины

разработал
метод стерилизации пищевых продуктов
– пастеризацию

-ввёл
использование плотных питательных сред

-первым
стал использовать методы окраски мазков

-оснастил
микроскоп иммерсионным объективом

Учёный,
с чьим именем связано становление
микробиологической науки в Беларуси:

Жилибер

-Эльберт

Вотяков

Основоположник
белорусской вирусологии:

Жилибер

Эльберт

-Вотяков

В один
таксон объединяет объекты, имеющие
общий корень происхождения:

-филогенетическая
систематика

практическая
систематика

В один
таксон объединяет объекты, схожие по
своим признакам:

филогенетическая
систематика

-практическая
систематика

Основная
таксономическая единица в бактериологии:

вариант

штамм

клон

-вид

род

семейство

порядок

Подвидовые
категории в таксономии микрооорганизмов:

-вариант

-штамм

-клон

вид

род

семейство

порядок

Основная
таксономическая единица в вирусологии:

вариант

штамм

клон

вид

-род

семейство

порядок

Какой
вид микроскопии наиболее часто
используется в бактериологии:

электронная

обычная
световая

-иммерсионная

тёмнопольная

фазово-контрастная

люминесцентная

Простые
методы окраски мазков:

-метиленовым
синим

-водным
фуксином

по Граму

по
Цилю-Нильсену

по
Нейссеру

по
Бурри-Гинсу

Сложные
методы окраски мазков:

метиленовым
синим

водным
фуксином

-по Граму

-по
Цилю-Нильсену

-по
Нейссеру

-по
Бурри-Гинсу

Профилактика

К профилактическим мероприятиям заболевания относятся: раннее выявление больных и их адекватное лечение, нейтрализация источника заражения, химиопрофилактика, иммунизация и санитарно-просветительная работа.

При выявлении больных лейшманиозом выясняются границы очага, планируется система мер борьбы, которые будут воздействовать на все составляющие природного очага.

Профилактика зоонозного кожного лейшманиоза

Основной мерой профилактики распространения данной форы заболевания являются дератизационные мероприятия — уничтожение больших песчанок — основных источников инфекции в радиусе 2,5 — 3 км вокруг населенного пункта.

Профилактика антропонозного кожного лейшманиоза

К профилактическим мероприятиям относятся госпитализация больных в защищенные от москитов помещения, участки поражения закрываются повязкой, защищающей от укусов насекомых.

Профилактика висцерального лейшманиоза

Раннее выявление больных висцеральным лейшманиозом осуществляется путем подворовых обходов. Производится отлов и отстрел бродячих и больных собак (с поражением кожи, облысевших и истощенных). Ветеринары периодически осматривают домашних животных.

Профилактика всех видов лейшманиоза

Профилактика всех видов заболевания включает мероприятия по уничтожению переносчиков инфекции — москитов и мест их выплода. Необходимо проводить обработку ядохимикатами мест пребывания людей, животноводческих и сельскохозяйственных помещений. Население должно пользоваться репеллентами, противомоскитными сетками и пологами.

Иммунизация

Иммунизация проводится лицам, отбывающих на работу в эндемичные очаги лейшманиоза, не позднее 3-х месяцев до выезда, а также детям, постоянно проживающих в природных очагах инфекции. Для иммунизации используется вакцина, содержащая живую культуру Leishmania tropica major. Выработка антител завершается к концу третьего месяца. Дефект кожи после введения вакцины незначительный.

Санитарно-просветительная работа

Большое место среди мер профилактики лейшманиоза занимает санитарно-просветительная работа среди граждан.

Рис. 10. Полог и противомоскитная сетка.

ССЫЛКИ ПО ТЕМЕ

  • Что такое бруцеллез
  • Актиномикоз
  • Как передается ветрянка
  • Что такое язва желудка
  • Что такое малярия

Статьи раздела «Лейшманиоз»

  • Вопросы диагностики, лечения и профилактики лейшманиоза

Самое популярное

  • Все о грибке стопы: симптомы и эффективное лечение современными препаратами
  • Грибок кожи головы: как распознать и лечить
  • Симптомы и лечение грибка ногтей на руках (онихомикоза)
  • Польза и вред кишечной палочки
  • Как лечить дисбактериоз и восстановить микрофлору

Статьи раздела «Лейшманиоз»

  • Лейшмании: морфология и жизненный цикл

О микробах и болезнях 2020

Окраска и фиксация мазков крови

До окраски мазки крови необходимо зафиксировать: 1) метиловым алкоголем в течение 3 минут, 2) абсолютным этиловым спиртом — 5 минут, 3) чистым ацетоном — 5 минут, 4) смесью Никифорова (равные объемы 96° этилового сппрта и эфира) — 10-15 минут или 5) фиксатором Май-Грюнвальда в течение 3 минут.

Фиксацию препаратов крови производят следующим образом. В широкогорлую банку с притертой пробкой, в которую налит один из фиксаторов, устанавливают предметные стекла, сложенные попарно мазками наружу (рис. 30). При большом количестве мазков крови каждую пару предметных стекол захватывают кусочками разрезанной по длиннику полой резиновой трубки, что предотвращает соприкосновение мазков друг с другом. По истечении времени фиксации предметные стекла захватывают пинцетом Корне, располагают на мостике мазками кверху на небольшом расстоянии друг от друга. Мостик монтируют из двух одинакового диаметра и длины трубок или пипеток, которые соединяют между собой резиновой трубкой (расстояние между параллельно расположенными стеклянными трубками должно быть 5-6 см).

Для окрашивания фиксированных препаратов крови применяется краска Романовского, которая готовится следующим образом: 3,8 г сухой краски растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта. Оставляют на несколько дней и периодически взбалтывают, после чего прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3-5 дней при частом взбалтывании. В работе применяют краску Романовского, имеющуюся в продаже, которую разводят на дистиллированной нейтральной воде. Так как дистиллированная вода не всегда бывает нейтральной, ее реакцию проверяют с помощью индикаторной бумаги.

Для получения лучшей окраски пользуются буферными растворами.

Для нейтрализации воду щелочной реакции подкисляют 1% раствором уксусной кислоты. Дистиллированную воду кислой реакции нейтрализуют 1% раствором двууглекислого натрия. Результаты нейтрализации устанавливают с помощью индикаторной бумаги.

Титр краски Романовского (количество капель основного раствора краски на 1 мл дистиллированной воды) устанавливают путем окрашивания мазков крови разными разведениями краски: 1, 2 или 3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Для окраски одного мазка требуется 3-4 мл разведенной краски Романовского. Разведение краски производят в цилиндрах, причем краску приливают к воде и размешивают, но не наоборот. По мазку с лучшей окраской устанавливают титр краски и время окрашивания; этим титром пользуются для окрашивания препаратов крови.

Окраска мазков крови по Романовскому

Высушенные на воздухе и надписанные мазки фиксируют одним из указанных выше фиксаторов, кладут на мостики и после высыхания фиксатора покрывают на 20-25 минут разведенной по титру краской Романовского. Краску сливают, а мазки смывают водой и высушивают.

Окраска мазков крови по Нохту

Для окраски препаратов по этому методу готовят краску азур-эозин: 1 г сухой краски азур II растворяют в 1 л дистиллированной воды и 1 г водного эозина растворяют в 1 л дистиллированной воды. Растворы хранят отдельно в темном месте.

Для окраски используют смесь, состоящую из 0,5 мл раствора азура, 0,5 мл раствора эозина и 3 мл дистиллированной воды.

На фиксированный и высушенный мазок крови наливают на 20-30 минут азур-эозин, затем краску смывают: водой и высушивают мазки.

Окраска мазков крови по Лейшману

Для окраски препаратов необходима краска Лейшмана, которая продается в готовом виде, и дистиллированная вода нейтральной реакции.

На нефиксированный мазок наливают 15-20 капель, краски Лейшмана (благодаря наличию спирта в краске; происходит одновременная фиксация препарата) на 2 минуты. Пипеткой прибавляют 30-40 капель дистиллированной воды нейтральной реакции, производят смешение реактива с водой, красят 4-5 минут. Мазок промывают водой и высушивают на воздухе.

Окраска мазков крови по Крюкову-Папенгейму

Для окраски препаратов надо иметь: 1) фиксатор Май-Грюнвальда, 2) дистиллированную воду нейтральной реакции и 3) разведенную по титру краску Романовского. Для приготовления фиксатора Май-Грюнвальда 0,5 г краски (эозиновокислой метиленовой синьки) растворяют в 200 мл метилового спирта; фиксатор имеется также в готовом виде.

На нефиксированный мазок на 3 минуты наливают 10-15 капель фиксатора Май-Грюнвальда. Не сливая фиксатор, на мазок наливают 10-15 капель дистиллированной воды нейтральной реакции и выдерживают одну минуту, затем фиксатор с водой сливают и на препарат наливают разведенную по титру краску Романовского. Через 15-20 минут препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Выявление жгутиков и ресничек

Метод Леффлера

1. Мазок кладут на 0,5—1 мин в слегка нагретую протраву (100 мл 12 % водного раствора танина + 50 мл насыщенного на холоде раствора сульфата железа + 50 мл спиртового раствора фуксина).

2. Хорошо промывают мазок водой и ополаскивают в спирте.

3. Окрашивают насыщенным раствором фуксина в анилиновой воде, к которому по каплям добавляют 1 % гидроксида нутрия до тех пор, пока раствор не станет мутным и не начнет выпадать, осадок красителя. Раствор красителя наливают на часовое стекло, мазок пускают плавать, подогревая краситель на спиртовке до появления паров. Окрашивают в течение 1—2 мин.

4. Промывают в воде, сушат и исследуют при иммерсии или заключают в бальзам.

Метод Лайфзона

Смешивают равные объемы 1,5 % хлорида натрия, 3 % таниновой кислоты и 0,9 г парарозанилина ацетата + 0,3 г парарозанилина гидрохлорида + 100 мл 96 % спирта. Хорошо размешивают, рН смеси должен быть от 4,8 до 5,2. При комнатной температуре краску можно хранить несколько дней, при 4 °С  —  до 2 мес., а при минус 10 °С — неопределенно долго.

Мазки с культур или из жидкостей не фиксируют на огне, можно пользоваться другими методами фиксации.

Методика окраски

1. На мазок наливают светлую надосадочную жидкость красителя.

2. Окрашивают 8—15 мин до появления на стекле металлического оттенка.

3. Промывают в воде, высушивают и изучают при иммерсии.

Результат: бактерии и жгутики — красные.

пом .Кровь для исследования берут при первом же подрзрении на малярию вне

зависимости от наличия  или
отсутствия  лихорадки в этот момент.

         Кровь на малярию
исследуют  методом  толстой  капли  и тонкого мазка.

основной метод исследования
–изучение толстой  капли.

         Процедура  
исследования   крови с целью обнаружения  малярийных

паразитов включает три 
этапа:

   1.приготовление препаратов
крови.

   2. их окраска

   3.микроскопия

Толстая капля и тонкий 
мазок   должны  быть   приготовлены на обезжиренных предметных  стеклах  с
неповрежденной  поверхностью.

                    
Подготовка предметных стекол

Предметные стекла ,не бывшие
в употреблении, подвергают  предстерилизационной обработке согласно 
ОСТ42-21-2-85 от 10.07.85.г. после чего  помещают  в  сосуд  с

водопроводной  водой ,
которую  меняют  6-7  раз, затем прополасктвают  дистилли-

рованной   водой ,вытирают  
чистой хлопчатобумажной  тканью  и помещают   в  смесь

 Никифорова ( для
приготовления смеси Никифорова  берут равные  количества  этилового

спирта-ректификата эфира  из
расчета 1мл.спирта на одно стекло)  Через сутки  обезжиренные стекла извлечь из
спирто-эфирной   смеси,высушить  хлопчатобумажной тканью, завернуть в чистую
бумагу  не более 10 штук в упаковке  и подвергнуть  стерилиззации  в сухожа-

ровом шкафу  при   180 –
1час. Стекла, бывшие в употреблении,требуют более тщательной обработки.  Если
на стеклах имеется иммерсионное   масло, его следует   удалить

бензолом  или  другим
растворителем жира (ксилол, толуол), вату и ветошь, применяемые

для снятия  иммерсионного
масла, подвергают   обеззараживанию с последующей  утилизацией. Стекла 
замачивают  в 3% растворе  хлорамина на 60 минут или любом другом

дезинфектанте. Дальнейшая 
предстерилизационная  обработка  и стерилизация сходны 

с обработкой  и
стерилизацией   стекол,  не бывших  в употреблении.

     Во время всех
манипуляций  с предметными  стеклами  их  нужно брать так, чтобы

Не касаться пальцами
поверхности стекла.

       При работе с
препаратами крови   медработник  должен соблюдать  правила  по про-

филактике профессионального 
заражения:

· 
работать в резиновых перчатках;

· 
не допускать приема пищи   и
курения  в помещенях для проведения забора  корви

· 
иметь в наличии антисептики

· 
поверхности рабочих столов и
использованные емкости в конце рабочего дня или в случае загрязнения кровью
обеззараживать 3% раствором хлорамина.

                                   
Приготовление препарата крови.

           Приготовление
препаратов крови складывается из следующих зтапов:

· 
очистка кожи;

· 
прокол кожи;

· 
распределение крови по стеклу;

· 
высушивание препарата;

· 
маркировка препарата

Как проводят лабораторную диагностику малярии

Малярия это серьезное заболевание, которое сопровождается лихорадкой и приступами озноба с тяжелыми последствиями для организма. Несмотря на развитие медицины, даже сегодня от этого заболевания гибнут люди.

Согласно медицинской статистике ежегодно от малярии погибает около 1 млн человек. Лабораторная диагностика малярии это единственный способ установить диагноз.

Возбудителем инфекции является паразит, который может проникнуть в организм с укусом комара.

Описание

Малярийные плазмодии – паразитические простейшие микроорганизмы, которые вызывают малярию. В жизненном цикле плазмодиев два хозяина: человек или позвоночное животное, птица, пресмыкающееся и комар.

В качестве паразитов человека обычно распространены четыре вида плазмодиев: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae и Plasmodium ovale. Малярия характеризуется лихорадкой, ознобом, увеличением селезенки и печени, анемией.

Малярийные плазмодии – паразитические простейшие микроорганизмы, которые вызывают малярию. В жизненном цикле плазмодиев два хозяина: человек или позво

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Повышение референсных значений: инфицирование малярийным плазмодием или напряженность иммунитета к инфекции.Понижение референсных значений: отсутствие инфицирования. Ранний период инфицирования, когда антитела еще не сформировались.

Что и как отбирают на исследование?[1]

От больных или контактных лиц для проведения лабораторной диагностики отбираются:

1. Респираторный материал:

• Мазки из носоглотки и ротоглотки. Мазок из носоглотки и ротоглотки забирают в стерильные пластиковые пробирки Эппендорфа и тампоны для мазков (швабы) (рис. 1).

Носоглоточные и орофарингеальные тампоны помещают в одну пробирку для увеличения вирусной нагрузки (рис. 2).

• Мокрота (при наличии). Отбирается в стерильный контейнер, для транспортировки используют транспортную среду, содержащую противогрибковые и антибиотиковые добавки.

Мы рекомендуем

Узнайте номер телефона вирусологической лаборатории, в которую будет доставляться материал, и уточните, можно ли вместо транспортной среды использовать 0,5 мл физраствора. Требования НИИ «Вектор» — только транспортная вирусологические среда. Физраствор разрешают использовать только для исследований в местном ФБУЗ.

• Эндотрахеальный аспират. Отбирают в стерильный контейнер.

• Бронхоальвеолярный лаваж. Забирается в стерильный контейнер, возможно небольшое разведение образца. Ткани биопсии или аутопсии, включая легкие, забираются в стерильный контейнер с физиологическим раствором и транспортной средой, содержащей противогрибковые и антибиотиковые добавки.

• Биопсия легких. Ткани биопсии или аутопсии, включая легкие, забираются в стерильный контейнер с физиологическим раствором и транспортной средой, содержащей противогрибковые и антибиотиковые добавки. Для посмертной диагностики используют аутоптаты легких, трахей и селезенки.

2. Сыворотка крови. Забираются в пробирки для разделения сыворотки, у взрослых собирают 3–5 мл цельной крови.

Проводят две пробы:

• первую — в острую фазу, в первую неделю болезни;

• вторую — через 2–4 недели после острой фазы.

Анализ образцов сыворотки, отобранных в острый период и в период реконвалесценции, может поддержать идентификацию истинного агента.

3. Цельная кровь. Собирается в пробирку. Цель — обнаружить антиген, особенно в первую неделю болезни.

4. Моча. Собирается в контейнер для сбора мочи.

Окраска хламидий

Метод
Романовского-Гимза

Техника
(см. выше).

Микроскопическая
картина.
На
разных стадиях развития способность
воспринимать окраску у хламидий меняется:

— “Элементарные
тельца” (инфекционные частицы)
окрашива­ются краской Гимза в пурпурный
цвет.

— “Первоначальные
тельца” (неинфекционные частицы)
окра­шиваются по Гимза в синий цвет.


Полностью сформировавшиеся зрелые
внутриклеточные включения окрашиваются
краской Гимза в пурпурный цвет (рис.21).

Метод Грама

Техника
(см. выше).

Микроскопическая
картина.

Окраска по Граму дает вариа­бельные
результаты. Поэтому не имеет диагностического
значения.

Окраска водным
разбавленным раствором Люголя

Придает
внутриклеточным формам хламидий
коричневый цвет из-за
гликогеноподобной оболочки частиц.

Окраска микоплазм

Метод
Романовского-Гимза

Техника
(см. выше).

Микроскопическая
картина.

Исследование нативных препа­ратов
не дает результата. Окрашивают препарат
из куль­туры после агаровой фиксации:
кусочек среды с колонией по­мещают
на предметное стекло и накрывают
покровным стеклом с каплей спиртового
раствора метиленового синего и азура,
за­тем препарат высушивают.

Окраска спирохет

Методы
окраски спирохет делятся на две группы:
методы
позитивной окраски
,
когда окрашивается сама клетка, и методы
негативной окраски,

когда окрашивается фон препарата, а
спирохета остается бесцветной.

Из
методов позитивной окраски наиболее
употребителен метод Романовского-Гимза.

Метод
Романовского-Гимза

Техника.
См. выше. Особенностью техники окрашивания
препаратов спирохет является длительность
окраски – в течение 12-15 часов.

Микроскопическая
картина.

Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый,
лептоспиры – розово-красный, а боррелии
– сине-фиолетовый цвет.

Ускоренная
модификация Шерешевского

Техника.
15-20 капель красителя Романовского-Гимза
разводят в 10 мл 0,5-1% раствора глицерина
в воде, разливают в 4-5 пробирок, каждую
из которых последовательно нагревают
на пламени горелки. Горячий раствор
красителя наливают на препарат на 2
минуты, после чего краситель сливают и
препарат заливают свежей порцией
горячего раствора из следующей пробирки.
Вся окраска занимает 8-10 минут.

Микроскопическая
картина.
См.
метод Романовского-Гимза.

Окраска разведенным
фуксином

Используется для
окраски боррелий.

Техника.

Реактив:
фуксин Циля разводят 1:4 или 1:5. Краситель
наносят на фиксированный мазок на 1-2
минуты.

Микроскопическая
картина.
В
мазках крови боррелии окрашиваются в
розово- красный цвет, эритроциты – в
ярко-красный.

Серебрение по
Морозову

Техника.
См. выше.

Микроскопическая
картина.

Спирохеты окрашиваются в буро-черный
цвет (рис.22).

Для негативной
окраски спирохет используют несколько
методов.

Негативный метод
Бурри

Техника.
См. выше.

Микроскопическая
картина.
На
темно-сером тушевом фоне – бесцветные
клетки.

Негативная
окраска колларголом

Этот
метод отличается простотой, доступностью
и хорошей эффективностью.

Техника.
На фиксированный мазок наливают на 3
минуты 2% раствор колларгола. После этого
препарат ставят в наклонное положение
(водой не смывают) и подсушивают.

Микроскопическая
картина.
На
золотисто-оранжевом фоне отчетливо
контурируется бесцветная спирохета.

Негативный метод
Бурри

Техника.
См. выше.

Микроскопическая
картина.
На
темно-сером тушевом фоне – бесцветные
клетки.

Окраска простейших

Метод
Романовского-Гимза

Техника.
См. выше.

Микроскопическая
картина.

Клеточная цитоплазма окрашивается в
голубой цвет, а ядра клеток и жгутики
– в красно-фиолетовый цвет (рис.23).

Метод Райта

Техника.

Реактивы.
Способ приготовления: 1% раствор щелочного
метиленового синего на 0,5% растворе
двууглекислого натрия наливают в сосуд
таким образом, чтобы высота слоя жидкости
не превышала 6 см, и нагревают при 100
С в течение часа. Затем жидкость охлаждают
и фильтруют. Охлажденный фильтрат в
тонком слое при искусственном освещении
должен иметь пурпурно-красный оттенок.
К 100 мл фильтрата добавляют 500 мл 0,1%
водного раствора эозина. При смешивании
обеих жидкостей образуется обильный
осадок; последний отфильтровывают и
высушивают. Полученный таким образом
краситель растворяют в ступке в метиловом
спирте в соотношении 0,1:60,0.

На
сухой нефиксированный мазок наливают
несколько капель красителя. Спустя 1
минуту прибавляют столько же капель
дистиллированной воды. Через 2-3 минуты
препарат промывают в воде около 0,5
минуты, пока он в тонком слое не приобретет
розоватого оттенка.

Микроскопическая
картина.

Ядра простейших окрашиваются в
вишнево-красный цвет, цитоплазма – в
голубоватый, жгутики – в красный цвет.

Морфология малярийных паразитов в толстой капле.

В толстой капле, поскольку ее окрашивают в нефиксированном виде, эритроциты выщелачиваются, а малярийные паразиты претер­певают значительную деформацию. При четырехдневной и тропической малярии пораженные эритроциты в толстой капле выщелачиваются полностью, так же как и нормальные. При трехдневной малярии в толстой капле строма эритроцитов со­храняется и диагностика малярийного паразита по толстой ка­пле облегчается. Кольца в толстой капле обычно смяты, вытя­нуты в виде восклицательного знака, иногда разорваны в виде запятой. Амебовидные шизонты часто бывают уплотненными, лентовидные шизонты четырехдневной малярии в толстой ка­пле округляются и неотличимы от амебовидных шизонтов. Морулы распознаются в толстой капле легко. Цитоплазма паразитов в результате воздействия химиотерапев-тических препаратов окрашивается слабее, приобретает стекло­видный оттенок, становится вакуолизированной, распадается на отдельные комочки, ядро становится рыхлым или, наоборот, более компактным. Иногда пигмент собирается в кучки, вы­талкивает из паразита. В толстых каплях распознавание таких подвергшихся деформации паразитов становится более труд­ным, а иногда и невозможным.

В мазках крови и толстых каплях малярийные паразиты могут быть приняты за мерозоит, скопление бляшек может симули­ровать морулу. В препаратах, окрашенных по Романовскому, бляшки отличаются от мерозоитов по следующим признакам: мерозоит состоит из красного ядра и голубой цитоплазмы. Фон бляшки в мазке иногда окрашивается в бледно-голубой цвет, однако ее зернистость принимает красный цвет более светлого оттенка, чем у ядер мерозоитов.

В препаратах могут быть обнаружены также посторонние мик­роорганизмы, по форме напоминающие малярийных паразитов: грибки, одноклеточные водоросли, свободноживущие простей­шие. Некоторые одноклеточные формы с компактным ядром в центре, окрашивающимся по Романовскому в ярко-красный цвет, симулируют гамонты тропической малярии. Их легко от-, лйчить по отсутствию пигмента. Свободноживущие простей­шие с одним или несколькими жгутами могут быть приняты за стадию образования мужских гамет малярийного паразита.

Окраска мазок на малярию

3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Паразитологическая диагностика малярии

1. Методические указания подготовлены сотрудниками Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Московской медицинской Академии им. И.М.Сеченова Минздрава России (к.м.н. Рабинович С.А., к.б.н. Кукина И.В., Mа. ская* Е.В., к.м.н. Морозов Е.Н.) и Федерального центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора Минздрава России (к.б.н. Цыбина Т.Н., Сыскова Т.Г.). ________________ * Брак оригинала. — Примечание изготовителя базы данных.

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 19 октября 2000 г.

Принцип метода паразитологической диагностики малярии

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом «тонкого мазка» и «толстой капли», окрашенные по Романовскому-Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.

Основной метод — «толстая капля». Благодаря распределению относительно большего объема крови на меньшей площади, за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30-40 раз большее, чем в «тонком мазке», что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Начинать надо всегда с просмотра «толстой капли».

Чувствительность метода «толстой капли» такова, что при просмотре 100-150 полей зрения можно обнаружить около 8 паразитов в 1 мкл крови. Концентрация исследуемой крови на ограниченной площади приводит к многослойному расположению эритроцитов. Для того чтобы паразиты были видимы, «толстую каплю» окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, и паразиты подвергаются деформации. Несмотря на определенную специфичность, такая деформация иногда может препятствовать идентификации вида паразита. Ограничиться просмотром «толстой капли» можно только, если вид паразита был первоначально установлен. «Толстая капля» относительно быстро позволяет выявить и других паразитов крови: трипаносом, микрофилярий, спирохет, бабезий и др. Отрицательный паразитологический результат изучения «толстой капли», но повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов позволяет предположить перенесенную недавно малярию (при отсутствии соответствующих анамнестических данных), обнаружение повышенного содержания лейкоцитов, их видовой состав, а также повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов, позволяют предположить иное заболевание, не связанное с малярией.

В «тонком мазке», фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности как пораженного эритроцита, так и присущие данному виду паразита. Большое значение для дифференциального диагноза имеет характер изменения пораженных эритроцитов. «Тонкий мазок» крови делают в дополнение к «толстой капле». В тех случаях, когда вид возбудителя в очаге установлен, для эпиднадзора за очагом можно ограничиться методом «толстой капли».

Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации