Содержание
- 1 Этапы цитологического анализа
- 2 Дифференциально-диагностические методы окраски микробов. Окраска по Граму, механизм и техника окраски.
- 3 Что собой представляет цитология
- 4 Механизм окраски по Граму
- 5 1.1.3.2. Общие методы окраски
- 6 Бизнес и финансы
- 7 Мазок отпечаток с эрозии на половых органах
- 8 1.1.3.3. Выявление неклеточных структур соединительной ткани
- 9 Функциональные обязанности сотрудников ЦЛ.
- 10 Мазок отпечаток родинки
- 11 Как проводится жидкостная цитология
Этапы цитологического анализа
В зависимости от метода исследования (классическая или жидкостная) будет различаться первый шаг цитологии. В кратком виде алгоритм выглядит следующим образом:
Этап | Характеристика |
Забор биоматериала – традиционная цитология | После получения образца его сразу же наносят на предметное стекло, сушат, фиксируют. Сложность в вероятности повреждения клеток, ложноотрицательного результата. |
Взятия образца для жидкостной цитологии | Материал для анализа помещают в пробирку с веществом, препятствующим реакции разрушения клеток. |
Фиксация в лабораторных условиях | Закрепление на предметном стекле (классическая техника), приготовление раствора (жидкостная вариация цитологии) с последующей окраской (например, по Папаниколау или Лейшману). |
Оценка под микроскопом | Врач, изучая клеточный состав, делает выводы относительно отклонений от нормы в зависимости от количества, строения, дополнительных включений. Выставляет теорию, обосновывающие подобные данные. |
Обоснованием для составления схемы лечения будет финальное заключение.
Проведение цитологии во время беременности
Анализ на цитологию в гинекологии – важный пункт периодического ежемесячного приема для женщин, вынашивающих ребенка. Оценивая данные микрофлоры, доктор сопоставляет результаты со сроком беременности.
Цитология показывает ранние признаки воспалительных изменений. Не лечить в этот период опасно как для матери, так и для плода. Риск возможных последствий велик.
При необходимости придется сделать гемотест, анализ гормонов щитовидной железы, посетить институт генетики, исключить хромосомные аберрации с учетом законов Менделя.
Дифференциально-диагностические методы окраски микробов. Окраска по Граму, механизм и техника окраски.
Сложные методы. Включают последовательное
нанесение на препарат красителей,
различающихся по химическому
составу и цвету, протрав и дифференцирующих
веществ. Это позволяет выявить определенные
структуры клеток и дифференцировать
одни виды микроорганизмов от других.
1. По
Леффлеру— гранулы
валютина окрашиваются в темно- синий,
а палочка дифтерийной каринобактерии
в голубой.
2. По
Нейсеру— валютин в
сине-черный, а бактерия в желтый.
3. По
Гинсу-Бурри— обнаружение
капсул
4. По
Шефферу— Фультону-
окрашивание спор ( существует еще способ
Пешкова).
5. Окраска
по Цилю- Нельсену.
Применяется для выявления кислото- и
спиртоустойчивых микобактерий
туберкулеза, лепры и некоторых
актиномицетов, которые из-за большого
количества в клеточных оболочках
липилов, воска и оксикислот непроницаемы
дл: разведенных растворов красителей.
Окрашивание их достигается, при помощи
фенолового фуксина Циля с подогреванием
над пламенем горелки до закипания и
отхождения паров. Окрашенные с применением
термокислотной обработки кислотоустойчивые
бактерии не обесцвечиваются слабыми
растворами минеральных кислот и спирта.Кислоустойчивые бактерии
окрашиваются в интенсивно красный цвет,
остальные виды микробов, обесцвечивающиеся
в процессе обработки препарата кислотой,
— в светло-синий цвет.
6. Окраска
по Романовскому-Гимзе
Осуществляется сложным красителем (в
его состав входят метиленовый синий,
эозин и азур), в результате он окрашивает
бактерии (спирохеты), простейшие и
форменные -элементы крови в различные
цвета и оттенки. Так, под его воздействием
цитоплазма простейших приобретает
голубой цвет, а ядра — красный: боррелии
окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а
трепонемы и лептоспиры — в слабо-розовый;
эритроциты — в розовый цвет, ядра
лейкоцитов — в фиолетовый, а их цитоплазма
— в голубой (базофильная зернистость —
в синий, эозинофильная — н красный,
нейтрофильная — в сиреневый).
7. Окраска
по Граму.
Из-за неодинакового содержания
пептидогликана (ПГ) в оболочках разных
прокариот метод дает возможность
подразделять их на грамположительные
(фиолетовые, 90 % ПГ)
и грамотрицательные (розовые, 5-20 % ПГ) В
соответствии с этим, во-первых, в царстве
прокариот выделяют четыре раздела: 1.
тонкостенные, грамотрицательные. 2.
толстостенные, грамположительные. 3.
лишенные стенок. 4. дефектные стенки,
отсутствие пептидогликана. Во-вторых,
окраска по Граму позволяет также
установить родовую и видовую принадлежность
многих возбудителей инфекционных
болезней. Например, известно, что все
болезнетворные кокки (кроме гонококка
и менингококка), бациллы и клостридии
являются грамположительными. а
энтеробактерии, вибрионы, трепонемы —
грамотрицательными.
Техника окраски по Граму:
-
-
Наносим на фиксированный
мазок через фильтровальную бумажку
раствор генцианвиолетта на 2-3 минуты.
У грам+ м/о генцианвиолет проникает
вглубь клеточной стенки и образует
прочный комплекс с трихоевыми кислотами
и Mgниевыми
солями РНК, у грам- краситель проникает
в в клеточную стенку. -
Промываем водой – для удаления излишков
красителя -
Наносим раствор Люголя на
1 минуту – для удаления остатков влаги
и укрепления образовавшейся связи у
грам+. -
Сливаем, не промывая водой.
-
Наносим раствор этилового 96% спирта
на 30 секунд, равномерно покачиваем для
отхождения фиолетовых пятен. Из грам-
вымывается краситель. -
Промыть под водой
-
Наносим раствор фуксина на 2-3 минуты
для окраски обесцветившихся грам- м/о -
Промыть водой
-
->
грам- — красные, грам+ — синие.
Что собой представляет цитология
Множество гинекологических заболеваний протекают бессимптомно и их невозможно обнаружить на обычном осмотре у врача. Поэтому были созданы специальные диагностические исследования, гарантирующие обнаружение проблем на ранних стадиях.
Среди таких диагностик по праву важной считается цитология. То есть, цитология помогает определить уровень дисплазии и уровень возможного развития рака
С помощью данного исследования у прекрасной половины появляется шанс вовремя принять меры и остановить развитие злокачественного процесса
То есть, цитология помогает определить уровень дисплазии и уровень возможного развития рака. С помощью данного исследования у прекрасной половины появляется шанс вовремя принять меры и остановить развитие злокачественного процесса.
Эту диагностику широко используют в современной женской консультации, а западные гинекологи ввели цитологию обязательным анализом для беременных женщин и девушкам, устраивающимся на работу.
Механизм окраски по Граму
Существует несколько теорий механизма окраски по Граму. Предполагалось, что грамположительная окраска обусловлена ненасыщенными жирными к-тами, имеющимися у некоторых бактерий и способными соединяться с йодом, в результате чего «эктоплазма» бактерий становится непроницаемой для спирта и извлечения адсорбированного красителя не происходит.
Другая теория связывает механизм окраски по Граму с различиями в кислотно-основных свойствах протоплазмы у грамположительных и грамотрицательных бактерий. Эти две группы бактерий характеризуются различной изоэлектрической точкой (см.), к-рая у грамположительных видов находится при pH 2,0—3,0, а у грамотрицательных ок. 5. Наряду с этим следует указать, что протравы, применяемые при окраске (йод, пикриновая к-та, бихромат и др.), являются окислителями и имеют тенденцию превращать некоторые комплексы протоплазмы в более кислые соединения, сдвигая изоэлектрическую точку бактерий в кислую сторону. Свойство йода и других протрав сдвигать изоэлектрическую точку в кислую сторону у грамположительных бактерий выражено в большей степени, чем у грамотрицательных, что указывает на определенные хим. различия между этими микробами. Поскольку сродство к красителям и резистентность к обесцвечиванию тем сильнее, чем ниже Изоэлектрическая точка бактерий, а исходное значение pH у грамположительных бактерий ниже, чем у грамотрицательных, и после обработки йодом оно в значительной степени еще снижается, создаются условия для прочной фиксации краски.
Химическая теория объясняет грамположительность наличием на поверхности цитоплазмы клетки комплекса из белка и рибонуклеата магния. Этот комплекс можно экстрагировать из тела грамположительных бактерий желчными солями и превратить их в грамотрицательные. Полученный таким способом грамотрицательный вариант можно вновь превратить в грамположительные добавив к нему выделенный экстракт. Превращение грамположительных бактерий в грамотрицательные происходит также при обработке убитых бактерий рибонуклеазой. Присутствие протеин-рибонуклеата магния на поверхности клетки доказывается тем, что успех окраски зависит от структурной целостности бактерий. При механических повреждениях, разрыве оболочки, раздавливании, растирании можно наблюдать превращение поврежденных бактерий в грамотрицательные. Грамположительность сохраняется у морфологически целостных клеток.
Имеются данные, свидетельствующие, что в конечном итоге окраска по Граму зависит от разной проницаемости клеточных стенок у грамположительных и грамотрицательных бактерий
В частности, указывается, что клеточная стенка грамположительных бактерий содержит больше пептидогликана, чем грамотрицательных бактерий, и, что особенно важно, пептидогликаны обеих групп бактерий структурно отличаются друг от друга. В пептидогликане грамположительных бактерий (Staphylococcus aureus) остатки N-ацетил мурамовой к-ты содержат О-ацетилгруппы в положении C6, что придает молекулам пептидогликана устойчивость, в частности к лизоциму
Высказывается предположение, что обработка спиртом при окраске по Граму уменьшает диаметр пор в пецтидогликановом слое у грамположительных бактерий в большей степени, чем у грамотрицательных.
В силу этого комплекс генцианвиолет — йод при обработке спиртом удерживаемся грамположительной клеткой и извлекается из грамотрицательной.
Библиография: Пирс Э. Гистохимия, пер. с англ., М., 1962; Роуз Э. Химическая микробиология, пер. с англ., М., 1971; .Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 23, М., 1973; The bacteria, ed. by I. С. Gunsalus a. R. J. Stanier, y. 1, N. Y. — L., 1960; Gram H. C.J. Uber die isolierte Farbung der Schizomyceten in Schnittund Trockenpraparaten, Fortschr. Med., Bd 2, S. 185, 1884.
1.1.3.2. Общие методы окраски
1. |
1.а) б) в) 2. 3. |
2. |
1. предварительно 2. 3. структуры |
Бизнес и финансы
БанкиБогатство и благосостояниеКоррупция(Преступность)МаркетингМенеджментИнвестицииЦенные бумагиУправлениеОткрытые акционерные обществаПроектыДокументыЦенные бумаги — контрольЦенные бумаги — оценкиОблигацииДолгиВалютаНедвижимость(Аренда)ПрофессииРаботаТорговляУслугиФинансыСтрахованиеБюджетФинансовые услугиКредитыКомпанииГосударственные предприятияЭкономикаМакроэкономикаМикроэкономикаНалогиАудитМеталлургияНефтьСельское хозяйствоЭнергетикаАрхитектураИнтерьерПолы и перекрытияПроцесс строительстваСтроительные материалыТеплоизоляцияЭкстерьерОрганизация и управление производством
Мазок отпечаток с эрозии на половых органах
Часто взятие мазков отпечатков выполняют с целью диагностики инфекционных заболеваний.
Для выявления многих возбудителей могут использоваться микроскопические методы.
Они применяются с целью диагностики:
- половых инфекций;
- неспецифических бактериальных воспалений;
- грибковых процессов.
Для выявления половых инфекций мазок-отпечаток головки обычно окрашивают по Граму.
Затем его исследуют под микроскопом.
Показанием к взятию материала таким способом является наличие симптомов баланопостита.
Его могут вызывать ряд микроорганизмов, передающихся половым путем.
Из тех, что могут быть обнаружены в микроскоп, это трихомонада и гонококк.
Трихомонада может быть определена в нативном (неокрашенном) мазке.
Гонорею обнаруживают при окрашивании по Граму.
Гонококки идентифицируются по ряду параметров.
А именно по форме, расположению и цвету.
Цвет должен быть при окрашивании по Граму розовый.
Потому что эти бактерии грамотрицательные.
Форма у патогена бобообразная.
Располагаются гонококки парами.
Они обращены внутрь вогнутыми сторонами.
Располагаются гонококки как внутри, так и вне клеток.
Для установления диагноза обязательно должны быть обнаружены внутриклеточные формы.
В противном случае потребуется подтверждения культуральным методом.
Микроскопическое выявление трихомонад проводится часто в нативном мазке.
Эти микроорганизмы способны двигаться.
Их распознают по характерным толчкообразным движениям.
Оно приводит к смещению расположенных рядом клеток.
Чувствительность теста у мужчин низкая.
При развитии у них баланопостита трихомонадной этиологии этих бактериях в эрозиях не так много.
Их обнаружение возможно только при концентрации не менее 10 в 4 степени в мл.
Трихомонады имеют размеры такие же, как у рядом расположенных лимфоцитов.
Когда они неподвижны, то их трудно отличить от клеток эпителия.
Ещё менее чувствительные методы исследования на трихомониаз с окрашиванием.
Иногда эти микроорганизмы случайно выявляются в цитологическом мазке.
Также в мазках-отпечатках выявляются неспецифические бактерии: палочки, кокки.
Они идентифицируются по расположению и окрашиванию по Граму.
При выявлении большого количества лейкоцитов и бактериальной флоры подтверждается диагноз неспецифического баланопостита или вульвовагинита.
Мазок-отпечаток с головки члена берут и на грибки.
При обнаружении нитей псевдомицелия и почкующихся клеток диагностируют кандидоз.
1.1.3.3. Выявление неклеточных структур соединительной ткани
1. |
а) б) |
2. |
1. кислого а 2.а) б) |
3.Импрегнация |
1. б) 2. |
4. |
Эластические остальные |
5. |
Эластические коллагеновые ядра |
6. |
1. 2. подвергаютдекальцинации б) 3. б) остальной фон |
Функциональные обязанности сотрудников ЦЛ.
Заведующий ЦЛ.
-
Организует и
обеспечивает
работу
отделения,
составляет план
работы отделения
с распределением
обязанностей
между,
сотрудниками. -
Организует и
контролирует
доставку в
лабораторию
цитологического
материала и
результатов
исследования из
прикрепленных
лечебно-профилактических
учреждений (за
доставку
цитологического
материала несет
ответственность
главный врач
учреждения,
которое
направляет
материал), при
наличии
централизованной
доставки —
главный врач
базового
учреждения. -
Организует и
контролирует
выезды
медицинского
персонала в
прикрепленные
лечебно-профилактические
учреждения для
срочных
цитологических
исследований,
проведения
пункций,
консультаций
сложных случаев,
клинико-биопсийных
конференций,
обследования
цитологических
лабораторий. -
Отбирает случаи,
подлежащие
разбору на
клинико-биопсийных
конференциях,
вместе с зам.
главного врача
по лечебной
работе,
составляет
повестку,
участвует в
организации
проведения
клинико-биопсийных
конференций
(консультирует
докладчиков,
осуществляет
предварительное
изучение
цитологических
препаратов,
слайдов и др.). -
Проводит
ежегодный анализ
работы ЦЛ и
представляет
руководству ЛПУ. -
Руководит
работой по
составлению к
постоянному
пополнению
коллекции
микропрепаратов,
созданию
фототеки музея. -
Консультирует
врачей
клинических
отделений по
вопросам
клинической
цитологии. -
Организует
повышение
квалификации
врачей и
лаборантов. С
этой целью
организует и
проводит
периодические и
тематические
конференции, в
т. ч. по
исследованию
цитологического
материала;
освоение новых
цитологических и
цитохимических
методик;
проводит разбор
сложных случаев
цитологической
диагностики. -
Обеспечивает
готовность
работы отделения
при поступлений
для
цитологического
исследования
инфекционного
материала. -
Отвечает за
своевременное
предоставление
заявок на
необходимые
материалы,
реактивы,
инструментарий,
оборудование,
контролирует их
расход и
использование. -
Несет
ответственность
за соблюдение
сотрудниками
отделения правил
безопасности,
противопожаpной
безопасности,
хранения
ядовитых
веществ.
Врач-цитолог
-
проводит
цитологическое
исследование
профилактического,
диагностического,
гормонального,
цитогенетического
материала; при
необходимости
производит
срочное
цитологическое
исследование,
участвует в
совместной
работе с
эндоскопистом,
хирургом,
другими
специалистами в
получении
материала, при
необходимости
самостоятельно
осуществляет
пункционные
биопсии; -
оставляет
микропрепараты
для архива,
фотографирования,
демонстрации на
клинико-биопсийной
конференции; -
дает указание
лаборанту о
способах
обработки
цитологического
материала,
методиках
окраски,
количестве
цитологических
препаратов; -
контролирует
качество и сроки
выполнения
работы
лаборантов,
оказывает им
методическую
помощь; -
в неясных
случаях
обсуждает
препараты с
другими врачами
отделения и
консультирует с
зав. ЦЛ; -
проводит
микроскопическое
исследование
цитологического
материала,
описывает
микроскопическую
картину и
устанавливает
цитологический
диагноз. При
установлении
диагноза
злокачественной
опухоли, тяжелой
дисплазии
эпителия,
процессов,
требующих
гормональной
терапии и
хирургического
вмешательства,
проведения
лучевой или
цитостатической
терапии,
результат
исследования
подписывает зав.
ЦЛ; -
докладывает зав.
ЦЛ о всех
недочетах в
производственной
работе; -
осуществляет
организационно-методическую
работу; -
ежемесячно
отчитывается о
проделанной
работе.
Старший лаборант
-
организует,
обеспечивает и
контролирует
работу среднего
и младшего
персонала
лаборатории; -
ведет графики,
начисляет
заработную
плату,
выписывает хим.
реактивы,
перевязочный
материал и др.; -
готовит основные
растворы хим.
реактивов,
осуществляет
учет и хранение
хим. реактивов; -
организует учебу
среднего,младшего
персонала в
лаборатории; -
помогает зав.
отделением в
составлении
отчетов и заявок
на хим. реактивы
и оборудование; -
следит за
санитарно-эпидемиологическим
состоянием
лаборатории.
Лаборант
(фельдшер-лаборант)
-
осуществляет
микроскопические
исследования
профилактического
и гормонального
материала; -
оформляет
документацию для
регистрации
цитологического
материала; -
обрабатывает
цитологический
материал с
применением
дополнительных
методик; -
осуществляет
срочное
изготовление
цитологических
препаратов; -
оформляет выдачи
микропрепаратов
из архива; -
осуществляет
уход за
приборами и
аппаратурой; -
готовит хим.
реактивы; -
участвует в
организационно-методической
работе по
улучшению
качества
материала; -
ежемесячно
отчитывается о
проделанной
работе.
Мазок отпечаток родинки
Некоторые родинки вызывают у онкологов подозрения.
Их них могут расти очень опасные опухоли – меланомы.
Чтобы подтвердить диагноз или убедиться в отсутствии онкологического перерождения, требуется взять мазок-отпечаток.
Он подлежит цитологическому исследованию.
В отличие от пункционной биопсии, нет риска, что такой мазок будет способствовать дальнейшему распространению агрессивной опухоли.
Он не повышает риск метастазирования.
Взять мазок-отпечаток нужно в таких случаях:
- родинка стала асимметричной – одна её сторона не похожа на другую;
- она начала увеличиваться в размерах;
- край родинки стал неровным;
- форма меняется со временем;
- цвет стал неравномерным – одни участки темнее других;
- образование намного темнее аналогичных, расположенных на других участках тела;
- появились включения красного, белого, желтого, синего цвета;
- диаметр родинки превышает 6 мм, и при этом пациент не помнит, какой она была раньше (например, при расположении на спине, волосистой части головы).
Мазок-отпечаток на цитологию является высокоэффективным методом диагностики.
Его достоверность составляет 95%.
В мазке обнаруживается один из 4 основных типов меланомы.
Также могут выявляться несколько дополнительных.
Основные типы:
- Эпителиоподобный.
В мазке преобладают клетки круглой или овальной формы.
Они располагаются разрозненно.
С виду напоминают клетки эпителия.
Часто отмечается клеточный полиморфизм.
Клетки разные по форме.
Они различаются по размеру, числу ядер, строению хроматина.
Часто наблюдается фрагментация ядер.
А также их неравномерное окрашивание.
- Веретеноклеточный.
Клетки продолговатые, имеют форму веретена.
Локализованы группами.
Цитоплазма часто имеет отростки.
Они зернистого вида.
В клеточных структурах есть пигмент, что позволяет отличать меланому от прочих новообразований.
- Невусоподобный.
В мазке-отпечатке выявляется множество разной формы пигментные клетки.
Они такие же, как при пигментном невусе.
Встречаются двухъядерные большие клетки.
Часто наблюдается клеточный полиморфизм.
- Смешанноклеточный.
Нет ведущего типа патологических клеток.
Выявляются различные их виды: круглые, пигментные, веретенообразные, отростчатые и т.д.
Как проводится жидкостная цитология
В настоящее время в клинической практике используются несколько технологических вариантов жидкостной цитологии. Наиболее известной и востребованной из них является Becton Dickinson (BD) Sure Path, которая была одобрена FDA в США в 1999 году, с 2004 года официально одобрена NICE в Великобритании. С этого времени она активно внедряется в повседневную клиническую практику в странах Европы, РФ и ближнего зарубежья.
Основными этапами этого исследования являются:
- Забор материала. Для этого используется специально разработанная комбинированная цитощетка особой конструкции. Ее аккуратно вводят в цервикальный канал, после чего совершают вращательные движения (2 против движения часовой стрелки и 3 по ее ходу). Это обеспечивает максимально возможное и при этом малотравматичное получение поверхностно расположенных клеток слизистой оболочки шейки матки – с ее влагалищной части, из цервикального канала и прилегающих участков влагалища. Такая манипуляция не требует анестезии, ведь испытываемые женщиной ощущения не превышают болевой порог.
- Помещение цитощетки с полученным материалом в специальную пробирку (флакон) с особой жидкостью, что и дало название методике. Такая среда не только обладает консервирующими и стабилизирующими свойствами, но и способствует образованию суспензии с равномерным распределением клеток и других элементов по всему объему. Пробирки транспортируются в лабораторию, имеющую лицензию на проведение жидкостной цитологии и соответственно оснащенную.
- Автоматизированная подготовка цитопрепарата. Включает вакуумную фильтрацию порции суспензии из пробирки, центрифугирование, нанесение полученного клеточного осадка равномерным слоем на стекло-слайд, окраску по методу Папаниколау с использованием влажной фиксации.
- Микроскопия цитопрепарата. ПАП-тест на основе жидкостной цитологии осуществляется по тем же принципам, что и в случае традиционной методики. Но при этом учитываются особенности окраски, положения и размеров клеток после влажной фиксации цитопрепарата. Именно поэтому исследование может проводиться только прошедшим специальное обучение сертифицированным врачом-лаборантом.
Расшифровка результатов анализа производится только гинекологом или онкологом. Ответ из лаборатории может быть получен через 5-10 дней после забора материала. Но нередко этот срок удлиняется до 2-3 недель. Скорость получения ответа зависит от времени транспортировки, загруженности лаборатории и способа информирования поликлинического звена о данных проведенных исследований. При необходимости проводят экспресс-исследование, в этом случае врач узнает результат уже в течение первых 24 часов.
Схема проведения жидкостной цитологии шейки матки
А что после исследования?
Период восстановления после жидкостной цитологии принципиально не отличается от такового при взятии обычного мазка на онкоцитологию или биопсии шейки матки. В течение 1,5 недель рекомендуется выдерживать половой покой, отказаться от использования вагинальных тампонов и спринцеваний. В первые дни после теста допустимы необильные кровянистые выделения из влагалища, поэтому женщине желательно пользоваться гигиеническими прокладками.
Повышение температуры тела, продолжительные или обильные кровянистые выделения, боли внизу живота – тревожный признак. Появление таких симптомов требует скорейшего обращения к врачу.