Андрей Смирнов
Время чтения: ~8 мин.
Просмотров: 1

Мазок крови: алгоритм исследования

Типы

Обычно существует три типа процессов фиксации в зависимости от исходного образца:

Тепловая фиксация: после высыхания мазка при комнатной температуре предметное стекло захватывают щипцами или прищепкой и несколько раз пропускают через пламя горелки Бунзена, чтобы уничтожить жар и прикрепить организм к предметному стеклу. Обычно используется с бактериями и археями. Тепловая фиксация обычно сохраняет общую морфологию, но не внутренние структуры. Тепло денатурирует протеолитический фермент и предотвращает автолиз. Тепловая фиксация не может использоваться в методе капсульного окрашивания, так как тепловая фиксация приведет к сжатию или разрушению капсулы ( гликокаликс ) и не будет видна в пятнах.

Погружение: образец ткани погружают в фиксирующий раствор, объем которого минимум в 20 раз превышает объем фиксируемой ткани. Фиксатор должен диффундировать через ткань для фиксации, поэтому необходимо учитывать размер и плотность ткани, а также тип фиксатора. Это распространенный метод для сотовых приложений. Использование большего образца означает, что фиксатору требуется больше времени, чтобы достичь более глубоких тканей.

Перфузия: фиксация посредством кровотока. Фиксатор вводится в сердце с объемом инъекции, соответствующим сердечному выбросу. Фиксатор распространяется по всему телу, и ткань не отмирает, пока не зафиксируется. Это дает преимущество в сохранении идеальной морфологии, но недостатком является то, что объект умирает, а стоимость фиксатора, необходимого для более крупных организмов, высока.

Цели

Выполняя свои защитные функции, фиксаторы денатурируют белки путем коагуляции, образования аддитивных соединений или комбинации процессов коагуляции и аддитивных процессов. Соединение, которое химически добавляется к макромолекулам, стабилизирует структуру наиболее эффективно, если оно способно объединяться с частями двух разных макромолекул — эффект, известный как сшивание. Фиксация ткани производится по нескольким причинам. Одна из причин — убить ткань, чтобы предотвратить посмертный распад (автолиз и гниение). Фиксация сохраняет биологический материал ( ткань или клетки ) как можно ближе к его естественному состоянию в процессе подготовки ткани к исследованию. Для этого обычно необходимо выполнить несколько условий.

Во-первых, фиксатор обычно действует, чтобы отключить внутренние биомолекулы, особенно протеолитические ферменты, которые в противном случае переваривают или повреждают образец.

Во-вторых, фиксатор обычно защищает образец от внешних повреждений. Фиксирующие средства токсичны для большинства распространенных микроорганизмов ( в частности, бактерий ), которые могут присутствовать в образце ткани или колонизировать фиксированную ткань. Кроме того, многие фиксаторы химически изменяют фиксированный материал, делая его менее вкусным (неперевариваемым или токсичным) для условно-патогенных микроорганизмов.

Наконец, фиксаторы часто изменяют клетки или ткани на молекулярном уровне, увеличивая их механическую прочность или стабильность. Эта повышенная прочность и жесткость могут помочь сохранить морфологию (форму и структуру) образца при его обработке для дальнейшего анализа.

Даже самая тщательная фиксация приводит к изменению образца и появлению артефактов, которые могут помешать интерпретации клеточной ультраструктуры. Ярким примером является бактериальная мезосома , которая в 1970-х годах считалась органеллой у грамположительных бактерий , но позже была показана с помощью новых методов, разработанных для электронной микроскопии, как просто артефакт химической фиксации. Стандартизация фиксации и других процедур обработки тканей учитывает это появление артефактов, устанавливая, какие процедуры вводят какие виды артефактов. Исследователи, которые знают, какие типы артефактов следует ожидать от каждого типа ткани и техники обработки, могут точно интерпретировать участки с артефактами или выбрать методы, которые минимизируют артефакты в областях, представляющих интерес.

Факторы, влияющие на фиксацию

Кислотность или основность

Следует поддерживать в физиологическом диапазоне от 4 до 9 pH . Значение pH для сохранения ультраструктуры должно составлять от 7,2 до 7,4.

Осмолярность

Гипертонические растворы вызывают сокращение клеток.

Гипотонические растворы приводят к набуханию клеток и плохой фиксации.

10% нейтральный буферный формалин представляет собой 4% формальдегида (1,33 осмолярности) в буфере PBS (0,3 осмолярности) в сумме до 1,63 осмолярности. Это очень гипертонический раствор, но в течение многих лет он хорошо зарекомендовал себя в качестве общего условия фиксации тканей в патологических лабораториях. Размер ткани также может повлиять на процесс фиксации.

Температура

Повышение температуры увеличивает скорость фиксации

Однако необходимо соблюдать осторожность, чтобы не допустить приготовления образца. Обычно фиксация проводится при комнатной температуре.

Продолжительность

Как правило, параформальдегид (PFA) должен проникать через 1 час на миллиметр ткани. Таким образом, если у нас есть трехмерный тканевой блок, время фиксации определяется кратчайшим размером.

Время от снятия до фиксации

Фиксация — это химический процесс, и для его завершения необходимо время. Хотя «чрезмерная фиксация» может быть вредной, недостаточная фиксация недавно была признана серьезной проблемой и может быть причиной неправильных результатов для некоторых анализов.

3.Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов простым методом

Фиксированные
препараты нельзя рассмотреть под
микроскопом, так как они являются
бесцветными и пропускают световые лучи.
Поэтому их окрашивают, используя простые
или сложные методы. При окрашивании
фиксированных мазков простыми методами
используют один краситель (фуксин,
краска Муромцева, генцианвиолет,
метиленовая синь и др.). Последовательность
окрашивания мазка простыми методами
следующая:

На фиксированный препарат наносят
несколько капель красителя таким
образом, чтобы он покрывал всю поверхность
мазка и выдерживают в течение определенного
времени. Так, при окраске фуксином на
мазок наносят несколько капель красителя
и выдерживают его на мазке 2-3
мин.

Краску смывают с мазка слабой струей
до бесцветной смывной воды

При этом
стекло держат в наклонном положении
над лотком.

Мазок подсушивают фильтровальной
бумагой, которую осторожно прикладывают
к стеклу, и досушивают на воздухе.

На окрашенный мазок наносят каплю
иммерсионного масла и рассматривают
препарат с объективом х90 или х100.

Задание 3. Схематически изобразить
морфологическую структуру бактериальной
клетки:

Задание 4. По памяти зарисовать и
подписать основные шаровидные формы
бактерий (микрококки, диплококки,
тетракокки, сарцины, стрептококки,
стафилококки).

Задание 5. По памяти зарисовать и
подписать основные палочковидные формы
бактерий.

Приложение к лабораторной работе
№1

Задание 6. Зарисовать и подписать
расположение жгутиков у бактерий
(монотрихи, лофотрихи, амфитрихи,
перитрихи).

Монотрихи– бактерии с 1 полярно расположенным
жгути­ком

Лофотрихи– бактерии, на одном конце которых
имеется пучок жгутиков

Амфитрихи– бактерии, имеющие пучки жгутиков
на обоих полюсах бактериальной клетки

Перитрихи– бактерии, жгутики которых
расположены по всей поверхности
бактериальной клетки, то есть
перитрихеально

Приложение к лабораторной работе
№1

Задание 7. Зарисовать и подписать
виды расположения спор в теле
микроорганизма.

Терминальное
расположение спор
.

Спора
располоагается на полюсе бактерии, и
тогда она приобретает форму барабанной
палочки.

Центральное
расположение спор.

Если споры крупные
и располагаются в центре клетки, то
палочка может приобретать веретенообразную
форму

Субтерминальное
расположение спор
.

Спора располагается
на конце палочки, и тогда она приобретает
форму булавы.

Лабораторная
работа №3-4

Тема: Морфологические
признаки дрожЖей и микроскопических
грибов. влияние окружающей среды на
микроорганизмы. Стерилизация и
дезинфекция.

Цель:
Изучить основные признаки дрожжей и
микроскопических грибов. Приготовление
живых препаратов дрожжей и грибов.
Ознакомиться с влиянием окружающей
среды на микроорганизмы, изучить методы
и способы стерилизации и дезинфекции.

Оборудование,
материалы:

Микроскоп; термостат; сухожаровый шкаф;
препаровальные иглы и бактериологические
петли; предметные и покровные стекла;
фильтровальная бумага; спиртовка; лоток
с рельсами для предметных стекол;
разделочные доски, лопатки, обработанные
с применением растворов хлорсодержащих
препаратов; раствор йодисто-калиевого
крахмала; метиленовая синь, пипетки;
культуры грибов родов Mucor, Aspergillus,
Penicillium, Alternaria; чистая культура дрожжей
Saccharomyces cerevisiae.

ХОД ЗАНЯТИЯ:

Мазок из полового члена: разновидности анализа

Какие существуют виды анализов, на которые берется соскоб или мазок из члена?

Для мужчин принято выделять два типа анализов: мазок из члена характера на флору и анализ на присутствующие ЗППП.общего Т.е. венерические заболевания, инфицирование которыми происходит в момент незащищенного полового акта.

В первом варианте берут мазок при помощи специального зонда и помещают его на предметное стекло. Далее материал окрашивают и изучают при помощи оптического прибора (микроскопа).

Данная лабораторная манипуляция позволяет выявить наличие бактериальной или грибковой флоры, узнать количество лейкоцитов, определить внутриклеточных паразитов. Недостатком методики является невозможность определения вида конкретного возбудителя.

Поскольку при увеличении многие их них выглядят одинаково. Поэтому, часто в заключении можно увидеть диагноз «кокковая флора».

Под ним может подразумеваться наличие таких бактерий как Streptococcus, Staphylococcus или других факультативно-анаэробных микроорганизмов. Для более развернутого ответа понадобиться сдать мазок на инфекционные заболевания.

Мазок на скрытые инфекционные болезни исследуется другим образом. Врач проводит забор биологического материала, помещает его на специализированную среду и отправляет в лабораторию для последующего анализа.

Как правило, в данном случае прибегают к полимеразной цепной реакции (ПЦР). Полимеразная реакция представляет собой метод амплификации ДНК in vitro (в пробирке). Для этой цели используется фермент ДНК-полимераза.

Термин «цепная реакция» в данном контексте описывает тот факт, что продукты предыдущих циклов служат исходными материалами для следующего цикла. И, таким образом, дают экспоненциальное усиление.

Преимущества: обнаружение небольших количеств ДНК, высокая чувствительность, быстрый результат, обнаружение вирусов, которые нельзя выращивать на клеточной культуре. Кроме того, ПЦР используется для проверки и уточнения неоднозначных результатов, полученных другими методами.

Существует два типа анализа. Качественный, где определяется наличие или отсутствие инфекции. И количественный, который содержит информацию о концентрации конкретной бактерии/вируса.

Мазок урогенитальный ПЦР

Клинический материал из мочеполовой системы берут не только для микроскопии.

Его также могут исследовать при помощи ПЦР.

Целей такой диагностики может быть несколько.

Наиболее частые из них:

  • выявление возбудителей половых инфекций;
  • точная оценка состояния биоценоза влагалища с определением количества и соотношения обитающих там микроорганизмов.

Обычно анализ урогенитального мазка методом ПЦР проводится с целью обнаружения ДНК патогенных микроорганизмов, возбудителей ЗППП.

Преимущество метода состоит в том, что любые бактерии, грибки, простейшие или вирусы могут быть обнаружены таким способом.

Результаты значительно более точные, чем у микроскопии.

Субъективности никакой нет – реакции ПЦР автоматизированные, а полученные результаты интерпретируются однозначно.

Выявления ДНК микроорганизмов возможно даже при их наличии в минимальном количестве.

То есть, болезни могут выявляться на ранних стадиях или при субклиническом течении.

Обнаруживаться могут те же самые гонококки или трихомонады, что и при проведении микроскопии.

В диагностике кандидоза результаты получаются более точными, так как определяется количество копий ДНК в мл.

Кроме того, можно определить точный вид кандид, что влияет на выбор препаратов для этиотропной терапии.

Помимо перечисленных инфекций с помощью ПЦР могут быть выявлены:

  • герпес;
  • папилломавирус;
  • хламидия;
  • микоплазма.

Исследоваться может не только урогенитальный мазок, но также секрет простаты, эякулят, кровь или любой другой биоматериал, где предположительно может находиться возбудитель.

Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации