Андрей Смирнов
Время чтения: ~12 мин.
Просмотров: 0

Анализ крови на толстую каплю для чего

Содержание

Слайд 1

Слайд 2
Основывается на данных:
Эпидемиологического и географического анамнеза;
Клинических проявлений болезни;
клинический диагноз, предположительный

Результатов лабораторного исследования;
окончательный диагноз видовой формы

Слайд 3
Лабораторная диагностика
2 метода:
Паразитологический. Ведущий метод окрашенных препаратов крови по Романовскому — Гимза, тонкого мазка и толстой капли. Обнаружение бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Оба метода, имеют свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.
Иммунологический.
Подтверждением служит обнаружение в препарате крови любых стадий паразитов, развивающихся в эритроцитах:
Трофозоитов (молодых/взрослых);
Шизонтов (незрелых/зрелых);
Половых форм;
Гаметоцитов (мужских/женских).

внеэртроцитарные стадии:
Мерозоиты (существуют в плазме крови короткое время, в препарате обнаруживаются редко).

Слайд 4

Подготовка предметных стекол;
Приготовление препаратов, их окраска;
Собственно микроскопия.

Слайд 5
1. Подготовка предметных стекол
В настоящее время выпускают специальные стекла не требующие предварительной обработки.
Предметные стекла, не бывшие в употреблении:
Моют в мыльном растворе
Помещают в сосуд с водопроводной водой, меняя 6-7 раз
Вытирают х/б тканью
Помещают в смесь Никифорова (спирт-эфирная смесь, из расчета 1 мл на 1 стекло), до употребления

Либо, извлечь стекла через сутки, высушить х/б тканью и завернуть в чистую бумагу.
Предметные стекла, бывшие в употреблении:
Иммерсионное масло удаляют эфиром
Заливают мыльным раствором, отмывая тряпочкой

Важно!
Во время манипуляций с предметными стеклами их нужно брать так, чтобы не касаться пальцами поверхности стекла.

Слайд 6

Кровь берется с соблюдением правил асептики из 2-4 пальца левой руки. Кожу протирают 70° этиловым спиртом, первую выступившую каплю крови вытирают сухой ватой, удаляя остатки спирта, которые могут способствовать фиксации крови в препарате.
Важно!
Кожа в месте прокола должна быть максимально чистой, т.к

попавшие в препарат МО могут быть причиной диагностических ошибок.

Слайд 7

Не должен доходить ни до конца, ни до краев предметного стекла, на котором он делается
Диаметр капли не более 2-3 мм
Предметное шлифованное стекло, которым делается мазок, должно быть уже стекла, на которое наносят мазок, угол последнего 45°
Маркировка (ф.и., дата взятия)
Фиксация в 96° этиловом спирте (20-30 мин)
Окрашивание

Слайд 8

На предметное стекло наносят каплю крови диаметром 5-10 мм, следят, чтобы в кровь не попал спирт, так как она может зафиксироваться и при последующем окрашивании препарата не произойдет нужного гемолиза.
Каплю крови размазывают иглой или углом предметного стекла в кружок или квадрат. Либо сначала готовят мазок толще обычного, пока он не высох, на него наносят две капли, которые по влажному мазку растекаются.
Высыхание
Маркировка при помощи дополнительной полоски крови
Окрашивание

Слайд 9

1—6—.этапы приготовления тонкого мазка;
7, 8, 9 — неправильно приготовленные мазки;
10—12—разные способы приготовления толстой капли.

Слайд 10
Дефекты тонкого мазка
Толстая капля

Слайд 11

Слайд 12

Слайд 13
Приготовление рабочего раствора краски
Окрашивание азур-эозиновым красителем по Романовскому-Гимзе. Концентрация раствора по стандартной методике составляет 1-2 капли краски на 1 мл раствора, предварительно проверенной на наличие в ней азура. Под микроскопом в мазке :

Эритроциты имеют розовый с фиолетовым оттенком цвет
Лейкоциты с фиолетовыми ядрами (у гранулоцитов хорошо определяется зернистость)
Тромбоциты темно-розового, рубинового цвета
Ядра паразитов окрашены примерно в тот же цвет, что и тромбоциты

Продолжительность окрашивания толстых капель 15-30 мин., мазков – 40-45 мин. После препарат промывают слабой струей воды и высушивают на воздухе.
Важно!

В качестве растворителя краски используют буферный раствор рН=7,0 — 7,2.
Толстую каплю не фиксируют , эритроциты должны отсутствовать (кроме остатков незрелых и пораженных паразитами)

Слайд 14
Дефекты приготовления и окраски препаратов крови. Способы их устранения

Слайд 15

Слайд 16

Посмотреть все слайды

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента. Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

Как проводят общий анализ крови: подготовка

Плановый общеклинический анализ крови лучше всего сдавать с утра натощак. Накануне вечером не рекомендуется злоупотреблять углеводами и жирной пищи, стараться избегать стрессов и повышенных физических нагрузок, за несколько дней до исследования не употреблять спитрное. Рекомендуется не принимать лекарственные препараты, которые могут искажать результаты исследования, например, НПВС, Ацетилсалициловую кислоту, антикоагулянты непрямого действия. Если прием этих лекарств необходим по жизненным показаниям, то обязательно стоит предупредить об этом врача.

В экстренных ситуациях, например, при остром хирургическом состоянии общий анализ крови проводят независимо от времени суток и давности приема пищи.

Для забора крови специалист осуществляет прокол безымянного пальца, который предварительно обрабатывают спиртовым раствором. Первую каплю крови удаляют ватным тампоном, смоченным спиртом, последующие забирают для анализа.

Что такое малярия?

Малярия — опасное и очень заразное паразитарное заболевание, легко передающееся через укусы комаров рода анофелис и через кровь, например, при переливании. Недуг сопровождается повторяющимися приступами лихорадки, наиболее широко распространен в странах с влажным и жарким климатом. После того как паразит попал в тело, он начинает размножаться, поражает клетки, разрушает их, лавинообразно наращивая свое присутствие

Посему решившие посетить жаркие тропические страны должны проявлять повышенную осторожность, и при наименьших подозрениях сдать анализ крови. Заражению особенно подвержены:

  • люди с низким иммунитетом,
  • дети до 5 лет,
  • беременные женщины.

Морфология малярийных паразитов в толстой капле.

В толстой капле, поскольку ее окрашивают в нефиксированном виде, эритроциты выщелачиваются, а малярийные паразиты претер­певают значительную деформацию. При четырехдневной и тропической малярии пораженные эритроциты в толстой капле выщелачиваются полностью, так же как и нормальные. При трехдневной малярии в толстой капле строма эритроцитов со­храняется и диагностика малярийного паразита по толстой ка­пле облегчается. Кольца в толстой капле обычно смяты, вытя­нуты в виде восклицательного знака, иногда разорваны в виде запятой. Амебовидные шизонты часто бывают уплотненными, лентовидные шизонты четырехдневной малярии в толстой ка­пле округляются и неотличимы от амебовидных шизонтов. Морулы распознаются в толстой капле легко. Цитоплазма паразитов в результате воздействия химиотерапев-тических препаратов окрашивается слабее, приобретает стекло­видный оттенок, становится вакуолизированной, распадается на отдельные комочки, ядро становится рыхлым или, наоборот, более компактным. Иногда пигмент собирается в кучки, вы­талкивает из паразита. В толстых каплях распознавание таких подвергшихся деформации паразитов становится более труд­ным, а иногда и невозможным.

В мазках крови и толстых каплях малярийные паразиты могут быть приняты за мерозоит, скопление бляшек может симули­ровать морулу.  В препаратах, окрашенных по Романовскому, бляшки отличаются от мерозоитов по следующим признакам: мерозоит состоит из  красного  ядра и  голубой цитоплазмы. Фон бляшки в мазке иногда окрашивается в бледно-голубой цвет, однако ее зернистость принимает красный цвет более светлого оттенка, чем у ядер мерозоитов.

В препаратах могут быть обнаружены также посторонние мик­роорганизмы, по форме напоминающие малярийных паразитов: грибки, одноклеточные водоросли, свободноживущие простей­шие. Некоторые одноклеточные формы с компактным ядром в центре, окрашивающимся по Романовскому в ярко-красный цвет, симулируют гамонты тропической малярии. Их легко от-, лйчить по отсутствию пигмента. Свободноживущие простей­шие с одним или несколькими жгутами могут быть приняты за стадию образования мужских гамет малярийного паразита.

Вам все еще кажется, что избавиться от паразитов тяжето?

Судя по тому, что вы сейчас читаете эти строки — победа в борьбе с паразитами пока не на вашей стороне…

И вы уже думали о хирургическом вмешательстве? Оно и понятно, ведь внутренний организм у вас один, а его правильное функционирование — залог здоровья и хорошего самочувствия. Плохое настроение, отсутствие аппетита, бессонница, дисфункция иммунной системы, дисбактериоз кишечника и боль в животе… Все эти симптомы знакомы вам не понаслышке.

(function(w, d, n, s, t) { w = w || []; w.push(function() { Ya.Context.AdvManager.render({ blockId: ‘R-A-264774-2’, renderTo: ‘yandex_rtb_R-A-264774-2’, async: true }); }); t = d.getElementsByTagName(‘script’); s = d.createElement(‘script’); s.type = ‘text/javascript’; s.src = ‘//an.yandex.ru/system/context.js’; s.async = true; t.parentNode.insertBefore(s, t); })(this, this.document, ‘yandexContextAsyncCallbacks’);
var m5c80d59fc336d = document.createElement(‘script’); m5c80d59fc336d.src=’https://www.sustavbolit.ru/show/?’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘=’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘&’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘=7396&’ + Math.round(Math.random()*100000) + ‘=’ + document.title +’&’ + Math.round(Math.random()*100000); function f5c80d59fc336d() { if(!self.medtizer) { self.medtizer = 7396; document.body.appendChild(m5c80d59fc336d); } else { setTimeout(‘f5c80d59fc336d()’,200); } } f5c80d59fc336d();
window.RESOURCE_O1B2L3 = ‘kalinom.ru’;

Определение степени полихромазии в толстой капле

Степень полихромазии устанавливают в толстой капле, окрашенной по Романовскому. Препараты изучают с иммерсионной системой микроскопа. В нескольких полях зрения подсчитывают количество синевато-фполетовых сеточек (рис. 48). По количеству сеточек, содержащихся в каждом поле зрения, судят о степени полихромазии. Если при нормальном количестве эритроцитов в 1 мм3 крови насчитывают до 10 сеточек в поле зрения, то полихромазию обозначают одним полюсом (Р + ), при обнаружении до 20 сеточек ее обозначают двумя полюсами (Р++), при количестве сеточек до 30 — тремя полюсами (Р+ + +) и в случае большого количества сеточек — четырьмя плюсами (Р + + + +).

Рис. 48. Полихроматофилия и базофильная зернистость в толстой капле. а — сеточка остатки полихроматофилии эритроцитов

Изучение плазмодиев — возбудителей трехдневной, четырехдневной и тропической малярии

С целью обнаружения плазмодиев малярии толстую каплю и мазки изучают с иммерсионной системой микроскопа. Малярийные плазмодии отыскивают в более тонкой части капли (по краю ее), где лучше сохраняется форма паразитов.

В сомнительных случаях изучение малярийных плазмодиев проводят в мазках крови. Паразиты, как правило, обнаруживаются в эритроцитах; их цитоплазма окрашивается в серовато-синий или голубой цвет, а ядро — в оттенки красного цвета.

Возбудитель трехдневной малярии — Plasmodium vivax (рис. 46а, 1 и 46б, 1). Мерозоит имеет овальную или круглую форму, размер его 1-2 ц. Он представляет собой ядро и комочек цитоплазмы.

Рис. 46а. Возбудители малярии человека в мазке крови. 1 — Plasmodium vivax, 2 — Plasmodium malarie, 3 — Plasmodium falciparum

Кольцевидный шизонт по виду напоминает перстень. Он имеет в центре вакуоль, окруженную ободком цитоплазмы, в наиболее тонком месте которой расположено маленькое ядро. Различают мелкие, средние и крупные кольцевидные шизонты.

Амебовидный шизонт имеет одно ядро и цитоплазму, окружающую в молодых шизонтах одну, а во взрослых несколько вакуолей. Имеющиеся в питоплазме паразита ложноножки придают ему причудливую форму. На полюсе, противоположном ядру, цитоплазма шизонта значительно шире и содержит коричневые зернышки пигмента. В участках эритроцитов, свободных от плазмодиев, выявляют обильную, мелкую красноватую зернистость Шюффнера.

Шизонт, подготавливающийся к делению, теряет вакуоли, принимает округлую форму с правильными ровными контурами, пигмент располагается диффузно, либо собирается в кучки, а ядро — ближе к периферии цитоплазмы паразита. Шизонт заполняет почти весь эритроцит, который увеличивается в размере. В свободном от паразита пространстве выявляется зернистость Шюффнера. В делящемся шизонте выявляют два и более ядер в необособленной цитоплазме.

Морула имеет от 14 до 22 мерозоитов, тесно прилегающих друг к другу, пигмент в ней собирается в одну кучку, реже — в две или остается рассеянным.

Женские гаметоциты (макрогаметоциты) крупнее мужских, имеют маленькое плотное ядро, располагающееся эксцентрично. Цитоплазма темно-голубого цвета, в которой равномерно рассеян обильный пигмент темно-коричневого цвета. Мужские гаметоциты (микрогаметоциты) имеют более крупное и рыхлое ядро, располагающееся центрально, в периферических участках цитоплазмы обнаруживается обильный пигмент коричневатого цвета. В свободных от паразита участках эритроцита выявляется зернистость Шюффнера.

Возбудитель четырехдневной малярии — Plasmodium malariae (рис. 46а, 2 и 46б, 2). Имеет те же формы развития, что и возбудитель трехдневной малярии. Встречаются как амебовидные, так и лентовидные формы шизонтов. Молодые формы лентовидных шпзонтов расположены поперек эритроцита в виде узкой полоски. Взрослые лентовидные шизонты находятся в виде ленты, ядро вытянуто в длину и расположено по краю ленты, шизонты занимают почти весь эритроцит. Пигмент сосредоточен на противоположной от ядра стороне.
Морула имеет 6-12 (чаше 8) мерозоитов; располагаются они в виде правильной розетки («маргаритки») вокруг кучки пигмента.

Рис. 46б. Возбудители малярии человека в толстой капле. 1 — Plasmodium vivax, 2 — Plasmodium malarie, 3 — Plasmodium falciparum

Половые формы развития (гаметоциты) округлые; они мельче гаметоцитов возбудителя трехдневной малярии. Возбудитель четырехдневной малярии имеет следую¬щие морфологические особенности: он меньше Plasmodium vivax; эритроциты с находящимися в них паразитами никогда не увеличиваются в размерах.

Возбудитель тропической малярии — Plasmodium рга-ecox falciparum (рис. 46а, 3 и 466, 3). Кольцевидные шизонты мелкие и имеют вид тонких ободков; они занимают 1/6 часть эритроцита.

Амебовидные шизонты имеют одну-две широкие ложноножки, пигмент располагается в одном месте в виде компактной кучки темно-коричневого цвета. Гаметоциты имеют характерную форму полулуния.

В середине возбудителя располагается ядро. Женские гаметоциты имеют компактное ядро, окруженное пигментом в виде зерен; цитоплазма окрашивается по Романовскому в синий цвет. У мужских гаметоцитов ядро более крупное и рыхлое, цитоплазма светло-голубого цвета, иногда виден ободок эритроцита. В крови больного обнаруживают кольца и гаметоциты раздельно или вместе. Эритроциты с находящимися в них плазмодиями не увеличены.

Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации