Андрей Смирнов
Время чтения: ~6 мин.
Просмотров: 2

Приготовление мазков крови, толстой капли и их окраска

Ошибки

Грамположительные бактерии окрасились в красный цвет

Причина Решение

Мазок переобесцвечен (самая частая ошибка)

  1. Приготовить новый мазок и повторить окраску, уменьшив время обработки обесцвечивающим раствором
  2. Просмотреть много полей зрения в испорченном мазке. Иногда удается найти подходящие
  3. Если нет возможности приготовить новый мазок, полностью обесцветить имеющийся, тщательно промыть водой, высушить и повторить окраску
Старая культура Окраска по Граму учитывается для суточных культур (для медленно растущих бактерий — через двое-трое суток). При длительном хранении на питательной среде наблюдается дегенарация муреинового слоя. Используйте культуру подходящего возраста
Культура выращена в неблагоприятных условиях При выращивании на селективных средах может образовываться слишком тонкий муреиновый слой Культивируйте микроорганизм на полноценной среде
Особенности строения клеточной стенки (грамвариабельные бактерии) нет

Грамотрицательные бактерии окрасились в синий цвет

Причина Решение

Слишком густой мазок или наличие конгломератов (например, при аутоагглютинации)

Краситель удерживается не клеточной стенкой, а за счет капиллярности пространств между клетками в скоплении
  1. Просмотреть много полей зрения, возможно в препарате есть поля зрения с нормальной \»густотой\» мазка
  2. Повторить приготовление препарата, взяв меньше культуры и приготовив мазок на большей площади
  3. При аутоагглютинации культуры взять для приготовления мазка дистиллированную воду

Мазок плохо обесцвечен

  1. Просмотреть много полей зрения, возможно в препарате есть поля зрения с нормальным обесцвечиванием
  2. Повторить приготовление препарата и его окраску
  3. Дообесцветить имеющийся мазок
  4. Проверить правильность приготовления обесцвечивающего раствора. При повторении ошибки — заменить раствор.

Особенности строения клеточной стенки (грамвариабельные бактерии)

нет

приложений

Эта методика используется клиническими лабораториями для окрашивания мазков периферической крови и костного мозга, срезов тканей и цитологий..

В гематологической области этот метод имеет жизненно важное значение при изучении аномалий клеток с точки зрения формы, размера и количества. Это очень ценный инструмент для диагностики некоторых заболеваний, таких как лейкемия и анемия

Кроме того, он представляет выдающуюся полезность при поиске паразитов в гематологических полях (Plasmodium sp и Трипаносома Крузи) или гистологический (Leishmanias sp).

Вагинальная цитология

Что касается влагалищной цитологии, этот метод особенно выгоден для наблюдения Trichomonas vaginalis. Это важный вывод, так как его наличие имитирует картины карциномы на месте которые затем исчезают при уничтожении паразита.

Образец спермы

Это был идеальный инструмент для исследования образцов спермы, поскольку он предоставляет ценную информацию о качестве спермы.

Данные, которые он предлагает, имеют отношение главным образом к числу и морфологии, а также к сопутствующим клеткам, которые могут присутствовать и имеют жизненно важное значение, таким как половые клетки, лейкоциты и эпителиальные клетки.. С помощью этого анализа можно описать аномалии, наблюдаемые в сперме в голове, шее, средней части и основной части

С помощью этого анализа можно описать аномалии, наблюдаемые в сперме в голове, шее, средней части и основной части.

Кроме того, они также могут помочь выявить случаи гемоспермии (наличие эритроцитов в сперме) и лейкоспермии или пиоспермии (увеличение количества лейкоцитов в сперме).

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчёта 1—2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20—25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского-Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объёмов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней

Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт

Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Справочная информация

ДокументыЗаконыИзвещенияУтверждения документовДоговораЗапросы предложенийТехнические заданияПланы развитияДокументоведениеАналитикаМероприятияКонкурсыИтогиАдминистрации городовПриказыКонтрактыВыполнение работПротоколы рассмотрения заявокАукционыПроектыПротоколыБюджетные организацииМуниципалитетыРайоныОбразованияПрограммыОтчетыпо упоминаниямДокументная базаЦенные бумагиПоложенияФинансовые документыПостановленияРубрикатор по темамФинансыгорода Российской Федерациирегионыпо точным датамРегламентыТерминыНаучная терминологияФинансоваяЭкономическаяВремяДаты2015 год2016 годДокументы в финансовой сферев инвестиционной

ПОИСК

    Краситель Романовского—Гимзы 

    Краситель Романовского— Гимзы состоит из метиленового синего, эозина и азура, благодаря чему он окрашивает в разные цвета элементы микроорганизма и форменные элементы крови.

Перед обработкой препарата краситель разводят водой (pH 7,0 — 7,2) в 10 — 20 раз. Степень разведения меняется в зависимости от серии красителя и pH воды. Поэтому рекомендуют каждую новую серию красителя и воду проверять на контрольных мазках крови. [c.

20]

    Краситель Романовского — Гимзы, имеющий в растворе сине-фиолетовый цвет, окрашивает цитоплазму форменных элементов ткани в голубовато-синий цвет, а ядра клеток, так же как и микробные тела, в фиолетово-красный (см. рис. 30). 

    Толстую каплю независимо от способа приготовления высушивают постепенно (не на солнце и без подогрева) и не фиксируют. Окрашивают спустя несколько часов после взятия крови 4 — 5%-м водным раствором красителя Романовского — Гимзы в течение 20—25 мин. 

    Окраска по Романовскому — Гимзе. Краситель Романовского—Гимзы состоит из смеси азура, эозина и метиленового синего.

Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды (pH 7,0—7,2) прибавляют 10 капель имеющегося в продаже красителя Романовского — Гимзы. Приготовленный раствор красителя тотчас наливают на фиксированный мазок или предметное стекло с окрашиваемым.

препаратом погружают в стаканчик с красителем. Через час краситель сливают, препарат промывают водой и высушивают па воздухе. 

    Метод Романовского-Гимза. Этим методом в клетках микроорганизмов одновременно выявляют ядерные вещества и волю-тин. Препарат фиксируют 5 мин метиловым спиртом или фиксатором Карнуа.

Ядерные вещества окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, цитоплазма – в слабо-розовый. 

    Микроскопия. У больного во время приступа или перед повторным приступом берут кровь из пальца и готовят препарат толстой капли и мазок. Вначале окрашивают препарат толстой капли, так как при его исследовании больше вероятности получить положительный результат.

На высушенный нефиксированный препарат капли крови наливают на 35 — 45 мин краситель Романовского—Гимзы, затем препарат осторожно промывают водой и высушивают. Под микроскопом боррелии имеют вид тонких нитей сине-фиолетового цвета с несколькими большими неравномерными завитками (см

цв. вклейку, рис.

24). 

    Приготовление микропрепаратов. На чистом обезжиренном стекле готовят мазок и подсушивают на воздухе. Полученный препарат фиксируют метиловым, абсолютным этиловым спиртом или смесью Никифорова в течение 5 мин либо охлажденным безводным ацетоном в течение 3 — 5 мин. После фиксации высушенные мазки окрашивают свежеприготовленным красителем Романовского — Гимзы в течение 1 ч, затем мазок быстро промывают 96%-м этиловым спиртом для удаления избытка красителя, высушивают и микроскопируют с использованием иммерсионной системы при увеличении 900—1500х. 

    Окраска по Романовскому— Гимзе в модификации Филипсона. Смешивают ] часть красителя Романовского —Гимзы и 3 части 95%-го этилового спирта.

Нефиксированные мазки заливают этой смесью на 1,0 — 1,5 мин, затем, не сливая краски, осторожно по каплям добавляют такое же количество дистиллированной воды, не допуская, чтобы жидкость сливалась со стекла. Через 20 — 30 мин мазки промывают водой и высушивают. 

Через 20 — 30 мин мазки промывают водой и высушивают. 

    Краситель Романовского-Гимза. Промышленность выпускает препарат из смеси азура (органический краситель, полученный из метиленового синего), эозина и метиленового синего. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды, имеюш,ей нейтральную или слабош,елочную реакцию (pH 7,2), прибавляют десять капель красителя. 

Смотреть страницы где упоминается термин Краситель Романовского — Гимзы:       Смотреть главы в:

Микробиология с техникой микробиологических исследований изд.4 -> Краситель Романовского — Гимзы

Романовского

2019 chem21.info Реклама на сайте

Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Максим Иванов
Наш эксперт
Написано статей
129
Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации