Анализы на выявление впч: типы, особенности исследований и расшифровка результатов

Правила забора биоматериала

Кровь забирается натощак, пробирку нужно закрыть крышкой и перевернуть вверх дном, чтобы кровь хорошо перемешалась с антикоагулянтом. Кровь можно хранить не более 6 часов, при температуре 20-25 градусов. Если кровь взята для количественного исследования, температура хранения не должна превышать 2-8 градусов тепла.

Для анализа мочи нужна первая утренняя порция в количестве 15-20 мл. сбор мочи должен проводиться только после качественного туалета наружных половых органов.

Во время менструации собирать мочу не следует. Условия хранения полученного материала – не более 3 суток, в стерильной посуде при температуре 2-8 градусов тепла.

Соскобное отделяемое из влагалища, цервикального канала или уретры забирается при помощи зонда. Собранный материал переносится в стерильную пробирку, которая плотно закрывается и маркируется.

В некоторых случаях требуется биопсийный материал. В этом случае его собирают с очага инфекции. Кусочки ткани помещаются в стерильные пробирки, которые плотно закрывают и хранят при комнатной температуре не более 6 часов.

Где можно пройти обследование?

ПЦР-диагностика осуществляется в лабораторных условиях. При обращении в районную поликлинику будет выдано направление на обследование в лаборатории при поликлинике или в женскую консультацию, где осуществляется данное исследование.

Без направления по собственной инициативе (для профилактики) или при повторном анализе через некоторое время можно самостоятельно обратиться в любую частную лабораторию или медицинский центр, где предоставляется данная услуга.

Пациентке назначат удобное время, расскажут о процедуре и подготовке к ней, а также о сроках выдачи результатов. Обычно результаты анализа готовы на следующий день.

СПРАВКА! Можно заказать срочный анализ, тогда результаты выдадут на руки в этот же день. Такое обследование будет стоить дороже.

Стоимость одного анализа (на один штамм вируса) обойдется примерно в 200–300 рублей. Комплексное обследование будет стоить от 500 до 2000 рублей.

ПЦР-исследование является одним из самых востребованных и надежных тестов для обнаружения ДНК патогенных микроорганизмов в организме человека, постановки диагноза и назначения лечения.

Для анализа одного обследования может быть недостаточно, поэтому через некоторое время понадобится повторная диагностика. Для ПЦР подходит кровь, моча, сперма, слюна, но чаще всего используется естественная смазка из влагалища или мужской уретры. Результаты анализа можно забрать уже на следующий день.

Анализ на антитела к ВПЧ

Любой микроорганизм, в том числе папилломавирус, иммунная система считает чужеродным белковым веществом – антигеном. Поэтому для его уничтожения вырабатываются органические соединения – антитела, задача которых инактивировать возбудителя. Именно на их обнаружении и основан этот лабораторный метод.

Для исследования берется кровь, из которой отделяется жидкая часть – плазма. Затем в нее добавляют вирусы папилломы быка, схожие по своей иммунной структуре с человеческими. При заражении ВПЧ происходит реакция антиген-антитело и образуются белковые комплексы, которые обнаруживают лабораторным путем. Так выявляют инфицирование ВПЧ типами 6, 11, 16, 18, 33.

Большой минус метода – позднее проявление реакции на возбудителя. Антитела образуются не сразу после заражения, поэтому какое-то время реакция будет ложноотрицательной. Но даже в разгар болезни антитела вырабатываются не всегда. Из-за этих недостатков исследование применяется редко.

Через сколько проявляется заболевание?

Вирус зачастую продолжительное время сохраняется в организме бессимптомно, а затем самопроизвольно элиминируется.

Но в ряде ситуаций при наличии благоприятствующих факторов возможно развитие инфекционной патологии.

Последнее случается как через пару недель от момента заражения, так и спустя несколько месяцев.

Папилломавирусы оказываются причиной целого ряда заболеваний, в том числе рака шейки матки (рака цервикального).

Каждый год в мире регистрируется до полумиллиона новых эпизодов этого страшного заболевания, обусловленных воздействием именно данного микроорганизма.

А также почти четверть миллиона смертей от цервикального рака.

В целом 93% случаев онкозаболевания маточной шейки имеет причиной именно ВПЧ.

По риску возникновения онкологии все типы разделяются на три группы:

онкогенного риска высокого (18,16, 35, 33, 31 и др.) – при участии провоцирующего факторов вирусы этой группы способны вести к злокачественным изменениям;

• низкого (8, 6, 14, 12 и др.) – вирусы вызывают онкологическую патологию только при определенных условиях и весьма редко;
• неонкогенные (1,2,3 и др.) – не способны вызывать рак.

Представители первой из перечисленных групп вызывают такие заболевания, как:

• неоплазия (иначе дисплазия) маточной шейки – появление атипично измененных клеток, выраженность процесса изменяется от легкой степени (предрака) до рака;
• бовеноидный папулез (причина – преимущественно ВПЧ 16-го типа) – проявляется плотными красно-коричневыми образованиями (папулами) на коже половых органов, имеет в целом доброкачественное течение, но в 3% случаев приводит к озлокачествлению.

Представители второй из перечисленных групп могут стать причиной:

остроконечных кондилом (иначе бородавок аногенитальных) – образований дольчатого строения в области половых органов, заднего прохода;

• бородавчатой эпидермоплазии – плоских папулезных бородавчатых разрастаний, которые в свою очередь могут иметь высокий и низкий онкогенный риск;
• ларингеального папилломатоза (причина – обычно вирус 11 типа) – папиллом гортани, образующихся чаще всего у детей вследствие заражения от матери в процессе родов.

Вирусы третьей группы могут приводить к развитию бородавок:

• вульгарных (2 тип) – появляющихся обычно у детей самоизлечивающихся сосочковых ороговевших разрастаний на тыльной области рук;
• плоских (3 и 5 типы) – мелких узелков на лице и кистях, самоизлечивающихся и характерных для подросткового возраста;
• подошвенных (1 тип, реже – 2-й) – образующихся на местах сдавливания обувью утолщений до 100 мм диаметром, болезненных, устраняющихся оперативным путем.

Расшифровка результатов анализов методом полимеразная цепная реакция

Расшифровкой результатов занимается врач. Самостоятельно пытаться увидеть что-либо в лабораторном бланке нет смысла, поскольку обозначения могут быть понятны только специалисту.

Количественное исследование оформляется в виде таблицы. В первом столбце указаны типы классов вируса (к примеру, А9 — вирусы с высокой степенью онкогенности), во втором — фраза «не обнаружено» или «обнаружено».

Наилучший вариант — если все классы вирусов оказываются не обнаруженными.

Если же один или несколько классов обнаружены, последняя строка, Lg, выражается в количественном показателе. Значения числа следующие:

• Lg меньше 3 — незначительное количество вирусных клеток.
• Lg 3–5 — пограничное количество, есть риск заражения.
• Lg больше 5 — критическая концентрация вируса.

Через некоторое время анализ проводят повторно, чтобы исключить ложноположительный или ложноотрицательный результаты. На основании данных исследований ставится диагноз и назначается лечение.

ДНК анализ на ВПЧ – определение вируса по фрагментам генного материала. Амплификация мишени и сигнала

При проведении ДНК-исследования возбудителей обнаруживают по фрагментам их ДНК. Это дает возможность выявлять папилломавирусную инфекцию даже при небольшой концентрации патогенных микроорганизмов. Поэтому исследование диагностирует заражение на самой ранней стадии.

Для выявления ВПЧ берутся соскобы:

• С шейки матки и проходящего в ней цервикального канала.
• Со слизистой заднего свода влагалища, расположенного внизу под шейкой матки.
• Из мочеиспускательного канала – уретры. Соскоб берется при подозрении на предраковые и онкологические заболевания мочевыделительной системы. Такой анализ на ВПЧ лучше всего сдать мужчине, но проводят его и женщинам.
• При подозрении на предрак и рак прямой кишки. Соскоб берется со слизистой кишечника.

Соскоб на ВПЧ берут с помощью зонда или цитощетки. Затем нижнюю часть приспособления вместе со взятым материалом отделяют, помещают в транспортировочный раствор и доставляют в лабораторию. В лабораторных условиях проводятся различные исследования на папилломавирус.

Наиболее часто проводятся следующие варианты ДНК-диагностики:

• Исследование на ВПЧ штаммы 16-18, чаще всего вызывающие рак. Рекомендуется в качестве скрининга.
• Комплексные исследования, выявляющие сразу несколько штаммов вируса. Исследование назначают при изменениях тканей шейки матки, наружных половых органов и аногенитальной области, которые, возможно, вызваны этими возбудителями.
• Лабораторные исследования ВПЧ низкого онкогенного риска проводятся при обнаружении бородавок и других поражений кожи, подозрительных на папилломавирусную инфекцию.

В лаборатории полученный материал промывают, убирают примеси, а затем из него выделяют ДНК возбудителей. Поскольку полученное количество генетического материала недостаточно для исследования, его объем увеличивают – aмплифицируют. Для этого проводится репликация – копирование фрагментов ДНК. Процесс проводится до тех пор, пока не удаётся получить количество материала, необходимого для лабораторного исследования.

На таком методе, называемом амплификацией мишени, основана ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция). Этот современный высокоинформативный метод выявляет разнообразные штаммы.

ДНК вируса соединяют с реактивами, вступающими с ним в реакцию. Получившиеся вещества называют гибридами. С помощью лабораторных методов определяют штаммы ВПЧ, на которые среагировали реактивы при получении гибридных соединений.

Современные реактивы представляют собой смесь веществ, вступающих в реакцию с ДНК, принадлежащих различным вирусным штаммам. Это дает возможность определить за одно исследование несколько типов ВПЧ.

Каждое из используемых веществ «подстроено» под конкретный вид папилломавируса и не реагирует на другие. Это исключает ложноположительную реакцию и позволяет достичь высокой точности.

Существует другая методика проведения ДНК-диагностики, называемая амплификацией сигнала, Digene-тестом, Digene Hybrid Capture II, двойной генной ловушкой. Для ее проведения взятые образцы смешивают с раствором, разрушающим вирус и освобождающим его ДНК. Обработанный препарат смешивается с реактивами с образованием соединений-гибридов. Этот этап – гибридный захват или гибридная ловушка, дал название методике.

ДНК диагностика

Гибриды отделяют и смешивают с реактивами, заставляющими их светиться. С помощью химических веществ и специальной аппаратуры свечение усиливают, то есть происходит амплификация сигнала. Очень точные приборы, которые могут различать световые сигналы, возникающие при обнаружении конкретного возбудителя, регистрируют их, выявляя заражение тем или иным штаммом.

С помощью обоих методов можно провести качественный анализ, выявив имеющиеся типы папилломавируса и количественный, определив их концентрацию. Для количественной оценки с помощью компьютерных программ анализируются объем ДНК вирусов и сила их свечения. Чем больше генного материала было найдено в образцах, и чем раньше прибор зарегистрировал свечение гибридов, тем выше концентрация вируса.

Особенности взятия мазка у женщин

Наиболее быстрая методика выявления ВПЧ и определения его штамма у представительниц прекрасного пола — это забор мазка из шейки матки, влагалищных стенок, цервикального канала и участка скопления патологических образований.

В гинекологии используется 2 исследования:

1. Анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция). Забор материала на цитологию и последующее исследование, позволяет выявлять изменения в клетках, которые происходят под воздействием ВПЧ. ПЦР помогает добиться наиболее точных результатов, т. к. дополнительно способен определять, насколько штамм может провоцировать онкогенез. Забор мазка осуществляется следующим образом:

• пациентка располагается на гинекологическом кресле;
• шейка обнажается при помощи одноразовых расширителей;
• специальной кистью гинеколог берет мазок со слизистой поверхности шейки;
• полученное отделяемое наносится на стекло или помещается в стерильную емкость.

2. Дайджен-тест. Высокочувствительное тестирование, позволяющее обнаружить вирусную нагрузку, определить тип штамма. Кроме того, он дает возможность выявить, идет речь о ВПЧ высокого онкогенного риска или низкого. В качестве материала для мазка берутся слизистые выделения с поверхности шейки матки.

Преимущество вышеперечисленных анализов заключается не только в определении вируса, они помогают выявлять наличие злокачественных клеток до того, как онкологическое заболевание даст о себе знать. Это повышает шансы человека на полное излечение.

Если у пациентки обнаруживаются папилломы или кондиломы, то повторную сдачу мазка рекомендуют проводить 1 раз в год.

Женщинам, решившим зачать малыша или уже беременным, сдавать мазок на папилломавирус необходимо в обязательном порядке. Его берут на любом сроке беременности. Если девушка регулярно посещает гинеколога, то это происходит при постановке на учет, в третьем триместре (с 28 по 30 неделю) и через 5–6 недель.

Изъятие материала из шейки матки не угрожает процессу вынашивания плода и не вредит будущему малышу. А раннее выявление болезни дает возможность начать терапию до того, как ребенок заразится возбудителем от матери во время движения по родовым путям.

Виды исследования на папилломавирус

Существует несколько способов определить наличие папилломавируса в организме человека, среди них:

• Цитологический мазок – отличается низкой достоверностью, оправдан только при обширном распространении инфекции.
• Кольпоскопия – применяется при осмотре женщин посредством обследования специальным прибором тканей слизистых оболочек внутренних половых органов.
• Гистология – рассмотрение отобранного биоматериала под микроскопом в лабораторных условиях, используется в дополнение к цитологии.
• Анализ крови – предназначен только для подтверждения подозрений на наличие вируса, однако не дает ответ на вопрос «Какой тип ВПЧ».
• ПРЦ – высокоточный анализ материала, отобранного с пораженного участка. Используется для установления типа штамма.
• Degine HPV – тест для определения степени распространения инфекции, чтобы правильно определить методику лечения.
• Биопсия – назначается только в случае обоснованных подозрений на развитие ракового процесса в области шейки матки или слизистых половых органов мужчин.

ПЦР исследование

Метод расшифровывается как «Полимеразная цепная реакция» и подразумевает с помощью молекулярной биологии исследовать отобранный биологический материал. Способ экспериментальный и основывается на многократном увеличении концентрации некоторых фрагментов ДНК в пробе.

При условии недостаточного количества зараженных клеток для визуальной детекции в искусственных условиях определенный участок ДНК многократно удваивается.

Следует отметить, что при отсутствии в образце нужного объекта, никакого клонирования или обработки не производится, а результат анализа – отрицательный.

Важно!
Для ПРЦ методики требуется в качестве биоматериала любая клеточная ткань пациента, что качественно выделяет методику среди других.

Преимущество анализа заключается в скорости получения результата. Благодаря отсутствию необходимости выращивания культуры требуется 4–5 часов.

Среди основных положительных качеств ПРЦ-анализа можно выделить:

• Универсальность – для проведения исследований подходит любой вид биоматериала.
• Скорость получения результатов – в зависимости от клиники и используемого там оборудования время получения результат не превышает нескольких часов.
• Чувствительность – для обработки достаточно всего 10–100 биологических клеток в одном образце.
• Даже вирусы, которые находятся в организме в латентной форме, подлежат обнаружении, что недоступно для многих других типов анализов.

С помощью метода ПРЦ определяются следующие заболевания:

• Кандидоз.
• Туберкулез.
• Боррелиоз, клещевой энцефалит.
• Хеликобактерная инфекция.Листериоз.
• Вирусы онкогенной группы.
• Герпетическая инфекция.
• Уреаплазмоз, трихомониаз, гарднееллез – инфекции, которые передаются через половые контакты.
• Гепатиты вирусные типа A, B, C, G.
• Цитомегаловирусная инфекция.
• ВИЧ.
• Мононуклеоз инфекционный.

Стоит отметить, что методика ПЦР является новым методом, поэтому пока стоимость такого анализа высокая.

ИФА для определения вируса

Название методики расшифровывается как Иммуноферментный анализ (ИФА). С его помощью в крови обнаруживаются определенные антитела, выработка которых производится иммунной системой в ответ на попавшую в организм инфекцию.

При ранних стадиях заболевания наибольшей активностью отличаются М-глобулины. Именно по ним можно установить, что вирус человек «подхватил» недавно и только начинается инкубационный период или первое развитие инфекции.

Важно!
Среди недостатков отсутствие возможности определения типа папилломавирусной инфекции, поскольку анализируются только антитела, а также высокая цена процедуры.

На более позднем сроке иммунной системой вырабатывается другое антитело – G-глобулин, который включается в борьбу на более поздних стадиях. Именно по количеству и типу ферментов иммунной системы определяется рецидив или первичное заражение.

Данные результатов бывают количественными и качественными, поэтому ВПЧ определяется со 100% точностью, а также есть возможность наблюдать за развитием заболевания в динамике. Среди преимуществ данной методики высокая точность и чувствительность, а также скорость получения результата.

Существующие виды диагностики

При обнаружении на теле признаков деятельности ВПЧ доктор может направить на обследование с целью выявления факта заражения вирусом и определения его конкретного типа. Кроме того, рекомендуется сдать анализ на папилломавирусную инфекцию женщинам, планирующим беременность, а также в случае наличия у них проблем с вынашиванием плода. При этом диагностику проводят обоим партнёрам, поскольку если есть инфекция у одного из них, можно с очень большой степенью вероятности говорить о болезни и у второго.

В клинических лабораториях используют несколько методов для диагностики ВПЧ, определения его типа и оценки нанесённого ущерба организму. Из них стоит выделить:

• кольпоскопическое исследование;
• цитологическую диагностику;
• гистологическое обследование;
• ПЦР-тест.

Метод кольпоскопии

Этот вид исследования назначают женщинам с подозрением на наличие кондилом на шейке матки. Во время его проведения врач осматривает слизистые оболочки в области влагалища с помощью специального микроскопа. Благодаря многократному увеличению этого прибора, можно заметить мельчайшие образования. При расширенном исследовании задействуются также особые реактивы, которыми обрабатываются слизистые ткани. Благодаря им, можно на клеточном уровне выявить патологические изменения.

Цитологическое исследование

Чтобы провести эту процедуру для анализа на ВПЧ, у женщин берут мазок, содержащий эпителиальные клетки. Образец рассматривают под микроскопом. При этом основной целью является возможное выявление видоизменённых клеток, указывающих на наличие вирусной инфекции.

Такой метод довольно прост и не требует больших финансовых затрат. Однако главным его недостатком является высокий риск получения ложноотрицательных результатов. Заключение выдают спустя 5−7 дней. При этом на бланке указывают цифровой код: 1 свидетельствует об отсутствии поражённых клеток, 2 — о наличии изменённых клеток вследствие воспалительного процесса, 3 — сомнительный результат, а числа 4 и 5 говорят о наличии поражения вирусом.

Гистологический анализ

Это исследование назначают в качестве дополнительного метода после проведения кольпоскопии. Он ещё называется биопсией. Во время процедуры специалист берёт образец исследуемой ткани и передаёт его на изучение в лабораторию, где его тщательно рассматривают под микроскопом для оценки состояния поражённых клеток.

Применение гистологического исследования позволяет определить характер нароста, квалифицировав его как кондилому или же как опухоль. Результат обследования обычно выдают спустя три дня. В большинстве случаев после этого пациентку направляют на ПЦР-анализ для выявления конкретного штамма вируса.

Проведение ПЦР-теста

Исследование полимеразной цепной реакции (ПЦР) является одним из наиболее информативных методов диагностики, позволяющих выявить ДНК вируса даже при очень малой его концентрации в крови. Точность этого анализа на выявление ВПЧ составляет примерно 100%. Но на правильность результата может повлиять корректность техники проведения теста, в связи с чем стоит очень тщательно выбирать лабораторию, в которой строго соблюдаются все стандарты этого исследования.

Благодаря проведению ПЦР, можно определить точное количество вируса, находящегося в биоматериале. Если инфекцию не обнаружат, то это будет отмечено как отрицательный результат. В случае наличия ВПЧ, в лаборатории указывают его концентрацию на каждые 100 тыс. клеток. Если количество геномных эквивалентов (Lg):

• меньше 3 — свидетельствует о крайне малой концентрации вируса в биоматериале;
• от 3 до 5 — говорит о наличии клинически значимого количества инфекции;
• более 5 — указывает на высокую вирусную нагрузку.