Правила взятия мазка на коклюш

Категории

АллергологАнестезиолог-реаниматологВенерологГастроэнтерологГематологГенетикГинекологГомеопатДерматологДетский гинекологДетский дерматологДетский кардиологДетский лорДетский неврологДетский офтальмологДетский пульмонологДетский ревматологДетский урологДетский хирургДетский эндокринологДиетологИммунологИнфекционистКардиологКлинический психологКосметологЛогопедЛорМаммологМедицинский юристНаркологНевропатологНейрохирургНефрологНутрициологОнкологОнкоурологОртопед-травматологОфтальмологПаразитологПедиатрПластический хирургПроктологПсихиатрПсихологПульмонологРевматологРентгенологРепродуктологСексолог-АндрологСтоматологТерапевтТрихологУрологФармацевтФитотерапевтФлебологФтизиатрХирургЭндокринолог

Дифференциальная диагностика

Заподозрить коклюш следует при наличии у больного следующих симптомов:

• кашель неясного происхождения продолжительностью более 2 недель;
• приступы тяжелого кашля;
• симптомы ОРВИ после контакта с больным.

Диагностика коклюша начинается с дифференциации его с острыми респираторными болезнями, гриппом, корью, обострением бронхиальной астмы, бронхоаденитом и попаданием в дыхательные пути инородного тела.

Дифференциальный диагноз основывается на следующих чертах похожих заболеваний:

1. Грипп начинается остро, наблюдаются симптомы интоксикации (лихорадка, нейротоксикоз), которые преобладают над симптомами поражения верхних дыхательных путей.
2. Корь отличается присутствием насморка, чихания, слезотечения, отечности слизистых оболочек наряду с кашлем, чего также не бывает при коклюше.
3. ОРВИ, как и грипп, сопровождаются симптомами интоксикации и поражения слизистых. Разные вирусные инфекции могут характеризоваться воспалением глотки, признаками воспаления бронхов, отеком слизистых, конъюнктивитом.
4. Туберкулез характеризуется схожими приступами сильного кашля. Для дифференциации болезней требуются рентгенография и реакция Манту.

Таким образом, характерная клиническая картина представляет собой длительные приступы кашля с репризами и лимфоцитоз; признаков интоксикации и поражения слизистых оболочек при этом нет, что позволяет отличить болезнь от вирусных инфекций — в этом и заключается дифференциальная диагностика коклюша.

При подозрении на коклюш для подтверждения диагноза используются различные лабораторные методы исследования. Основными являются ПЦР и бактериологический анализ на ранних сроках, серологическая диагностика — на поздних.

Общие лабораторные исследования

Общий анализ крови на коклюш позволяет определить состав крови и обнаружить наличие лейкоцитоза. Как и в случае других бактериальных заболеваний, при коклюше количество лейкоцитов на единицу крови возрастает, что свидетельствует об иммунном ответе на поражение возбудителем. Как правило, выделяют концентрацию лейкоцитов, равную 2–7*109/л.

Следует учитывать, что содержание лейкоцитов разнится в зависимости от того, насколько тяжело протекает заболевание; если больной ранее был привит, но из-за ослабления иммунитета все равно заболел, анализ крови ничего не покажет.

Другие общие характеристики крови, как правило, не меняются; сдвиги наблюдаются только в катаральной стадии болезни. Скорость оседания эритроцитов может быть сниженной.

В большинстве случаев гематологическая лабораторная диагностика коклюша ограничивается общим анализом крови; для выявления возможных осложнений также может проводиться биохимическое исследование, дополняемое общим анализом мочи. Если болезнь протекает благоприятно, все показатели будут в норме.

Мокрота при нормальном течении болезни является слизистой; если болезнь осложнена пневмонией, к слизи добавляется гной.

Для уточнения диагноза широко применяется микробиологическая диагностика коклюша, к которой относится бактериологическое исследование (выделение культуры возбудителя) и серологическое обследование (анализ на антитела).

Дополнительно может использоваться генетическое исследование — выделение ДНК возбудителя в мокроте при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР). На поздних стадиях болезни ПЦР неэффективен.

Диагностирование заболевания

В настоящее время диагностика коклюша и паракоклюша представляет собой оценку всей картины заболевания и имеющихся симптомов

Особенное внимание уделяется исследованию слизи из носа и взятию мазков из носоглотки и ротоглотки. Также не остаются без внимания анализы крови, любых изменения в них должны быть выявлены врачом

Так как коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным болезням, диагностируются они по обнаружению бактерии (коклюшной палочки) в исследуемом образце крови. Но наиболее часто признаки заболевания выявляются во время исследования мазков, так как в кровь бактерия проникает довольно редко.

Анализ крови на коклюш и паракоклюш

Для того чтобы точно установить наличие болезни, пациенту необходимо сдать анализ крови на коклюш и паракоклюш.

1. Для начала нужно сдать кровь на проведение общего анализа. На этом этапе будет определено количество лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина. Коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным заболеваниям, поэтому при наличии коклюшной палочки будет замечено увеличение количества лейкоцитов, а также количества нейтрофилов, так как они отвечают за антибактериальный иммунитет. Остальные компоненты крови практически не меняются.
2. Наиболее эффективным анализом на обнаружение коклюшной палочки является иммуноферментный анализ. Для его проведения у пациента с подозрением на коклюш или паракоклюш будет взят образец крови из вены. Данный анализ представляет собой выявление антител иммуноглобулинового белка к возбудителю заболевания. Его можно осуществлять не ранее, чем через три недели после начала болезни. Поэтому его основной задачей является скорее подтверждение диагноза, чем выявление заболевания.
3. Также существует серологический метод анализа крови на выявление заболевания. Он основывается на определении количества антител к коклюшу и паракоклюшу, которые показывают наличие в организме инфекционного процесса.
4. К различным видам анализа крови для выявления коклюшной бактерии относится и реакция агглютинации. С помощью реакции агглютинации производится обнаружение антител к антигенам возбудителя, который находится на начальной стадии течения болезни. К недостаткам такой процедуры можно отнести то, что на данный момент до сих пор не существует единого метода проведения реакции агглютинации. Поэтому значение полученных результатов можно воспринимать и расшифровывать по-разному.

Расшифровка результатов анализов

При выявлении коклюшной палочки в результате изучения анализа крови, можно говорить о том, что коклюшная палочка перешла на новый уровень развития. То есть существует не как локальное заболевание, а развивается на системном уровне. В таком случае, есть вероятность обширного размножения микроорганизма, так как кровь – отличная среда для успешного развития практически любого микроорганизма. Если рассматривать конкретно коклюшную палочку, то для этой бактерии единственной благоприятной средой для осуществления ее роста является кровь.

В случае распространения бактерии по организму может развиться синдром диссеминации. Его лечение довольно трудоемкий процесс и заканчивается не всегда хорошим результатом.

Если во время изучения результатов анализа крови было выявлено наличие в организме коклюшной палочки, то пациента необходимо в срочном порядке госпитализировать в реанимационное отделение для оказания медицинской помощи и назначения необходимого лечения. Это необходимо сделать как можно быстрее, так как существует довольно серьезная угроза жизни пациента.

Бывают случаи, когда результаты анализов оказываются ложноположительными. Такое явление часто встречается в результате персистирования в организме пациента антигенов коклюшной палочки (после уже вылеченного коклюша или паракоклюша).

В данной ситуации единственным методом диагностирования заболевания является ПЦР для выявления типа генетического материала, который мог спровоцировать организм на такую реакцию.

В каких случаях назначают лабораторные исследования

Выделяют отдельную прослойку пациентов, которым следует пройти лабораторное обследование на коклюш:

• люди, проходящие как контактные с заболевшим человеком (в рабочей обстановке, в любом детском коллективе, в домашних условиях);
• при продолжительном кашле у ребенка более 5-7 дней, особенно с выраженными приступами;
• нехарактерный для ОРВИ кашель у взрослых.

Недооценивается тот факт, что обычно взрослый человек переносит болезнь в лёгкой форме, у него могут быть небольшие проявления респираторного заболевания, а кашель при этом не будет подходить под описание коклюша. Инкубационный период составляет от двух дней до трёх недель. При этом среди взрослого населения это заболевание распространено. Человек, долго не обращаясь за помощью, становится опасным для маленьких, ещё не привитых детей, которые заражаются от него.

Почему важно вовремя диагностировать заболевание

Сложность диагностики коклюша заключается в том, что начальную симптоматику можно принять за проявления обычной простуды или гриппа. Начинается коклюш, как ОРВИ, и дает о себе знать сухим кашлем в ночное время. Практически отсутствует повышение температуры тела, человек чувствует себя комфортно.

Со временем происходит утяжеление состояния, пациент кашляет приступами, в том числе и днём, после чего врачи принимают решение провести лабораторную диагностику. Такая симптоматика может сохраняться в течение двух недель.

В дальнейшем самочувствие больного ухудшается, а кашель становится спастическим. Человек ощущает нехватку воздуха, с трудом может совершить вдох, из-за этого напрягается, его лицо краснеет, иногда приобретает синюшный оттенок. Такие мучительные приступы кашля приводят к рвоте и выделению густой, стекловидной мокроты.

При отравлении токсинами страдает дыхательный центр. В кровотоке резко уменьшается содержание кислорода и увеличивается углекислый газ. Наступает кислородное голодание – гипоксия. Поражается головной мозг, в анализе крови можно увидеть повышение уровней лимфоцитов и лейкоцитов.

Особенности диагностики коклюша у детей

Часто встречаются случаи, когда показатели анализа крови у детей существенно отличаются от стандартных проявлений коклюша и паракоклюша.

Примерно на 2-4 неделе развития болезни можно наблюдать развитие иммунодефицита. Также существует большая вероятность присоединения оппортунистической инфекции. Поэтому диагностирование коклюша на ранних стадиях может быть затруднено, так как более сильно будут выделяться признаки какого-либо другого заболевания.

К тому же параллельное развитие какой-то другой инфекции может спровоцировать осложнения, из-за чего лечение коклюша и паракоклюша будет произведено не вовремя.

У некоторых пациентов могут быть замечены специфичные случаи. Даже после успешного лечения заболевания и избавления от всех симптомов, может оставаться тот же результат анализа крови.

Даже в случае перенесенного заболевания, в случае его правильной диагностики и лечении, результаты анализа крови должны прийти в норму. Нормальным считается состояние, когда лейкоцитоз выступает только как временное явление, которое не длится более чем 1,5 недели после полного излечения заболевания. В дальнейшем в крови образуются иммуноглобулины класса G. Они отвечают за наличие постоянного иммунитета против коклюша и паракоклюша. Обнаружение таких антител происходит методом серологического анализа.

Хотя коклюш и паракоклюш относятся к ряду детских заболеваний, каждому человеку необходимо знать о том, как именно протекает данная болезнь, какие симптомы имеет и какие анализы нужно сдавать для выявления опасной бактерии.

Нет гарантии того, что даже перенесший заболевание и привитый человек не сможет во второй раз заболеть коклюшем или паракоклюшем

Поэтому очень важно обладать необходимыми знаниями об этой болезни

Этиология болезни и возбудитель коклюша

Впервые возбудитель болезни был верифицирован в 1906 году бельгийским бактериологом Ж. Борде и французским врачом О. Жангу. В те годы это заболевание считалось одним из самых опасных, от него ежегодно умирали тысячи людей, преимущественно детей. Но и сейчас коклюш может протекать тяжело и вызывать необратимые осложнения. Бактерия мутирует, что подтверждают научные исследования, проводившиеся последние два десятилетия. Если в 90-е прошлого века частота тяжёлых форм болезни наблюдалась в 18,6 % случаев заражения, то в новом тысячелетии показатель достигает 43,2 %.

Опасная болезнь вызывается бактерией Bordetella pertussis. Проникая на слизистую оболочку дыхательных путей, она внедряется в эпителиальные клетки. Слизистая органов дыхания выстлана так называемыми ресничками. В нормальном состоянии они выполняют очистительную функцию, при скоплении мокроты выводя её.

При попадании бактерии реснички повреждаются, утрачивая свои способности. Без очищения в бронхах начинается активное размножение Bordetella pertussis. Из-за выделения бактерией токсичных продуктов происходит спазм мельчайших бронхов. Дыхательные рецепторы посылают сигнал в центр кашля в мозге. Раздражение кашлевого центра формирует в нём очаг устойчивого возбуждения. Это раз за разом стимулирует приступы кашля, не поддающиеся контролю. Повреждение дыхательного центра в мозге вызывает нарушение функции дыхания, в крови снижает концентрация кислорода, а углекислого газа, напротив, возрастает. В итоге возникает гипоксия – страдают сосуды, головной мозг (развивается энцефалопатия), возрастает количество лейкоцитов и лимфоцитов.

Бактерия Bordetella parapertussis вызывает смежное заболевание – паракоклюш. Симптомы схожи с коклюшем. В анализах, сдаваемых на коклюш и паракоклюш, есть одно основное различие – при паракоклюше лейкоциты крови остаются на нормальном уровне.

Бактериологическая диагностика

Бакпосев помогает определить заболевание у ребенка или взрослого в течение короткого периода после заражения — колонии возбудителя в питательной среде и температуре 36°С начинают появляться уже на 3–5 сутки.

Собирается материал с задней стенки глотки, через 2–3 ч после приема пищи. Применяется три метода сбора слизи:

• «кашлевые пластинки» — больной кашляет на чашку Петри с питательным субстратом, на котором бациллы, попавшие из капель слизи, размножаются в течение 2–4 дней;
• мазок из зева при помощи тампонов — ватные тампоны, смоченные в альгинате кальция, вводят через нос в носоглотку и оставляют на 10 с, после чего помещают в питательную среду;
• сбор шприцем через тонкий назальный катетер.

Для бактериологического исследования на коклюш важен правильный выбор питательной среды, так как бацилла Bordetella pertussis размножается только в элективных средах. Вариантов три:

1. Казеиново-угольный агар. Среда готовится из сухого субстрата, 5 г которого растворяется в 100 мл воды, после чего добавляется цефалексин в концентрации 40 мг/л. Смесь стерилизуется в автоклаве 30 мин при 110°C. Колонии бактерий образуются через 3–4 дня.

2. Среда Борде-Жангу, используемая, если из-за тяжелого течения болезни анализ на коклюш требует сбора материала непосредственно у постели пациента. Готовится субстрат из 0,5 кг картофеля, 1 л воды и 40 мл глицерина.

   Смесь варится до размягчения картофеля, после чего в нее доливается вода до исходной концентрации. Смесь фильтруется, в экстракт добавляется раствор комплекса солей в количестве 1,5 л на 500 мл субстрата. Далее добавляется 3% агар-агара, смесь кипятится и доводится до достижения pH = 7,1–7,2. После фильтрации и стерилизации субстрат может долго храниться.

3. Молочно-кровяной агар Осиповой. Смешиваются 5% МПА, 1% хлорида натрия и такое же количество теплого обезжиренного молока. Смесь стерилизуется в автоклаве, фильтруется, после чего к ней добавляется 1/5 часть дефибринированной животной крови. Для исключения посторонней флоры добавляется 0,25–0,5 ед. пенициллина на 1 мл среды.

Следует учитывать, что колонии бактерий медленно развиваются — окончательный результат исследования может быть получен лишь на 5–7 сутки после посева. Этот анализ на коклюш эффективен только на ранних сроках заболевания. Из-за особенностей возбудителя окончательный диагноз на основании бактериологической диагностики ставится лишь в 15–25% случаев (данные по г. Санкт-Петербург).

Отличительные признаки колоний

На разных субстратах колонии возбудителя коклюша проявляются по-разному; важно знать их основные признаки, чтобы дифференцировать со схожими колониями бактерий паракоклюша

Колонии коклюша нужно также отличать от бактерий септического бронхита. Последние, в отличие от кокков, растут на субстрате без изменения цвета среды и имеют уреазу.

Микроскопическое исследование

Методы диагностики коклюша иногда включают микроскопическое исследование в качестве вспомогательного. Взрослые бактерии коклюша не имеют отличительных морфологических особенностей, но на ранних стадиях развития их можно определить.

Представляют собой палочки без спор с нежными капсулами. На II и III фазах бактерии превращаются в полиморфные или коккоидные формы жизни.

Анализ на коклюш с применением методики флюоресцирующих антител

Низкий удельный вес бактериологического подтверждения заболевания стал толчком к разработке других, более чувствительных методов идентификации возбудителя коклюша. В 60-е годы появился метод определения Bordetella pertussis с помощью флюоресцирующих антител. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп. К проведению данного теста допускается только высококвалифицированный персонал, используются качественные реагенты. В противном случае возможно большое количество ложноположительных результатов. Данная методика в практической медицине используется редко.

Рис. 7. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп.