Актуальные предложения

ПЦР диагностика. Использование метода полимеразно-цепной реакции

ДНК ПЦР диагностика является одним из самых современных методов получения точных данных при проведении медицинских анализов.

Принцип полимеразно-цепной реакции предложил Кэри Мюллис в 1983 году. Это открытие стало одним из самых значимых для молекулярной биологии. В 1993 году Мюллис был удостоен Нобелевской премии в области химии.

К этому времени уже были известны уникальные свойства одного из ферментов нуклеиновой кислоты — taq-полимеразы. Это вещество необходимо для исследования методом полимеразно-цепной реакции. Полимераза обладает высокой термостойкостью и термостабильностью. При нагреве до температуры кипения активность вещества не снижается.

Суть метода объясняется довольно просто. Существует множество заболеваний, о наличии которых человек может не подозревать долгое время. Традиционные анализы не всегда способны предоставить полную картину для вынесения корректного диагноза и назначения соответствующего лечения. Используя возможности ПЦР в медицинской диагностике, в организме можно найти микроорганизмы в минимальных концентрациях.

Полимеразно-цепная реакция — это воссоздание естественного размножения нуклеиновой кислоты. В течение небольшого времени, используя всего один фрагмент вещества, можно выделить 50 млрд. клонированных молекул. То есть врачи получают неиссякаемый источник для изучения.

ПЦР включает несколько основополагающих процедур:

  • забор и подготовка пробы;
  • полимеразно-цепная реакция;
  • анализ материала, выделяемого в ходе исследования.

Преимущества использования ПЦР

Полимеразно-цепная реакция не является панацеей в медицине или других областях науки, где метод также используется. Но сложно спорить с тем, что данная разработка Кэри Мюллиса открыла новые возможности в молекулярной биологии, судебной медицине, археологии, генетике и определении инфекционных заболеваний.

Исследование с использованием полимеразно-цепной реакции занимает несколько часов. За это время специалисты уже установят причину заболевания с высокой точностью. Пациент обычно получает результаты в течение 1-2 суток. Возможно получение результатов в тот же день.

Процесс, несмотря на новизну, уже имеет собственные стандарты и нормы, в соответствии с которыми выполняется. Таким образом, даже процесс выделения нуклеиновой кислоты строго определен. Это сводит к минимуму вероятность ошибки.

Высокая чувствительность позволяет определять возбудителя заболевания, использовав всего 1000 бактерий одного вида в 1 мл материала. Не уступают и показатели специфичности анализа: 100% определение для любых вирусных, микоплазменных, уреаплазменных, хламидийных и других микроорганизмов.

Изучение методом ПЦР позволяет использовать для анализа различный биологический материал:

  • кровь, плазма;
  • биологические жидкости;
  • моча;
  • мокрота;
  • биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки;
  • биологические выделения;
  • соскоб эпителиальных клеток.

Любой анализ крови для определения тех или иных возбудителей заболеваний требует создания особенных условий культивирования организмов. В случае использования метода полимеразно-цепной реакции это вовсе необязательно делать. За один раз можно определить наличие нескольких совершенно разнородных бактерий. А для некоторых инфекций использование ПЦР в диагностике является единственным способом определения микроорганизма, например, Mycoplasma genitallium (до недавнего времени микробиологи считали, что этот организм имеет самый малый геном из известных).

Вещества, которые используются для анализа, не требуют создания специальных условий хранения или транспортировки.

ПЦР диагностика инфекций

К инфекциям, передающимся половым путем (ИППП), относят бактерии (возбудители сифилиса, гонореи, хламидии, микоплазмы, уреаплазмы), вирусы (ВИЧ, генитальный герпес, папилломавирус), простейшие паразиты (трихомонада), грибы (возбудитель кандидоза).

Почти все перечисленные ИППП имеют похожие симптомы и течение. Очень важно как можно быстрее установить наличие этих возбудителей в организме. Часто они становятся причиной серьезных заболеваний.

При ПЦР диагностике инфекций необходимо:

  • установить, какой возбудитель стал причиной воспаления;
  • определить количество инфекционных микроорганизмов. В некоторых случаях это особенно важно. Например, условно-патогенные инфекции активизируются при повышении концентрации в организме;
  • провести контроль за тем, как проходит инфекционный процесс. Требуется дать оценку эффективности лечения. Но важно учитывать, что полимеразно-цепная реакция находит бактерии даже в малом количестве. Обычно анализ результатов лечения проводится спустя 2-3 недели после окончания курса.

ПЦР диагностика гепатитов

Гепатиты — это группа воспалительных заболеваний печени. Гепатиты возникают по разным причинам (вирусные, токсичные гепатиты), имеют острую и хроническую форму. Соответственно, в каждом случае назначается разное лечение. К сегодняшнему дню известно 5 вирусов, вызывающих гепатит (А, В, С, D, Е).

Каждый из них имеет свои этиологические особенности. В связи с этим бывает сложно установить вирус, вызвавший заболевание. Диагностика по методу пцр в этом случае является одним из лучших методов исследования.

Преимущества использования ПЦР в диагностике вирусных гепатитов:

  • метод позволяет быстро обнаружить возбудителей в очагах инфекции. РНК вируса гепатита А, В, С появляются гораздо раньше, чем антитела. Например, в случае гепатита В разница составляет в среднем 20 дней, гепатита С — 2-3 месяца;
  • быстрое установление хронической формы. Определяется по вирусной нагрузке;
  • выявление YMDD мутации. В ходе антивирусной монотерапии может появиться устойчивость к используемому препарату. Мониторинг лечения помогает установить наличие измененного штамма на ранних сроках;
  • отдельно стоит пояснить плюсы использования метода в исследовании гепатита С. Очень часто острая форма заболевания переходит в хроническую. Гепатит С практически не имеет явных симптомов. Его лечение — это сложный и дорогостоящий процесс. Использование полимеразно-цепной реакции позволяет приступать к терапии как можно быстрее;
  • своевременная оценка эффективности лечения. Например, курс терапии гепатита С составляет 48 недель. Уже на 12-ой врач может оценить его эффективность.

ПЦР диагностика ВИЧ-заболеваний

ПЦР диагностика в случае определения антител ВИЧ не дает стопроцентный результат. Эффективность метода при определении провирусной нуклеиновой кислоты ВИЧ колеблется в диапазоне 96-99%. Поэтому для получения наиболее точных данных полимеразно-цепную реакцию совмещают с другими видами исследования. На сегодняшний день таким способом является иммуноферментный анализ (ИФА) с последующим подтверждением методом иммуноблоттинга (ИБ). В этом случае эффективность достигает 99% и больше.

При определении антител ВИЧ пока существуют некоторые сложности. В основном они связаны с периодом серологического «окна», наличием антител, похожих на антитела ВИЧ. Отдельного внимания заслуживает использование метода при определении вируса у детей, родившихся от инфицированных матерей. На первом году жизни в крови ребенка обязательно есть антитела к ВИЧ. Невозможно установить, чьи они — материнские или собственные. Если ребенок здоров, к 6-9 месяцам антитела уничтожаются его иммунной системой. В редких случаях срок может достигать 18 месяцев, но не более.

Анализ может проводиться в двух видах:

  • выявление нуклеиновой кислоты провируса ВИЧ в мононуклеарных клетках периферической крови;
  • выявление рибонуклеиновой (РНК) ВИЧ в биологических жидкостях.

Исследования в лаборатории «ЛАГИС»

АО «ЛАГИС» основано в в 1995 году в городе Москве. Это одна из первых лабораторий, которая начала использовать в медицине исследования с использованием полимеразно-цепной реакции.

«ЛАГИС» применяет собственные разработки в создании диагностических тест-систем. К сегодняшнему дню в лаборатории прошли испытания более 40 тест-систем (ПЦР диагностика инфекций). Спектр научных исследований лаборатории велик. Изучаются и внедряются в медицинские учреждения новые тест-системы для обнаружения вирусных, бактериальных инфекций, генов устойчивости к антибиотикам, генетических нарушений.

Тест-системы имеют регистрационные удостоверения МЗ РФ, рекомендованы к применению в медицине приказами МЗ РФ. Иммунохимические работы проводятся на хемилюминесцентной автоматической системе IMMULITE 2000. Надежность исследований подтверждается Федеральной Службой Внешней Оценки Качества.

В лаборатории работают кабинет акушера-гинеколога для взятия мазков и соскобов, процедурный кабинет для забора крови.

В АО «ЛАГИС» проводятся следующие исследования:

  • выявление нуклеиновой кислоты методом полимеразно-цепной реакции: возбудителей заболеваний, передаваемых половым путем (ЗППП), анаэробных бактерий, простейших, грибов, а также возбудителей бронхолегочных, оппортунистических инфекций;
  • молекулярно-генетические исследования методом полимеразно-цепной реакции: установление генетических причин привычного невынашивания беременности или мужского бесплодия, риска развития венозных тромбозов, генетических факторов развития гиперандрогенных состояний, полиморфизмов генов, кодирующих ферменты метаболизма половых гормонов;
  • иммунохимические исследования крови: онкомаркеры, гормоны щитовидной железы, репродуктивной сферы, гипофизарно-надпочечной системы, аутоантитела, факторы роста, исследования поджелудочной железы, показатели метаболизма костной ткани, инфекционные маркеры, пренатальный скрининг;
  • исследования вирусов гепатитов методом полимеразно-цепной реакции и ИФА;
  • общеклинические исследования;
  • исследования системы гемостаза;
  • биохимические исследования крови и мочи;
  • иммунологические исследования: определение иммунного статуса, клеточного, гуморального, врожденного иммунитетов, HLА-типирование;
  • бактериологические исследования;
  • микроскопические исследования;
  • цитологические исследования;
  • химико-токсикологические исследования.

Пациенты лаборатории «ЛАГИС» могут получить бесплатную консультацию врача. Соблюдение простых правил увеличит достоверность результата. В зависимости от целей исследования используемого биологического материала, нужно выполнить ряд определенных действий. Каких — уточните у специалиста лаборатории.

Полимеразная цепная реакция является эффективным способом вынесения точного диагноза в кратчайшие сроки. Возможности метода позволяют установить наличие бессимптомных заболеваний. А значит, сразу же приступить к их лечению и предотвратить появление осложнений.

Если вам требуется консультация специалистов лаборатории «ЛАГИС», звоните по телефону: +7(499) 320-61-66.

Телефоны регистратуры: +7(499) 324-27-38, +7(499) 612-77-21, +7(499) 612-78-10.