Актуальные предложения
Специалистам » Стратегия лабораторной диагностики различных инфекций

Стратегия лабораторной диагностики различных инфекций

ИФА исследование крови

  1. Дисбактериоз влагалища
  2. Урогенитальные инфекции, вызванные микоплазмами (уреаплазмами)
  3. Герпесвирусные инфекции (ВПГ 1,2, ЦМВ, ВЭБ)
  4. Урогенитальный хламидиоз
  5. Листериоз
  6. Токсоплазмоз
  7. Краснуха



1. МИКРОБИОЦЕНОЗ ВЛАГАЛИЩА. БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ВАГИНОЗ (БВ)

Новый подход к лабораторной диагностике дисбактериоза влагалища

Микробиоценоз – это устойчивое сообщество микроорганизмов в определенной среде обитания. Факт существования микробиоценоза во влагалище, как и в кишечнике, установлен довольно давно. Микробиоценоз влагалища занимает экологическую нишу, включающую в себя плоский эпителий влагалища, цилиндрический эпителий шейки матки и вагинальный секрет.  
Микрофлора влагалища здоровой женщины составляет устойчивый микробиоценоз и характеризуется большим разнообразием видов бактерий. В нормальный микробиоценоз влагалища входят как нормофлора, так и условно-патогенные бактерии. Важнейшую роль в устойчивости микробиоценоза влагалища играют лактобактерии и гормоны эстрогены, необходимые для роста лактобактерий. Нормальный микробиоценоз влагалища устойчив и защищает влагалище и всю мочеполовую систему от развития инфекций. Здоровье женщины во многом зависит от состояния микробиоценоза влагалища.
При самых разнообразных неблагоприятных внешних воздействиях, в экстремальных условиях, стрессовых ситуациях, в случаях снижения иммунного статуса, при гормональных нарушениях, возникновении гинекологических заболеваний как инфекционной, так и неинфекционной этиологии, в генитальном тракте могут происходить качественные и количественные изменения микрофлоры.
Нарушение микробиоценоза влагалища, уменьшение количества бактерий, принадлежащих к нормальной микрофлоре женского полового тракта, приводит к выраженному снижению колонизационной резистентности влагалища и местного иммунитета. В результате этого происходит избыточное размножение условно-патогенных микроорганизмов экзогенного и эндогенного происхождения, что обуславливает формирование патологических синдромов у женщин. На фоне возникшего дисбактериоза и снижения иммунитета экзогенные патогенные микроорганизмы начинают активно размножаться и вызывают заболевания. 
Основу нормофлоры влагалища составляют лактобактерии. Известно, что у здоровых женщин лактобактерии доминируют в 96% случаев в концентрациии 107-109 КОЕ/мл исследуемого материала. 
При развитии БВ (бактериального вагиноза) происходит резкое снижение уровня лактобактерий. Дефицит лактобактерий является первичным проявлением комплекса патологических сдвигов, предшествующих БВ. Далее может происходить активное размножение условно-патогенных бактерий. Так, например, гарднереллы колонизируют влагалище у 50% здоровых женщин в количестве 105 и менее КОЕ/мл исследуемого материала. А при БВ гарднереллы обнаруживаются в 90% случаев и становятся доминирующими над лактобактериями в количестве, превышающем 107 КОЕ/мл исследуемого материала. Размножение гарднерелл считается важным фактором, ответственным за возникновение и поддержание БВ.
Условно-патогенные анаэробные бактерии, если их концентрация во влагалище не превышает 103-4 кл/мл, могут входить в состав нормофлоры. Однако при развитии дисбактериозов чрезмерное их размножение приводит к возникновению БВ и других патологических состояний. 
В настоящее время к таким бактериям относят кроме «традиционной» G. vaginalis анаэробные бактерии родов Prevotella, Bacteroides, Mobiluncus, Fusobacterium, а также Atopobium vaginae и др.
Частота возникновения патологических состояний, связанных с развитием вагинальных дисбактериозов (бактериальный вагиноз, кандидозные вагиниты, атрофические вагиниты) не имеет тенденции к снижению.
Пациентки с БВ входят в группу повышенного риска по развитию воспалительных заболеваний тазовых органов, преждевременного прерывания беременности, несвоевременного излития околоплодных вод, возникновению хорионамнионита, послеродового и послеоперационного эндометрита и др.

Краткие сведения об анаэробных бактериях актуальных для диагностики дисбактериозов влагалища

Mobiluncus sp.
Род Mobiluncus относится к семейству Actinomycetaceae. Грамм-вариабельные подвижные палочки. 
Бактерии этого рода могут обнаруживаться у женщин с диагнозами БВ, острый эндометрит, острый сальпингоофорит. В некоторых работах показано, что с развитием БВ связан только вид M. curtisii. Бактерии рода Mobiluncus выделяются только у 5 % здоровых женщин. 
Обнаружение этих бактерий - важный критерий для постановки диагноза дисбактериоза влагалища.
У мужчин Mobiluncus могут вызывать острый уретрит и острый простатит. В случае длительного нелеченного заболевания возможно развитие серьёзного осложнения в виде эпидидимита или орхоэпидидимита, что может вызывать вторичное бесплодие.

Bacteroides sp.
Bacteroides - грамотрицательные анаэробные палочковидные бактерии, не образуют спор. Относятся к семейству Bacteroidaceae. Могут быть представлены в составе нормальной флоры ЖКТ, мочеполовой и дыхательной системы. У здоровых женщин выделяются во влагалище разные виды с частотой от 9% до 36%. Bacteroides играют роль в развитии БВ, вызывают воспалительные заболевания тазовых органов, пневмонии, инфекции ЖКТ.

Prevotella sp.
В начале 90 годов из рода Bacteroides была выделена в отдельный род Prevotella. Представители Prevotella - грамотрицательные анаэробные, неспорообразующие, неподвижные палочковидные бактерии. Могут быть представлены в составе нормальной флоры ЖКТ, мочеполовой и дыхательной системы. В норме частота выявляемости бактерий этого рода во влагалище может достигать 60% случаев. Prevotella играет роль в развитии у женщин БВ, вызывает такие инфекционные процессы как абсцессы, периодонтиты, бактериемии, пневмонии, остеомиелиты.  

Fusobacterium sp.
Род Fusobacterium относится к семейству Fusobacteriaceae. Это грамотрицательные анаэробные палочковидные бактерии, являются представителями нормальной флоры ЖКТ. В норме во влагалище встречаются редко (до 8% случаев). Играют роль в развитии у женщин БВ (в основном Fusobacterium nucleatum), вызывают периодонтиты, гингивиты, бактериемии, амниониты.  

Atopobium vaginae
Вид Atopobium vaginae относится к роду семейства Coriobacteriaceae. Представители вида - грамположительные анаэробные полиморфные кокки. Играют значимую роль в развитии у женщин БВ и ассоциированы с БВ на 95%. Кроме того вызывают воспалительные заболевания тазовых органов, инфекции мочеполовой и дыхательной систем. В настоящее время рассматривается влияние Atopobium vaginae на развитие анаэробных баланопоститов у мужчин.

Актуальность лабораторной диагностики дисбактериоза влагалища не вызывает сомнений. Причем существуют индивидуальные особенности развития этих патологических состояний, зависящие от состава условно-патогенной микрофлоры. Эти особенности необходимо учитывать при выборе пути лечения для каждой пациентки.

Для лабораторной диагностики дисбактериоза влагалища (БВ и др.) традиционно используют микроскопию мазка (ориентировочный метод) и посев с выделением культур анаэробных бактерий.

Классический культуральный метод с количественным выявлением анаэробов достаточно дорогостоящий и длительный по срокам получения результата. Анаэробы, ассоциированные с БВ, относятся к труднокультивируемым микроорганизмам, требующим специальных условий для роста на питательных средах. При наличии в образце персистирующих форм анаэробных бактерий, что встречается в последнее время все чаще, возможно получение ложноотрицательных результатов. Это связано с тем, что персистирующие бактерии не способны к росту на питательных средах, т.е. являются некультивируемыми формами.

«ПЦР в реальном времени» с количественным определением возбудителей – наиболее информативный, но также достаточно дорогой вариант исследования.

Лаборатория «ЛАГИС» предлагает оптимальный подход к лабораторной диагностике анаэробных бактерий – применение метода ПЦР с недорогим качественным определением возбудителей, но с использованием тест-систем с заданной чувствительностью.

Чувствительность ПЦР-тест-систем для выявления условно-патогенных анаэробов, ассоциированных с дисбактериозом влагалища - 104 КОЕ/мл и более. Использование таких тест-систем позволяет при положительном результате получать информацию о диагностически значимом количестве данных бактерий в образце.

Для определения концентрации лактобактерий создана тест-система на основе полуколичественной ПЦР.

Таким образом, при диагностике дисбактериозов (БВ и др.) для скринингового определения состава микрофлоры влагалища, можно порекомендовать комплексное ПЦР-исследование мазка с заднего свода влагалища на условно-патогенные бактерии и нормофлору:

1) мобилюнкусы, бактероиды, превотеллы, фузобактерии, атопобиум вагинальный, а также гарднереллы, микоплазмы, уреаплазмы и грибы рода кандида - положительный результат при количестве в пробе более 104 кл/мл

2) лактобактерии - три варианта ответа: менее 104, 104-106, более 106 кл/мл

При необходимости можно расширить это исследование до патогенных микроорганизмов (хламидии, гонококки, трихомонады и др.).

В дополнение к перечисленным ПЦР-исследованиям рекомендуется использовать и традиционный метод микроскопии мазка, который дает информацию о наличии ключевых клеток, лейкоцитозе и др. 


2. УРОГЕНИТАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННЫЕ МИКОПЛАЗМАМИ (УРЕАПЛАЗМАМИ)

Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis являются условно-патогенными микроорганизмами. Могут присутствовать в виде здорового носительства и участвовать в развитии инфекционного процесса, а также аутоиммунных заболеваний. Реализация патогенных свойств данных бактерий происходит при определенных условиях. Часто вызывают присоединившиеся инфекции. М. genitalium - патогенный микроорганизм.

Диагностика простым микроскопированием мазков невозможна – микоплазмы самые (!) мелкие бактерии, не имеющие клеточной стенки.

Не эффективны иммунологические методы:

1) Микоплазмы/уреаплазмы слабо иммуногенны, обладают высокой антигенной изменчивостью. Некоторые поверхностные антигены микоплазм идентичны таковым клеток тканей хозяина. Возникает смазанная картина иммунного ответа.

2) Антисыворотки против антигенов микоплазм/уреаплазм могут перекрестно реагировать с антигенами других микроорганизмов и клеток человека, что может быть причиной ложноположительных результатов.

3) При персистенции микоплазм/уреаплазм иммунный ответ макроорганизма отсутствует или искажен, так что лабораторный анализ АТ не информативен.

Современный подход в лабораторной диагностике микоплазм/уреаплазм – использовать два метода: ПЦР и выделение культур в посеве.

Культуральный метод (посев на специальной среде) обладает высокой специфичностью и дает информацию о чувствительности к антибиотикам. 
Культуральным методом выявляют M. hominis и Ureaplasma sp. (видотипирование уреаплазм возможно только методом ПЦР). M. genitalium и M. pneumoniae не растут на питательных средах.

Внимание: нередко микоплазмы/уреаплазмы теряют способность к росту на питательных средах - часто после проведения антибиотикотерапии, при персистенции. 
ПЦР диагностика – прямой, быстрый и надежный метод выявления микоплазм.

Наши ПЦР-тест-системы выявляют 104 кл/мл и более, т.е. диагностическое количество микоплазм/уреаплазм в пробе. Если получен положительный ответ, значит в пробе 104 кл/мл и более. Именно метод ПЦР сделал возможным выявление не только острых, но и персистирующих инфекций.

В случае подозрения на персистенцию микоплазм/уреаплазм для установления диагноза рекомендуется проводить ПЦР-определение до 3-х раз с интервалом 2 недели (не каждый раз выявляются, т.к. их количество при персистирующей форме колеблется от 102 до 105 кл/мл, а чувствительность ПЦР-тест-систем 104 кл/мл).

Сочетание положительного результата ПЦР-исследования с отрицательным результатом посева означает персистирующий микоплазмоз/уреаплазмоз (микоплазмы/уреаплазмы есть, но не способны расти на питательных средах).

Во время персистенции микоплазмы/уреаплазмы устойчивы к действию антибиотиков.
В этом случае оптимально проводить повторно посевы через 2 недели-месяц, после попытки манифестировать инфекцию (например, индукторами интерферона). 
При получении положительного результата посева (что будет означать выход микроорганизмов из персистенции) можно назначать лечение.

Особенности течения персистирующего микоплазмоза (уреаплазмоза):

• Во время персистенции микоплазмы (уреаплазмы) переходят в некультивируемую форму.
• Численность микоплазм (уреаплазм) при персистенции колеблется от 103 до 105 кл/мл и зависит от стадии месячного цикла женщины, от напряженности иммунитета, стрессов, переохлаждения и пр. Это приводит к тому, что методом ПЦР в пробах, взятых у одного пациента в разное время без лечения, могут быть разные результаты. Т.е. с течением времени микоплазмы (уреаплазмы) могут то обнаруживаться, то нет.
• Нередко микоплазмоз (уреаплазмоз) переходит в форму персистенции после лечения антибиотиками. Именно поэтому после лечения антибиотиками пациента необходимо обследовать не один раз, а 3-4 раза с интервалом в 1-3 месяца на предмет излеченности или возможной персистенции микоплазм (уреаплазм) после лечения.
• Лечение антибиотиками персистирующего микоплазмоза (уреаплазмоза) крайне малоэффективно, т.к. при персистенции микоплазмы (уреаплазмы) ведут строго внутриклеточное существование, со сниженным уровнем метаболизма, и поэтому практически недоступны для действия антибиотика.

Показания к терапии M. genitalium*

• Подтвержденная инфекция M.genitalium любой локализации.
• Наличие M. genitalium у полового партнера.
• При отсутствии возможности проведения тестов на M. genitalium у больных с клиническими проявлениями воспалительных заболеваний нижних отделов мочеполового тракта.

Показания к терапии U. urealyticum, U.parvum и M. hominis*

Лечение следует назначать, если, кроме микоплазм, других возбудителей не выявлено, при:

• наличии клинических и лабораторных признаков воспалительного процесса органов мочеполовой системы;
• предстоящих оперативных или других инвазивных лечебно-диагностических манипуляциях в области мочеполовых органов;
• отягощенном акушерско-гинекологическом анамнезе (невынашивание беременности, бесплодие, перинатальные потери и др.);
• осложненном течении настоящей беременности, предполагающим возможное инфицирование плода.

Лечение следует назначать при наличии клинических проявлений воспалительного процесса и в том случае, если U. urealyticum и M. hominis выявляются в количестве более 104 КОЕ/мл в титрах при культуральном исследовании.

Контроль излеченности проводится методом ПЦР через 4 недели после окончания терапии.

* В.Н.Прилепская, В.И.Кисина и др. «К вопросу о роли микоплазм в урогенитальной патологии», © «ГИНЕКОЛОГИЯ», том 09/№ 1/2007



3. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕРПЕСВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

После заражения герпесвирусами ЦМВ и ВПГ 1, 2 человек становится носителем этих вирусов пожизненно. Герпесвирусные инфекции могут протекать в острой и латентной формах.
Первичное заражение герпесвирусами опасно для беременных (высокая вероятность развития патологий плода).

ПЦР-диагностика ВПГ 1, 2

• В острой фазе вирусы простого герпеса, как правило, паразитируют в эпителиальных клетках слизистых оболочек и кожи, вызывают типичные (и атипичные) клинические проявления. Среди атипичных возможны бессимптомные формы. При первичной инфекции ВПГ 1, 2 обнаруживается методом ПЦР в пузырьках (или в трещинах при атипичном течении) максимум в течение 7 дней после первых проявлений. У носителей во время рецидивов – до 4-х дней. При сниженном иммунитете – до 21 дня.
Обнаружение вирусов методом ПЦР в пробе соскоба эпителия свидетельствует об острой фазе инфекции.

• Во время латентной фазы (ремиссии) вирусы простого герпеса персистируют в нервных ганглиях и отсутствуют в эпителиальных клетках, а значит, не выявляются методом ПЦР в соскобе. Клинических проявлений инфекции при этом нет или наблюдаются остаточные проявления (пузырьки могут заселяться неспецифической микрофлорой).

Таким образом, если вирусы не обнаружили методом ПЦР в соскобе эпителия, то это означает, либо латентную фазу герпесвирусной инфекции, либо отсутствие вирусов в организме. Проверить есть ли носительство можно только с помощью метода ИФА.

ПЦР-диагностика ЦМВ

Биологическим материалом для ПЦР-исследований могут быть: кровь, ликвор, моча, слюна, мокрота, грудное молоко, соскобы (урогенитальные, из зева), сперма, лаваж, биоптаты, в зависимости от формы заболевания. Для беременных адекватной пробой для ПЦР-исследования является соскоб из цервикального канала (при положительном результате – угроза плоду).  

ИФА-диагностика ВПГ 1, 2 и ЦМВ

Исследование сыворотки крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) на наличие антител к герпесвирусам поможет установить, есть ли носительство и фазу заболевания (первичный острый процесс, латенция или вторичное обострение, - рецидив).  

Первичное заражение

При первичном заражении на 5-7 день вырабатываются IgM, через 10-14 дней – низкоавидные IgG, затем постепенно авидность IgG возрастает и они становятся высокоавидными. IgM исчезают через 1 месяц, низкоавидные IgG – через 1-3 месяца, а IgG (поздние, высокоавидные) циркулируют в крови носителя пожизненно. Т.к. IgM вырабатываются, как правило, только при первичной инфекции, то и в лабораторной диагностике они являются маркерами первичной герпесвирусной инфекции. Из-за низкой специфичности IgM они могут перекрестно реагировать (с ревматоидным фактором, например), и давать ложноположительные результаты. Для исключения ошибки необходимо проверить наличие низкоавидных IgG или повторить исследование IgM через 2 недели (при развитии первичного процесса должны вновь выявиться IgM и появиться низкоавидные IgG). Если низкоавидные IgG не появились, а IgM выявились снова, то этот положительный результат надо считать ложным.

Наиболее специфичными маркерами первичной герпесвирусной инфекции являются низкоавидные IgG. Они никогда не вырабатываются при повторном заражении или рецидиве. Тест на авидность IgG дает информацию о том, выявились ли IgG и какие – низкоавидные или высокоавидные. (Термин авидность означает степень сродства антител к антигенам и, соответственно, силу связывания антител с антигенами). Низкоавидные IgG более специфичные антитела, чем IgM, поэтому при использовании теста на авидность IgG не возникает проблем с ложноположительными результатами.

Рецидив и реинфекция

Активация герпесвирусной инфекции у носителей, т.е. рецидивы, а также реинфекция сопровождаются:
  1) появлением и нарастанием титров IgG к предранним белкам вирусов (всегда), 
  2) нарастанием в 2-4 раза титра имеющихся поздних, высокоавидных IgG (не всегда).

IgG к предранним белкам вирусов вырабатываются в ответ на самое начало развития вирусного цикла в организме человека, на неструктурные предранние белки. Они появляются на 5-7 день активации вирусной инфекции и циркулируют в крови 1-2 месяца после наступления ремиссии. Это очень специфичные антитела, поэтому при их выявлении не возникает ложноположительных результатов. IgG к предранним белкам вирусов являются однозначными маркерами активности вирусной инфекции. Они вырабатываются как при первичной острой инфекции, так и во время рецидива и реинфекции.
Количество поздних IgG у носителей может варьировать в зависимости от стадии заболевания, от состояния иммунной системы пациента вообще и на момент обследования в частности. Например, при наличии иммуносупрессии, которую может вызывать длительное течение хронической вирусной инфекции, во время рецидива количество поздних IgG совсем не увеличивается, или увеличивается, но не в 4 раза, как при классическом иммунном ответе на рецидив. Поэтому количественный показатель IgG далеко не всегда обладает диагностической ценностью, даже в динамике.

Итак, для вирусоносителей единственный надежный тест для определения активности герпесвирусов это выявление IgG к предранним белкам вирусов (полуколичественно). Появление их в любом титре свидетельствует об активности вирусной инфекции. Увеличение титра через 1-3 недели свидетельствует о развитии рецидива, а уменьшение – о наступлении ремиссии. 
Выявление поздних IgG при отсутствии IgG к предранним белкам вирусов свидетельствует о спокойном носительстве, латентной фазе. 
Выявление IgM и низкоавидных IgG, предранних IgG при отсутствии поздних IgG, - свидетельствует о первичном инфекционном процессе.
Отсутствие поздних IgG, IgM и IgG к предранним белкам герпесвирусов, т. е. серонегативность в отношении данных вирусов, означает отсутствие как носительства, так и развития инфекции.

Лабораторная диагностика и интерпретация результатов определения в сыворотке крови антител классов М и G к антигенам вируса Эпштейна-Барр (ЕBV, ВЭБ)

Вирус Эпштейна-Барр относится к наиболее распространенным герпесвирусам, носительство в различных регионах достигает 100%. Однако актуальной является лабораторная диагностика данного вируса при дифференциальной диагностике инфекционного мононуклеоза, а также в поисках этиологии некоторых кардиологических, онкологических и др. патологий.

Острая фаза мононуклеоза характеризуется выявлением вируса Эпштейна-Барр методом ПЦР из мазка из зева. Однако наиболее точно выяснить стадию заболевания или носительство можно с помощью метода ИФА. В настоящее время различают 3 диагностически значимых антигена ЕBV – ранний (ЕА), капсидный (VСА) и ядерный (ЕВNА).

Определяя антитела к данным антигенам, а именно, - IgM, IgG к VCA, IgG к EA и IgG к EBNA, можно диагностировать стадию инфекции EBV: первичную, прошедшую (паст-инфекцию) и реактивацию.  

Наиболее адекватно эти маркеры выявляются с помощью тест-систем ВСМ производства США (высокая чувствительность и воспроизводимость результатов).

 

Интерпретация Капсидный антиген (VСА) Ранний антиген (ЕА) IgG Ядерный антиген (ЕВNА) IgG
IgM IgG
Отсутствие инфицирования - - - -
Очень ранняя первичная инфекция + - - -
Ранняя первичная инфекция + + + -
Поздняя первичная инфекция +/- + -/+ +
Паст-инфекция - + - +
Реактивация +/- + + +

Рекомендуется определение всех упомянутых серологических маркеров в комплексе, так как это повышает вероятность постановки точного диагноза и дает возможность выбора адекватной терапии.
Особую трудность представляет диагностика ЕВV – инфекции у иммуноскомпрометированных пациентов, в этом случае серологический профиль может быть сильно искажен и непоказателен. 
Для диагностики ЕВV – инфекции параллельно с определением серологических маркеров целесообразно выявление ДНК возбудителя методом ПЦР в крови или другом биоматериале (мазки из зева при инфекционном мононуклеозе).

Для постановки клинического диагноза необходимо сопоставлять результаты серологического тестирования с результатами других анализов, симптоматикой и анамнезом пациента.


4. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА

Chlamydia trachomatis способны вызывать уретриты, цервициты, цистоуретриты, вульвовагиниты, эндометриты, проктиты, эпидидимиты, хронические пиелонефриты, сальпингиты, восходящие хламидиозы с различными воспалениями органов малого таза, приводящими к образованию рубцовых изменений в фаллопиевых трубах, хроническому болевому синдрому, бесплодию, невынашиванию беремености, а также некоторые формы артрита, конъюнктивит, эндемическую трахому, паховую лимфогранулему, пневмонию у новорожденных. Внутриутробное инфицирование хламидиями приводит к различным патологиям плода (внутриутробная пневмония, менингит, ринофарингит, конъюнктивит, вульвовагинит, неврологические и дыхательные расстройства), а также отсроченные нарушения в разных системах органов. 
Особенности урогенитального хламидиоза: отсутствие характерных клинических проявлений, способность переходить в персистирующую форму и развиваться как восходящий хламидиоз (самой тяжелой формой восходящего хламидиоза является болезнь Рейтера).

По данным ВОЗ урогенитальный хламидиоз входит в первую тройку заболеваний, передаваемых половым путем. Лабораторная диагностика – единственный способ установить этиологический диагноз.

Рекомендуется использовать два метода: ПЦР и ИФА – последовательно или одновременно.

Биоматериалом для ПЦР-исследования на Chlamydia trachomatis является соскоб из цервикального или уретрального канала.
 

ПЦР – исследование соскоба из цервикального или уретрального канала на наличие Chlamydia trachomatis
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ результат ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ результат
  1. Можно поставить диагноз на основании:
    • анамнеза,
    • клинических проявлений и
    • положительного результата ПЦР- исследвания (специфичность 98%)
  2. Можно подтвердить результат выявлением IgA, IgG в сыворотке крови (интерпретацию см. ниже).
    Возможна смазанная картина иммунного ответа в случае длительного хламидиоза, - тогда можно доверить положительному ПЦР-результату.
    Отрицательный результат ИФА исследование крови возможен, если Ig еще не успели наработаться после заражения хламидиями.

При наличии клинических проявлений можно подозревать восходящий хламидиоз, при котором хламидии «уходят» из цервикального и уретрального каналов и поэтому не определяются в этих пробах методом ПЦР.

Чтобы это проверить надо провести ИФА исследование крови (сыворотки) на наличие IgA, IgG к хламидиям

Интерпретация результатов ИФА исследование крови (сыворотки крови) на наличие IgA, IgG

  1. Выявление IgA свидетельствует о хламидиозе:
    • в постоянно низких титрах - о персистенции хламидий,
    • в нарастающих титрах – о развитии хламидиоза.
  2. Выявление только IgG свидетельствует о давно перенесенном хламидиозе

Для получения достоверного результата – использовать принцип парных сывороток!

5. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЛИСТЕРИОЗА

В методических указаниях Комитета Здравоохранения №11, 2001 г. «Листериоз» для выявления листериоза беременной рекомендованы методы ИФА и ПЦР. 

Методом ИФА антитела к листериям удобно смотреть при обследовании беременных на TORCH-инфекции (к стандартному перечню можно прибавлять антитела к листериям). Антитела к листериям могут выявляться как при текущем листериозе, так и после заболевания несколько месяцев, а также свидетельствовать о носительстве. Так что положительный результат ИФА-исследования не обязательно свидетельствует о текущем листериозе. 

После первичного заражения, момент которого трудно установить и которое может пройти бессимптомно, листерии довольно быстро достигают органов и тканей, а в случае беременности – плод. Зараженный плод может вызвать вторую волну заболевания у беременной. В этом случае у беременной с температурой именно проба из цервикального канала и влагалища даст положительный ответ в ПЦР-исследовании.

Таким образом, методом ПЦР необходимо проверить на наличие листерий соскоб/мазок из цервикального канала и заднего свода влагалища. При наличии клинических проявлений типа ОРЗ можно проверить листерии также в соскобе/мазке с миндалин (зев это входные ворота листериоза).
Для беременных положительный ПЦР-результат урогенитальной пробы однозначно указывает на угрозу листериоза плода. Отрицательный ПЦР-результат при наличии АТ к листериям свидетельствует о том, что листериоза плода нет, но возможно есть листериоз беременной. В таком случае необходимо провести повторное исследование урогенитальной пробы методом ПЦР через 2 недели-месяц. Важно следить за тем, чтобы в случае текущего листериоза или носительства у беременной листерии не угрожали плоду.

Необходимо отметить, что для диагностики листериоза беременной проба крови для ПЦР-исследования на листерии не является репрезентативной. Отрицательный ПЦР-результат в пробе крови не исключает диагноз «листериоз беременной». Кровь является адекватной пробой для ПЦР-исследования на листерии только при нервной и септической формах листериоза, а также для новорожденных.

Таким образом, с целью исключить листериоз беременной необходимо провести исследование крови на антитела к листериям методом ИФА и проверить наличие листерий в урогенитальном соскобе/мазке методом ПЦР, а при наличии клинических проявлений типа ОРЗ можно проверить также наличие листерий методом ПЦР в соскобе/мазке с миндалин. Отрицательные результаты этих исследований исключают листериоз беременной.


6. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ТОКСОПЛАЗМОЗА

Токсоплазмоз входит в группу перинатальных TORCH-инфекций, обязательных для обследования. Поэтому при подготовке к беременности и для беременных актуально определять:

1. Есть ли риск первичного заражения этой инфекцией (серонегативность). 
2. Есть ли носительство токсоплазм (наличие высокоавидных IgG).
3. Есть ли на момент обследования острая первичная инфекция (наличие IgM и низкоавидных IgG). Для развивающегося плода она чрезвычайно опасна.
4. Есть ли на момент обследования обострение хронической инфекции (нарастание количества IgG).

Для подтверждения первичной инфекции требуется определение авидности IgG, т.к. только низкоавидные IgG являются однозначными маркерами первичной инфекции, а IgM могут определяться и более года у больных хроническим токсоплазмозом, а также давать ложноположительные перекрестные реакции.

При отсутствии IgG, у серонегативных беременных пациенток, нет защиты плода: необходимо следить за возможным появлением IgM и низкоавидных IgG, - свидетелями первичной инфекции.


7. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КРАСНУХИ

Краснуха входит в группу перинатальных TORCH-инфекций, обязательных для обследования. Поэтому при подготовке к беременности и для беременных актуально определять, есть ли иммунитет против краснухи или существует риск заражения. Для этого необходимо проверить наличие IgG. 
После перенесенной краснухи вырабатывается пожизненный иммунитет, который обеспечивают IgG. После вакцинации IgG циркулируют в крови до 5 лет. IgG проходят через плаценту и защищают плод.

Для серонегативных пациенток при подготовке к беременности рекомендуется провести вакцинацию против краснухи.

У беременных серонегативных пациенток нет защиты плода (отсутствуют IgG), поэтому при ведении беременности необходимо следить за возможным появлением IgM и низкоавидных IgG,- свидетелями первичной инфекции, особенно после контакта с больным краснухой.

Для диагностики текущей краснухи или исключения заражения краснухой после контакта наиболее специфичным тестом является определение авидности антител IgG. Этот тест хорошо дополняет исследования IgM. Например, в случае сомнений в текущей краснухе при получении результата IgM – слабоположительны. Если при этом низкоавидных антител нет, причем в динамике нет изменений, то текущей краснухи нет. А слабоположительные IgM следует считать ложноположительным результатом (следствие перекрестной реакции, например, с ревматоидным фактором). 


 

Вернуться